Un sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 modificado conjugado con una proteína portadora,

en el que: (a) entre el 2-9% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) entre el 35-55% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 9.

Sacáridos capsulares meningocócicos hipo- e hiper-acetilados

Campo técnico La presente invención pertenece al campo de los sacáridos capsulares meningocócicos y sus derivados conjugados.

Técnica anterior

Los polisacáridos son moléculas biológicas importantes y se han usado ampliamente en la industria farmacéutica para la prevención y el tratamiento de enfermedades. Por ejemplo, los polisacáridos capsulares se han usado durante muchos años en vacunas contra bacterias encapsuladas tales como meningococos (Neisseria meningitidis) , pneumococos (Streptococcus pneumoniae) y Hib (Haemophilus influenzae tipo B) .

Para potenciar la inmunogenicidad de polisacáridos capsulares, particularmente en niños, se desarrollaron vacunasde conjugado. Éstas comprenden un sacárido capsular conjugado con una proteína portadora [por ejemplo, refs. 13]. La conjugación convierte antígenos independientes de T en antígenos dependientes de T.

El sacárido capsular del serogrupo W135 de Neisseria meningitidis ("MenW135") comprende un polímero de unidades de disacárido de ácido siálico-galactosa:

º4) -D-Neup5Ac (7/9OAc) -a- (2º6) -D-Gal-a- (1º

en la que "Neu" se refiere a ácido neuramínico, comúnmente conocido como ácido siálico.

Similarmente, el sacárido capsular del serogrupo Y de Neisseria meningitidis (MenY) comprende un polímero de unidades de disacárido de ácido siálico-glucosa:

º4) -D-Neup5Ac (7/9OAc) -a- (2º6) -D-Glc-a- (1º

En la naturaleza se ha encontrado que estos sacáridos capsulares están O-acetilados en alguna de las posiciones 7 y 9 de algunos de los residuos de ácido siálico. La O-acetilación del sacárido W135 se "informó por primera vez" en la referencia 4, informándose de la O-acetilación en las posiciones O-7 y O-9. También se observó la acetilación en las posiciones O-7 y O-9 para el sacárido del serogrupo Y, aunque los autores observaron que el trabajo previo había indicado O-acetilación en las posiciones O-7, O'-3 o O'-4. Otros estudios sobre el contenido de O-acetilo de los sacáridos se informaron en la referencia 5.

La referencia 5 informa que "hay un cuerpo creciente de evidencia de que la O-acetilación no es importante para provocar una respuesta de anticuerpos protectores" para el serogrupo W135. A diferencia, la referencia 6 informa de que hay "evidencia de que la O-acetilación afecta la inmunogenicidad de vacunas de polisacáridos". Sin embargo, con la idea de que "la O-acetilación del CPS [polisacárido capsular] puede no ser importante en provocar inmunidad protectora", los autores de la referencia 5 investigaron la acetilación en los serogrupos W135 y Y. Entre sus resultados no se observó cambio en la O-acetilación para estos dos serogrupos después del almacenamiento en condiciones básicas durante 9 días a temperatura ambiente.

La referencia 7 informó de que "el estado de O-acetilación de las cepas W135 y Y" usadas en vacunas de polisacárido tetravalentes "no se había informado" previamente. Los autores continuaron informando en la referencia 8 que "se sabe poco sobre el estado de O-acetilación de los serogrupos W135 y Y", y establecieron que más trabajo "puede proporcionar percepciones útiles en la formulación de vacunas óptimas", aunque no se elaboraron la naturaleza de tal trabajo adicional y las posibles percepciones. La referencia 9 informa de que la "relevancia de la Oacetilación para el desarrollo de vacunas sigue siendo incierta" para el serogrupo W135. La referencia 6 está de acuerdo con que los datos "sobre el impacto de la O-acetilación sobre la inmunogenicidad de los polisacáridos de los serogrupos W-135 o Y no están todavía disponibles" (enero de 2004) .

Esta confusión y la falta de información sobre los serogrupos W135 y Y contrasta con los otros dos serogrupos para los que las vacunas de sacárido están actualmente en uso. Se ha informado ampliamente de la variación en la Oacetilación del polisacárido capsular del serogrupo C de Neisseria meningitidis [10, 11], pero no parece tener ningún impacto negativo sobre la inmunogenicidad, ya que los productos Menjugate™ y NeisVac-C™ son ambos eficaces. A diferencia, la des-O-acetilación del polisacárido del serogrupo A se ha asociado a una "espectacular reducción en la inmunogenicidad" [12].

Un objeto de la invención es proporcionar derivados de sacáridos capsulares que puedan usarse para preparar composiciones inmunogénicas, particularmente cuando se conjuguen con proteínas portadoras, y particularmente para los serogrupos W135 y Y meningocócicos.

Divulgación de la invención

A pesar de la incertidumbre referente a la función de la O-acetilación en vacunas para los serogrupos W135 y Y meningocócicos, los inventores han encontrado que la O-acetilación puede ser de hecho relevante, particularmente durante la preparación de vacunas de conjugado. La invención se basa en el descubrimiento de que los sacáridos capsulares modificados derivados de MenW135 y MenY que tienen niveles de O-acetilación alterados en las posiciones 7 y 9 de los residuos de ácido siálico pueden usarse para preparar composiciones inmunogénicas. Con respecto a los sacáridos nativos sin modificar, los derivados de la invención se seleccionan preferencialmente durante la conjugación con proteínas portadoras. Además, los conjugados de estos derivados muestran inmunogenicidad mejorada en comparación con polisacáridos nativos.

Sacáridos modificados

Por tanto, la invención proporciona un sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 modificado según la reivindicación 1. Similarmente, la invención proporciona un sacárido capsular meningocócico del serogrupo Y modificado según la reivindicación 2.

Sacáridos de la invención

Más generalmente, la invención proporciona un sacárido capsular meningocócico modificado conjugado con una proteína portadora en el que el sacárido comprende n o más unidades de repetición de la unidad de disacárido { [ácido siálico] - [hexosa] } en la que la hexosa es tanto galactosa como glucosa y n es un número entero de 1 a 100, y en la que (a) x% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) si la hexosa es galactosa, y% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 9, y si la hexosa es glucosa, y% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 9.

El valor de x es entre 2-9.

El valor de y es entre 35-55.

Preferentemente, x > m, en la que m se selecciona de: 0, 0, 5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8.

Preferentemente, el ácido siálico es ácido N-acetilneuramínico.

Si la hexosa es galactosa, la unidad de disacárido { [ácido siálico] - [hexosa] } es preferentemente:

º4) -D-Neup5Ac (7/9OAc) -a- (2º6) -D-Gal-a- (1º

Si la hexosa es glucosa, la unidad de disacárido { [ácido siálico] - [hexosa] } es preferentemente:

º4) -D-Neup5Ac (7/9OAc) -a- (2-6) -D-Glc-a- (1º

El sacárido capsular meningocócico modificado está conjugado con una proteína portadora. En tales conjugados: (i) entre el 2-9%, preferentemente entre el 4-8%, más preferentemente entre el 5-7%, incluso más preferentemente aproximadamente el 6% de los residuos de ácido siálico están O-acetilados en la posición 7; (ii) entre el 35-55%, preferentemente entre el 40-50%, más preferentemente entre el 42-46%, incluso mas preferentemente aproximadamente el 43% (si la hexosa es Gal) o aproximadamente el 45% (si la hexosa es Glc) de los residuos de ácido siálico están O-acetilados en la posición 9.

La invención también proporciona una composición que comprende a moléculas de sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 en las que el número promedio de residuos de ácido siálico por molécula de sacárido capsular es b, y en la que: (a) x% de los a·b residuos de ácido siálico del serogrupo W135 en la composición están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) y% de los a·b residuos de ácido siálico del serogrupo W135 en la composición están O-acetilados en la posición 9, y en la que x y y son como se definen anteriormente.

La invención también proporciona una composición que comprende a moléculas de sacárido capsular meningocócico del serogrupo Y en... [Seguir leyendo]

1. Un sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 modificado conjugado con una proteína portadora, en el que: (a) entre el 2-9% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) entre e.

3. 55% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 9.

5 2. Un sacárido capsular meningocócico del serogrupo Y modificado conjugado con una proteína portadora, en el que

(a) entre el 2-9% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) entre e.

3. 55% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 9.

3. El sacárido capsular meningocócico modificado de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que entre el 4-8% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 7.

10 4. El sacárido capsular meningocócico modificado de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que entre el 4050% de los residuos de ácido siálico en el sacárido están O-acetilados en la posición 9.

5. Un sacárido capsular meningocócico modificado conjugado con una proteína portadora, en el que el sacárido comprende n o más unidades de repetición de la unidad de disacárido: [ácido siálico] - [hexosa]

en la que la hexosa es tanto galactosa como glucosa y n es un número entero de 1 a 100, y en la que:

(a) x% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 7; y/o

(b) si la hexosa es galactosa, y% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición

están O-acetilados en la posición 9, y si la hexosa es glucosa, y% de los residuos de ácido siálico en dicha 20 n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 9, en la que: cuando la hexosa es galactosa, x es entre 2-9 y y es entr.

3. 55; y si la hexosa es glucosa, x es entre 29, y es entr.

3. 55.

6. El sacárido de la reivindicación 5, en el que la hexosa es galactosa, 6±0, 6% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 7 y 43±4, 3% de los residuos de ácido siálico 25 en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 9.

7. El sacárido de la reivindicación 5, en el que la hexosa es glucosa, 6±0, 6% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 7 y 45±4, 5% de los residuos de ácido siálico en dicha n o más unidades de repetición están O-acetilados en la posición 9.

8. Una composición que comprende a moléculas de sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135, en la

que (i) el número promedio de residuos de ácido siálico por molécula de sacárido capsular es b, y en la que: (a) entre el 2-9% de los a-b residuos de ácido siálico del serogrupo W135 en la composición están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) entre e.

3. 55% de los a-b residuos de ácido siálico del serogrupo W135 en la composición están O-acetilados en la posición 9; y (ii) el sacárido está conjugado con una proteína portadora.

9. Una composición que comprende una moléculas de sacárido capsular meningocócico del serogrupo Y, en la que (i) el número promedio de residuos de ácido siálico por molécula de sacárido capsular es b, y en la que: (a) entre el 2-9% de los a-b residuos de ácido siálico del serogrupo Y en la composición están O-acetilados en la posición 7; y/o (b) entre e.

3. 55% de los a-b residuos de ácido siálico del serogrupo Y en la composición están O-acetilados en la posición 9; y (ii) el sacárido está conjugado con una proteína portadora.

10. Un sacárido que comprende n o más repeticiones de la siguiente unidad de disacárido: en la que:

- n es un número entero de 1 a 100,

- X y Y son grupos diferentes seleccionados de -H y -OH,

- R1 se selecciona independientemente de -H y -COCH3 y pueden ser iguales o diferentes en cada unidad de disacárido,

- R2 se selecciona independientemente de -H y -COCH3 y pueden ser iguales o diferentes en cada unidad de disacárido, y,

- cuando X es -OH y Y es -H, (a) 2-10% de R1 son -COCH3 y/o (b.

3. 55% de R2 son -COCH3,

- cuando X es -H y Y es -OH, (a) 2-9% de R1 son -COCH3 y/o (b.

3. 55% de R2 son -COCH3,

y en la que el sacárido está conjugado con una proteína portadora.

11. El sacárido de cualquier reivindicación precedente, en el que el sacárido tiene un grado de polimerización promedio inferior a 30.

12. El sacárido de cualquier reivindicación precedente, en el que la proteína portadora se selecciona del grupo que consiste en: toxoide diftérico, toxoide tetánico, proteína D de H. influenzae y CRM197.

13. Una composición inmunogénica que comprende (a) un sacárido capsular modificado conjugado de cualquier reivindicación precedente y (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. La composicion de la reivindicación 13 en forma acuosa.

15. La composición de la reivindicación 13 en forma liofilizada.

16. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 que comprende ademas un antígeno de sacárido capsular del serogrupo C de N. meningitidis.

17. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16 que comprende ademas un antígeno de sacárido capsular del serogrupo A de N. meningitidis.

18. La composición de la reivindicación 17, en la que el antígeno de serogrupo A es un sacárido modificado en el que uno o más de los grupos hidroxilo en el sacárido nativo han sido sustituidos por un grupo de bloqueo.

19. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18 que comprende además un antígeno del serogrupo B de N. meningitidis.

20. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 19 que comprende además un antígeno de sacárido de Haemophilus influenzae tipo B.

21. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 20 que comprende además un antígeno de

Streptococcus pneumoniae.

22. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 21 que comprende además uno o más de: un antígeno del virus de la hepatitis A; un antígeno del virus de la hepatitis B; un antígeno de Bordetella pertussis; un toxoide diftérico; un toxoide tetánico; y/o un antígeno del virus de la poliomielitis.

23. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 22 para su uso como un medicamento.

24. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 22 para su uso en un procedimiento para producir una respuesta de anticuerpos en un mamífero.

25. El uso de un sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 modificado conjugado y/o un sacárido capsular meningocócico del serogrupo Y modificado conjugado como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la preparación de un medicamento para proteger contra meningitis meningocócica.

26. Un procedimiento para preparar un conjugado inmunogénico que comprende las etapas de: (1) proporcionar un sacárido capsular meningocócico del serogrupo W135 o del serogrupo Y de partida y una proteína portadora, estando cualquiera de los dos o ambos opcionalmente modificados para volverse reactivo (s) contra el (os) otro (s) ;

(2) formar un enlace covalente entre el sacárido y la proteína portadora; y (3) purificar los glicoconjugados resultantes, aumentando entre las etapas (1) y (3) el grado de O-acetilación en la posición 9 de residuos de ácido siálico en el sacárido de partida a.

3. 55%.