Poliaminoácido para usar como adyuvante.

Un copolímero de injerto de poli(ácido γ-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina para usar como adyuvante parauna vacuna,

donde el poli(ácido γ-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene untamaño de 100 nm - 500 nm.

Poliaminoácido para usar como adyuvante.

Campo técnico

La presente invención se refiere al uso de un poliaminoácido como adyuvante, al uso de un poliaminoácido como adyuvante para la fabricación de una vacuna, y a una vacuna que comprende un poliaminoácido como adyuvante. La presente invención se refiere además a una nanopartícula en la que se inmoviliza un antígeno y a su uso como una vacuna.

Antecedentes Se han desarrollado y usado diversas vacunas para prevenir y tratar una amplia variedad de enfermedades, incluyendo enfermedades víricas. Sin embargo, cuando un antígeno tal como una proteína vírica se administra sólo a un organismo vivo, la estabilidad de la molécula de antígeno en el organismo vivo es baja y la eficacia de su incorporación a las células es insuficiente. Después se han realizado esfuerzos en vacunoterapias actuales, por ejemplo administrando una mezcla formada por emulsificación con un vehículo en partículas apropiado o agente inmunoestimulante (adyuvante) . Sin embargo, no ha habido por ejemplo publicación alguna de un caso en el que un adyuvante preexistente se use exitosamente para una vacuna HTLV-1 en una infección por HTLV-1. Esto es porque la actividad de los linfocitos T citotóxicos (CTLs) frente al HTLV-1 y la frecuencia de su existencia son bajas. Además, se han hecho intentos por ejemplo para tratar una infección con un virus tal como el VIH o un cáncer en un paciente induciendo CTLs que atacan específicamente a las células infectadas o células cancerosas. En tal tratamiento, se considera que es importante si los CTLs se pueden inducir eficazmente. Con este fin se usa generalmente un adyuvante tal como adyuvante de Freund o hidróxido de aluminio. Sin embargo, ningún resultado satisfactorio se ha logrado con respecto a la seguridad o eficacia. Por tanto no se ha publicado que un poliaminoácido, en particular poli (ácido y-glutámico) , presenta un efecto excelente como adyuvante tal como se describe en la presente memoria.

Recientemente, se han promovido investigaciones y desarrollo de nanopartículas porque se espera que las nanopartículas desempeñen funciones novedosas en diversos campos debido a su tamaño. También se ha tratado de utilizar nanopartículas para terapias. Por ejemplo, una nanopartícula se usa como un vehículo para un fármaco en algunos estudios (ver los Documentos de Patente 1 y 2) . Sin embargo, existe la preocupación por la influencia de la nanopartícula en un organismo vivo, porque su comportamiento en el organismo no se ha dilucidado todavía y, por tanto, la toxicidad o seguridad es desconocida. Es esencial para la contribución real al servicio médico desarrollar prácticamente una nanopartícula biodegradable que pueda sustituir a las nanopartículas no degradables. También ha habido preocupación de que se pierda la actividad de un antígeno, por ejemplo por desnaturalización o degradación tras la unión del antígeno a una nanopartícula, y la nanopartícula no puede mostrar la función como un adyuvante. Por tanto, no ha habido ninguna publicación sobre el uso, como adyuvante, de un poliaminoácido, en particular poli (ácido y-glutámico) , que se prepara como una nanopartícula, una nanopartícula en la que se inmoviliza un antígeno, o su uso como una vacuna como se describe aquí.

Documento de Patente 1: JP-A-92870/1994

Documento de Patente 2: JP-A-256220/1994

La publicación MATSUSAKI M ET AL (Chemistr y Letters, Chemical Society of Japan, vol. 33, no. 4, 1 de Enero de 2004) se refiere a “Bionanopartículas Establemente Dispersas y Superficialmente Funcionales Preparadas Autoensamblando Polímeros Anfipáticos de Poli (ácido y-glutámico) Hidrofílico que Lleva Aminoácidos Hidrofóbicos”.

Descripción de la invención Problemas a resolver por la invención Los problemas a resolver por la presente invención son proporcionar un adyuvante seguro y eficaz para una vacuna, así como proporcionar una vacuna que utiliza el mismo.

Medios para resolver los problemas Como resultado de estudios intensivos en vista de la situación descrita anteriormente, los presentes inventores han descubierto que un poliaminoácido, en particular poli (ácido y-glutámico) , promueve la diferenciación y maduración de una célula dendrítica, es decir, actúa como un adyuvante, además la acción se aumenta en la preparación como nanopartículas. Por lo tanto, la presente invención se ha completado.

La presente invención proporciona:

(1) Un copolímero de injerto de poli (ácido y-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina para usar como un adyuvante para una vacuna, donde el poli (ácido y-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene un tamaño de 100 nm – 500 nm.

(2) Una composición farmacéutica que comprende un copolímero de injerto de poli (ácido y-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina para usar como un adyuvante para una vacuna, donde el poli (ácido y-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene un tamaño de 100 nm – 500 nm.

(3) Un copolímero de injerto según el apartado (1) o una composición según el apartado (2) donde un antígeno viral se inmoviliza en la nanopartícula.

(4) Un copolímero de injerto o una composición según el apartado (3) , donde el antígeno viral se selecciona del grupo consistente en un antígeno retroviral, un antígeno de virus influenza, un antígeno de flavivirus, un antígeno del virus de la diarrea y un antígeno de coronavirus.

(5) Un copolímero de injerto o una composición según el apartado (4) , donde el antígeno viral es un antígeno retroviral.

(6) Un copolímero de injerto o una composición según el apartado (5) , donde el antígeno retroviral es un antígeno VIH.

(7) Un copolímero de injerto o una composición según uno cualquiera de los apartados (3) - (6) , donde el antígeno se incorpora a la nanopartícula.

(8) Un copolímero de injerto o una composición según uno cualquiera de los apartados (3) - (6) , donde el antígeno está presente sobre la superficie de la nanopartícula.

(9) Un copolímero de injerto o una composición según uno cualquiera de los apartados (3) a (8) para la inmunización de un sujeto o para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad en un sujeto.

(10) Un copolímero de injerto o una composición según el apartado (9) , donde la enfermedad es VIH.

Efectos de la invención La presente invención proporciona el uso, como adyuvante, de un copolímero de injerto de poli (ácido y-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina, donde el poli (ácido y-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene un tamaño de 100 nm – 500 nm, que es muy segura porque es biodegradable, su uso para la fabricación de una vacuna, así como una vacuna que comprende el copolímero de injerto como adyuvante.

Breve descripción de los dibujos La Fig. 1 es un gráfico que representa cambios en las cantidades 3H-timidina incorporada en linfocitos T resultantes de la preparación de y-PGA (poli (ácido y-glutámico) ) como nanopartículas.

La Fig. 2 representa resultados de la expresión molecular superficial en células dendríticas, que se miden por un citómetro de flujo.

La Fig. 3 es un gráfico que representa cantidades de citoquinas segregadas de células dendríticas, que se miden por ELISA.

La Fig. 4 muestra los efectos de iDCs (células dendríticas inmaduras) , diferenciadas por nanopartículas de y-PGA, en la activación de linfocitos T, que se representa por cantidades de 3H-timidina incorporada en linfocitos T.

La Fig. 5 es un gráfico que representa el número de células que producen y-interferón inducido por nanopartículas de y-PGA que tienen un antígeno VIH-1 incorporado a ellas.

La Fig. 6 es un gráfico que representa títulos de anticuerpos inducidos por nanopartículas de y-PGA que tienen un antígeno VIH-1 incorporado a ellas.

La Fig. 7 representa resultados de experimentos para prevenir injerto tumoral usando nanopartículas de y-PGA con OVA inmovilizada.

La Fig. 8 representa resultados de experimentos para provocar la inducción de CTLs usando nanopartículas de y-PGA con OVA inmovilizada.

La Fig. 9 representa resultados de experimentos para provocar la inducción de CTLs por nanopartículas de y-PGA con Tax38-46 inmovilizado.

La Fig. 10 representa resultados de pruebas tumorales para eliminar metástasis pulmonar por nanopartículas de y-PGA con OVA inmovilizada.

El mejor modo para realizar la invención En un aspecto la presente invención se refiere al uso de un copolímero de injerto de poli (ácido... [Seguir leyendo]

1. Un copolímero de injerto de poli (ácido y-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina para usar como adyuvante para una vacuna, donde el poli (ácido y-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene un tamaño de 100 nm – 500 nm.

2. Una composición farmacéutica que comprende un copolímero de injerto de poli (ácido y-glutámico) y éster etílico de L-fenilalanina para usar como adyuvante para una vacuna, donde el poli (ácido y-glutámico) se prepara como una nanopartícula y donde la nanopartícula tiene un tamaño de 100 nm – 500 nm.

3. Un copolímero de injerto según la reivindicación 1 o una composición según la reivindicación 2 donde un antígeno viral se inmoviliza en la nanopartícula.

4. Un copolímero de injerto o una composición según la reivindicación 3, donde el antígeno viral se selecciona del grupo consistente en un antígeno retroviral, un antígeno de virus influenza, un antígeno de flavivirus, un antígeno del virus de la diarrea y un antígeno de coronavirus.

5. Un copolímero de injerto o una composición según la reivindicación 4, donde el antígeno viral es un antígeno retroviral.

6. Un copolímero de injerto o una composición según la reivindicación 5, donde el antígeno retroviral es un antígeno VIH.

7. Un copolímero de injerto o una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, donde el antígeno se incorpora a la nanopartícula.

8. Un copolímero de injerto o una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, donde el antígeno 20 está presente en la superficie de la nanopartícula.

9. Un copolímero de injerto o una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8 para la inmunización de un sujeto o para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad en un sujeto.

10. Un copolímero de injerto o una composición según la reivindicación 9, donde la enfermedad es el VIH.

Fig. 2

Célula CD40 CD80 CD86 MHC de clase I MHC de clase II

iDC 100 100 100 100 100

mDC 460 226 227 268 275

iDC + nanopartícula de y-PGA (75 !g/ml) 173 97 91 180 140

iDC + nanopartícula de y-PGA (150 !g/ml) 233 83 157 213 160

iDC + nanopartícula de y-PGA (300 !g/ml) 353 86 227 235 148

La medida es el valor que define la expresión (intensidad fluorescente media) en iDC como 100.

Fig. 3

Tiempo de cultivo (horas)

Tiempo de cultivo (horas)

Fig. 4

Tiempo de cultivo (horas)

Tiempo de cultivo (horas)

iDC mDC iDC + nanopartícula de y-PGA (75) iDC + nanopartícula de y-PGA (150) iDC + nanopartícula de y-PGA (300)

Célula Cantidad d.

3. timidina incorporada

Célula T sola 9±4

mDC sola 15±6

Célula T + iDC 100

Célula T + mDC 338±126

Célula T + iDC diferenciada por 75 !g/ml de nanopartícula de y-PGA 255±13

Célula T + iDC diferenciada por 150 !g/ml de nanopartícula de y-PGA 545±87

Célula T + iDC diferenciada por 300 !g/ml de nanopartícula de y-PGA 1427±440

Valor que define la cantidad de incorporación d.

3. timidina en el caso de célula T + iDC como 100

Fig. 5

Fig. 6

Título de anticuerpo (log10)

Fig. 7

Volumen Tumoral (mm3)

-PGA/nanopaartículaOVA (100) nanopartícula de -PGA/OVA (10) nanopartícula de y-PGA vacía/OVA (100) nanopartícula de y-PGA vacía /OVA (10) CFA/OVA OVA soluble (100) PBS ( )

Tiempo tras las inoculación tumoral (días)

Fig. 8

Fig. 9