Un método para monitorizar el desarrollo de una enfermedad en un paciente,

en donde dicha enfermedad seselecciona del grupo que comprende:

a) traumatismo de tejidos

b) una lesión por reperfusión como resultado de infarto de miocardio o ictus, trasplante de órganos o cualquierotra operación quirúrgica,

c) cáncer o metástasis de cáncer, y

d) un estado inflamatorio.

y en donde se usa como biomarcador la CD73 extraída de un líquido tisular de dicho paciente, en donde elmétodo se repite en dos o más tiempos y se compara el nivel de CD73 de la muestra, con el de un análisisprevio, y se usa para indicar el agravamiento de la enfermedad o para indicar la remisión de la enfermedad, endonde un aumento del nivel del la CD73 indica remisión de la enfermedad y una disminución del nivel de la CD73indica agravamiento de la enfermedad.

Un nuevo biomarcador para monitorizar el desarrollo de enfermedades y evaluar la eficacia de terapias.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se refiere al uso de la proteína CD73 en líquidos tisulares como un biomarcador para evaluar el desarrollo de enfermedades. También se describen métodos para determinar la proteína CD73 en un líquido tisular.

FUNDAMENTO DE LA INVENCIÓN

Las publicaciones y otros materiales usados en la presente memoria para ilustrar el fundamento de la invención, y en particular, los casos para proporcionar detalles adicionales respecto a la práctica de la invención se incorporan como referencia.

CD73 es una enzima de la superficie celular que tiene actividad de 5'-ectonucleotidasa. Por tanto media la conversión de nucleótidos de purina monofosforilados en los nucleósidos correspondientes. Por ejemplo, la desfosforilación de AMP a adenosina es catalizada por CD73. La CD73 está presente también en una forma soluble en el plasma y la enzima soluble tiene la misma actividad enzimática que la forma unida a membranas.

La adenosina es uno de los reguladores fisiológicos de la permeabilidad celular endotelial [1, 2], y por tanto puede estar implicada en la patogénesis de muchos trastornos como lesión pulmonar aguda (LPA) , síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) , síndrome de dificultad respiratoria (SDR) y la enfermedad mal de altura. En la inflamación, en traumatismos y en el cáncer también tienen lugar cambios en la permeabilidad endotelial. La CD73 controla la permeabilidad endotelial vía un mecanismo mediado por adenosina en condicionas normales, en hipoxia y en lesión pulmonar inducida por un aparato respirador [3-7].

La CD73 es inducida por ciertas citoquinas. Del modo más importante se ha descrito que los interferones alfa y beta aumentan la expresión y la actividad de CD73 en seres humanos (8, WO 2004/084933, 11) . Estas citoquinas se usan también en clínica para tratar diferentes enfermedades. El interferón alfa, por ejemplo, se usa para tratar ciertas infecciones y enfermedades malignas, tales como hepatitis y leucemia de células pilosas. El interferón beta, por otro lado, se usa ampliamente para tratar la inflamación en la esclerosis múltiple. Sin embargo, en muchos casos la respuesta beneficiosa al tratamiento con interferón sólo se aprecia en una subpoblación de pacientes, y también los pacientes que responden inicialmente pueden más tarde ser refractarios al tratamiento. Por tanto, existe la necesidad de desarrollar biomarcadores fácilmente medibles que reflejen la capacidad de respuesta biológica del cuerpo al tratamiento.

La solicitud de patente publicada WO 2004/084933 describe el uso de citoquinas para inducir la expresión endotelial de CD73 y elevar subsiguientemente el nivel de adenosina en un individuo. Está descrito el uso de interferón beta en combinación con monofosfato de adenosina (AMP) en el tratamiento de insuficiencia multiorgánica (IMO) en ratas.

La solicitud de patente publicada WO 2007/042602 describe el uso de interferón beta puro para el tratamiento o prevención de la lesión por isquemia-reperfusión (LIR) o insuficiencia multiorgánica (IMO) .

Se sabe que las estatinas, agentes hipolipidémicos usados para disminuir el nivel de colesterol inducen la expresión de CD73 en los pacientes.

También es conocido el uso de CD73 como un marcador tanto de la inflamación general como de la local en la artritis reumatoide [12].

Sin embargo, en la técnica anterior no hay descripciones referentes a la medida de la proteína CD73 en suero o cualquier otro líquido tisular para uso como un biomarcador para monitorizar el desarrollo de enfermedades o para evaluar la eficacia de las terapias.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención hemos demostrado que la actividad de la CD73 soluble se puede usar para monitorizar la gravedad y la capacidad de respuesta de una enfermedad a la terapia. Por lo tanto, creemos que el análisis del nivel de expresión o actividad de la CD73 por cualquier técnica puede proporcionar una valiosa información del curso de la una enfermedad o de la respuesta al tratamiento.

La presente invención se refiere a un método para monitorizar el desarrollo de una enfermedad en un paciente, en donde dicha enfermedad se selecciona del grupo que consiste en:

a) traumatismo de tejidos

b) una lesión por reperfusión resultante de infarto de miocardio o ictus, trasplante de órganos o cualquier otra

operación quirúrgica,

c) cáncer o metástasis de cáncer, y

d) un estado inflamatorio,

y en donde se usa como biomarcador la CD73 extraída de un líquido tisular de dicho paciente, en donde el método se repite en dos o más tiempos y se compara el nivel de CD73 de la muestra, con el de un análisis previo, y se usa para indicar el agravamiento de la enfermedad o para indicar la remisión de la enfermedad, en donde un aumento del nivel del la CD73 indica remisión de la enfermedad y una disminución del nivel de la CD73 indica agravamiento de la enfermedad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1. La lesión por isquemia-reperfusión del intestino induce daño tisular primario y secundario. La arteria mesentérica fue ocluida durante 30 minutos y luego se permitió la reperfusión (restablecimiento del flujo sanguíneo) durante 4 horas. Las microfotografías representativas del (A) intestino y (B) pulmones de ratones de tipo natural (TN, es decir, no modificados genéticamente) después de la operación falsa (solamente laparotomía) y después de la inducción de lesión por isquemia-reperfusión (IR) .

Figura 2. La actividad de CD73/5'NT sobre los pulmones se correlaciona inversamente con la actividad de la enfermedad. Ratones CD73/5NT-/-y sus compañeros de camada de tipo natural (TN) , ) fueron sometidos a una operación falsa o a 30 minutos de isquemia intestinal seguida por 240 minutos reperfusión (por LPA) . En otros grupos, los animales expuestos a LPA fueron tratados previamente con IFN-º. (A) Actividad de CD73/5'NT sobre el pulmón (valor medio ± error estándar, mmol de AMP hidrolizado por miligramo de proteína por hora) medida en lisados de tejidos por cromatografía en capa delgada (CCD) . (B) Análisis semicuantitativo de fuga vascular [ (exudación de dextrano conjugado con fluorescein-isotiocianato (FITC) ] en los pulmones medido en cortes histológicos usando análisis de imagen (% del área del corte que exhibe fluorescencia por encima de un valor de fondo elegido arbitrariamente, valores medios ± error estándar) . También se muestran microfotografías representativas de los grupos indicados. Barra, 50 µm. *p<0, 05. **p<0, 01.

Figura 3. La actividad de CD73/5'NT en paciente con SRIS que sufren pancreatitis. Los datos muestran la actividad de CD73/5'NT frente al grado de gravedad de la pancreatitis: 0 = pancreatitis suave; 1 = pancreatitis grave sin insuficiencia del órgano; 2 = pancreatitis grave con insuficiencia del órgano; 3 = control sano.

Figura 4. Actividad de CD73/5'NT' frente a la estancia total en la unidad de tratamiento intensivo (UTI) para pacientes con todos los grados de pancreatitis.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Definiciones y realizaciones preferidas:

El término "paciente" o "individuo" se refiere a un ser humano o a un sujeto animal.

El término "monitorizar el desarrollo de una enfermedad" significa que el agravamiento de la enfermedad (es decir, el empeoramiento de la enfermedad) o la remisión de la enfermedad (es decir, la recuperación del paciente) pueden ser detectados comparando un nivel medido del biomarcador con un valor de control o una o más medidas previas, realizadas en diferentes tiempos, del nivel del biomarcador en el mismo paciente. Por ejemplo, se puede usar un menor nivel del biomarcador, comparado con el resultado de una medida previa o con un valor de control para indicar el agravamiento de la enfermedad, mientras que se usa un mayor nivel del biomarcador, comparado con el resultado de una medida previa o con un valor de control para indicar la remisión de la enfermedad. Sin embargo, probablemente hay ciertas enfermedades que afectan al nivel del biomarcador en el modo contrario.

La expresión "líquido... [Seguir leyendo]

1. Un método para monitorizar el desarrollo de una enfermedad en un paciente, en donde dicha enfermedad se selecciona del grupo que comprende:

a) traumatismo de tejidos 5 b) una lesión por reperfusión como resultado de infarto de miocardio o ictus, trasplante de órganos o cualquier

otra operación quirúrgica,

c) cáncer o metástasis de cáncer, y

d) un estado inflamatorio.

y en donde se usa como biomarcador la CD73 extraída de un líquido tisular de dicho paciente, en donde el

método se repite en dos o más tiempos y se compara el nivel de CD73 de la muestra, con el de un análisis previo, y se usa para indicar el agravamiento de la enfermedad o para indicar la remisión de la enfermedad, en donde un aumento del nivel del la CD73 indica remisión de la enfermedad y una disminución del nivel de la CD73 indica agravamiento de la enfermedad.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la enfermedad es síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) , lesión pulmonar aguda (LPA) , insuficiencia multiorgánica (IMO) , lesión por isquemiareperfusión (LIR) o reacción adversa a medicamentos (RAM) .