Partículas virales modificadas con propiedades inmunogénicas y contenido reducido de lípidos, útiles para el tratamiento y la prevención de enfermedades infecciosas.

El uso de una partícula viral modificada para la fabricación de una composición farmacéutica útil para proveerprotección contra un organismo viral infeccioso,

en donde la partícula viral modificada comprende al menos unapartícula viral parcialmente deslipidada, en donde la partícula viral parcialmente deslipidada:

inicia una respuesta inmune positiva y,

incita protección contra un organismo infeccioso, en donde la partícula viral modificada tiene un contenido lipídicomenor y una densidad de flotación diferente a la de una partícula viral no modificada, en donde la partícula viralmodificada es un virus de inmunodeficiencia, y la partícula viral modificada comprende además una proteína y laproteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27, en donde la partícula viral modificadaha sido deslipidada por medio del empleo de 0,5 a 10% de éter, o 0,5% a 10% de éter en combinación con unalcohol.

Partículas virales modificadas con propiedades inmunogénicas y contenido reducido de lípidos, útiles para el tratamiento y la prevención de enfermedades infecciosas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método de deslipidación que emplea un sistema disolvente útil para extraer los lípidos de un virus, creando así una partícula viral modificada. El sistema disolvente de la presente invención está óptimamente diseñado de tal forma que después de la deslipidación del virus, la partícula viral permanece sustancialmente intacta. Por medio de la disolución de la envoltura lipídica que rodea a la partícula viral utilizando el método de la presente invención, la partícula viral modificada resultante ha expuesto antígenos (o epítopos) , que fomentan y promueven respuestas celulares y la producción de anticuerpos cuando se introduce en un humano o en un animal. La partícula viral modificada resultante de la presente invención inicia una respuesta inmunogénica positiva en las especies en las que es nuevamente introducida. La presente invención se puede aplicar a la deslipidación de virus de un paciente específico para futura reintroducción en el paciente, para deslipidación de cepas de virus, o de virus no específicos de un paciente, para su uso como una vacuna, o para deslipidación y combinación tanto de virus no específicos de un paciente como de virus específicos de un paciente para crear un cóctel terapéutico.

Antecedentes de la invención

Introducción

Los virus, de etiología variada, afectan a miles de millones de animales y de seres humanos cada año y causan una enorme carga económica para la sociedad. Muchos virus contienen lípidos como el principal componente de la membrana que los rodea. Los virus afectan a animales y a seres humanos causando un sufrimiento, morbilidad y mortalidad extremos. Estos virus viajan por todo el cuerpo en fluidos biológicos como la sangre, fluido peritoneal, fluido linfático, fluido pleural, fluido pericárdico, fluido cefalorraquídeo, y en diferentes fluidos del sistema reproductivo. El contacto con el fluido en cualquier sitio promueve la transmisión de la enfermedad. Otros virus residen principalmente en diferentes sistemas de órganos y en tejidos específicos, proliferan y luego entran en el sistema circulatorio para tener acceso a otros tejidos y órganos en sitios remotos. Si el organismo no presenta una respuesta inmune positiva frente a estos patógenos, infectan a muchos tipos de células dentro del organismo, impidiendo que estas células realicen sus funciones normales.

El sistema inmunológico humano está compuesto de varios tipos de células que colectivamente protegen al organismo de diferentes virus. El sistema inmunológico ofrece múltiples medios para elegir un blanco y la remoción de elementos foráneos, incluyendo respuestas inmunes humorales y celulares, que participan principalmente en el reconocimiento y remoción del antígeno. Una respuesta inmune a elementos extraños requiere de la presencia de linfocitos B (células B) o de linfocitos T (células T) en combinación con células presentadoras de antígeno (APC) , que son usualmente macrófagos o células dendríticas. Las APC son células inmunes especializadas que capturan antígenos. Una vez dentro de una APC, se rompen los antígenos en fragmentos más pequeños llamados epítopos los únicos marcadores transportados por la superficie del antígeno. Estos epítopos son posteriormente presentados sobre la superficie de las APC y son los responsables de desencadenar una respuesta de anticuerpos en la defensa contra la infección.

En una respuesta inmune humoral, cuando una APC presenta antígenos (en forma de marcadores de epítopo únicos) extraños al organismo son reconocidos, se activan las células B, proliferan y producen anticuerpos. Estos anticuerpos se unen específicamente a los antígenos presentes en el virus. Después de que el anticuerpo se une, la APC envuelve al antígeno completo y lo mata. Este tipo de respuesta inmune de anticuerpos está principalmente implicada en la prevención de infecciones virales.

En una respuesta inmune celular, las células T se activan para el reconocimiento del antígeno presentado sobre la APC. Hay dos etapas en la respuesta inmune celular. La primera etapa implica la activación de las células T citotóxicas (CTL) o las células asesinas T CD8+ que proliferan y matan a las células objetivo que presentan antígenos específicamente. La segunda etapa implica a las células T colaboradoras (HTL) o células T CD4+ que regulan la producción de anticuerpos y la actividad de las células CD8+. Las células T CD4+ proporcionan factores de crecimiento a las células T CD8+ lo que permiten que proliferen y actúen de manera eficiente.

Ciertos patógenos infecciosos son considerados "crónicos" debido a su estructura. Por ejemplo, algunos virus son capaces de evadir una respuesta inmune debido a su capacidad para ocultar algunos de sus antígenos del sistema inmune. Los virus tienen una envoltura exterior compuesta de lípidos y grasas derivados de la membrana de la célula huésped durante el proceso de gemación. Los virus se componen de viriones, agentes infecciosos no celulares que consisten de un solo tipo de ácido nucleico (ya sea ARN o ADN) , rodeados por una capa de proteína. La proteína exterior que cubre los virus es llamada una cápside, que está compuesta de subunidades de repetición

llamadas capsómeros.

Dado que los virus no tienen metabolismo, únicamente se reproducen dentro de células huésped vivas. El virus codifica las proteínas de la envoltura viral, mientras que la célula huésped codifica los lípidos y carbohidratos. Por lo tanto, el contenido de lípidos y carbohidratos dentro de una envoltura viral dada depende del huésped en particular. Las partículas virales dentro de una envoltura adoptan por lo tanto parcialmente la identidad de la célula huésped, a través del contenido de lípidos y carbohidratos, y son capaces de ocultar los antígenos asociados con ellos, que normalmente habrían iniciado una respuesta inmune. En vez de eso, la partícula viral confunde el sistema inmune del huésped presentándolo con un complejo antigénico que contiene componentes de los tejidos del huésped, y es percibido por el sistema inmune del huésped, como parcialmente "propio" y parcialmente "foráneo". El sistema inmunológico se ve obligado a producir los anticuerpos inefectivos de "compromiso", que no destruyen las partículas virales, lo que les permite proliferar y poco a poco causar daños graves en el organismo, mientras destruyen las células huésped.

Las recientes epidemias que afectan el sistema inmune incluyen al síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , que se cree que es causado por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) . Los virus relacionados afectan a especies animales, por ejemplo, a los simios y felinos (SIV y FIV, respectivamente) . Otras infecciones virales importantes incluyen, pero no se limitan a, meningitis, citomegalovirus, y hepatitis en sus diversas formas.

Métodos actuales de tratamiento

Un método del estado del arte para tratar virus de etiología variada es a través de terapia con medicamentos. La mayoría de los tratamientos farmacológicos antivirales están destinados a la prevención o inhibición de la replicación viral y parece que se centran en la unión inicial del virus a los linfocitos T4 o macrófagos, a la transcripción de ARN viral en ADN viral y a la formación del nuevo virus durante la replicación. La alta tasa de mutación del virus, especialmente en el caso del VIH, es una dificultad importante con los tratamientos existentes porque las diversas cepas se vuelven resistentes a la terapia con medicamentos antivirales. Además, el tratamiento con terapia antiviral con medicamentos puede causar la evolución de cepas resistentes del virus. Otros inconvenientes con los tratamientos farmacológicos son los efectos secundarios no deseados y los requisitos de cumplimiento por parte del paciente. Además, muchas personas se ven afectados por múltiples infecciones virales, tales como una combinación de VIH y la hepatitis. Estas personas requieren regímenes incluso más agresivos y costosos de medicamentos para contrarrestar el progreso de la enfermedad, lo que a su vez causa mayores efectos secundarios y una mayor probabilidad de resistencia a múltiples fármacos. El enfoque más efectivo hasta la fecha para tratar el VIH es el uso de una terapia antirretroviral altamente activa (HAART)... [Seguir leyendo]

1. El uso de una partícula viral modificada para la fabricación de una composición farmacéutica útil para proveer protección contra un organismo viral infeccioso, en donde la partícula viral modificada comprende al menos una partícula viral parcialmente deslipidada, en donde la partícula viral parcialmente deslipidada:

inicia una respuesta inmune positiva y,

incita protección contra un organismo infeccioso, en donde la partícula viral modificada tiene un contenido lipídico menor y una densidad de flotación diferente a la de una partícula viral no modificada, en donde la partícula viral modificada es un virus de inmunodeficiencia, y la partícula viral modificada comprende además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27, en donde la partícula viral modificada ha sido deslipidada por medio del empleo de 0, 5 a 10% de éter, o 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol.

2. El uso de la reivindicación 1, en donde la partícula viral tiene una envoltura lipídica.

3. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la partícula viral modificada es VIH o SIV.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 para la fabricación de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica es para ser administrada a un individuo que no está infectado con el propósito de incitar una respuesta inmune positiva después de la exposición al virus para prevenir la infección.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 para la fabricación de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica es para ser administrada a un individuo infectado de tal manera que el medicamento disminuya la severidad de la infección por medio del inicio de una respuesta inmune positiva.

6. Un método para crear una partícula viral modificada que comprende las etapas de:

recibir una pluralidad de partículas virales, teniendo cada una una envoltura viral que contiene lípido, en un fluido, en donde las partículas virales son virus de inmunodeficiencia;

exponer las partículas virales a un proceso de deslipidación; y,

deslipidar parcialmente las partículas virales en donde el proceso de deslipidación reduce al menos parcialmente el contenido de lípido de la envoltura viral para crear la partícula viral modificada y en donde la partícula viral modificada es capaz de provocar una respuesta inmune y la partícula viral modificada comprende además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27, en donde el proceso de deslipidación comprende el empleo de éter en una concentración de 0, 5% a 10%, o de 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol.

7. Un método para crear un vehículo para el suministro de un antígeno que comprende las etapas de:

recibir una pluralidad de partículas virales, teniendo cada una una envoltura viral que contiene lípido, en un fluido;

exponer las partículas virales a un proceso de deslipidación, en donde el proceso de deslipidación comprende el empleo de éter en una concentración de 0, 5% a 10%, o de 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol, y,

deslipidar parcialmente las partículas virales para crear partículas virales modificadas que actúen como vehículos para el suministro de antígeno, en donde el proceso de deslipidación disminuye al menos parcialmente el contenido de lípido de la envoltura viral para exponer al menos un antígeno viral y en donde al menos un antígeno viral expuesto es capaz de provocar una respuesta inmune, en donde la partícula viral modificada es un virus de inmunodeficiencia, y la partícula viral modificada comprende además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 6 o 7, en donde la partícula viral modificada es VIH o SIV.

9. El uso de una composición de vacuna que comprende una partícula viral modificada que contiene al menos una partícula viral parcialmente deslipidada que tiene al menos un antígeno viral expuesto que no estaba expuesto en una partícula viral no deslipidada y opcionalmente un portador farmacéuticamente aceptable, en donde la partícula viral parcialmente deslipidada es capaz de provocar una respuesta inmune, en donde la partícula viral modificada es un virus de inmunodeficiencia, y la partícula viral modificada comprende además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27, en donde la partícula viral al menos parcialmente deslipidada ha sido deslipidada empleando 0, 5 a 10% de éter, o 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol,

para la fabricación de una composición farmacéutica para proporcionar protección contra una partícula viral infecciosa.

10. El uso de la reivindicación 9, en donde la respuesta inmune es la producción mejorada de interferón gamma por parte de las células T o la proliferación de células del sistema inmune.

11. El uso de la reivindicación 10, en donde la composición de la vacuna comprende partículas virales parcialmente deslipidadas obtenidas a partir de más de una cepa de un virus o más de un tipo de virus.

12. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en donde la partícula viral modificada es VIH o SIV.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 para la fabricación de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica es para ser administrada a un individuo que no está infectado con el propósito de incitar una respuesta inmune positiva después de exposición al virus para prevenir la infección.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 para la fabricación de una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica es para ser administrada a un individuo infectado de tal manera que la composición farmacéutica disminuya la severidad de la infección por medio del inicio de una respuesta inmune positiva.

15. El uso de una pluralidad de partículas virales modificadas con un contenido reducido de lípido para la fabricación de una composición farmacéutica para provocar una respuesta inmune, en donde las partículas virales modificadas pueden ser obtenidas por medio de la obtención de un fluido que contenga las partículas virales que contienen lípido, en donde las partículas virales son virus de inmunodeficiencia;

poner en contacto el fluido que contiene las partículas virales que contienen lípido con un primer disolvente capaz de extraer lípido de las partículas virales que contienen lípido; en donde la deslipidación comprende el empleo de éter en una concentración de 0, 5% a 10%, o de 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol,

mezclar el fluido y el primer disolvente;

permitir que se separen una primera y una segunda fases; recolectar la segunda fase que contiene las partículas virales modificadas con contenido reducido de lípido, en donde las partículas virales modificadas son capaces de provocar una respuesta inmune y las partículas virales modificadas comprenden además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120,

o p24, o p27.

16. El uso de partículas virales modificadas para la fabricación de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, en donde las partículas virales modificadas pueden obtenerse adicionalmente

poniendo en contacto la segunda fase que contiene las partículas virales modificadas con carbón vegetal capaz de remover el primer disolvente; y,

eluyendo la segunda fase que contiene niveles reducidos del primer disolvente del carbón vegetal antes de recolectar esta segunda fase.

17. El uso de una pluralidad de partículas virales modificadas con contenido reducido de lípido para la fabricación de una composición farmacéutica para

provocar una respuesta inmune, en donde las partículas virales modificadas pueden obtenerse

obteniendo un fluido que contiene las partículas virales que contienen lípido, en donde las partículas virales que contienen lípido son virus de inmunodeficiencia; poniendo en contacto el fluido que contiene las partículas virales que contienen lípido con un primer disolvente capaz de extraer lípido de las partículas virales que contienen lípido; en donde el primer disolvente contiene éter en una concentración de 0, 5% a 10%, o de 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol; mezclar el fluido y el primer disolvente;

poner en contacto dicho fluido y el primer disolvente con un filtro en donde dicho filtro remueve sustancialmente el primer disolvente que contiene el lípido extraído de las partículas virales que contienen lípido y eluir (o recolectar) el fluido que contiene las partículas virales modificadas, en donde las partículas virales modificadas comprenden además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27, y las partículas virales modificadas son capaces de provocar una respuesta inmune.

18. El uso de partículas virales modificadas para la fabricación de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el filtro es carbón vegetal, en particular carbón activado.

19. El uso de partículas virales modificadas para la fabricación de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 17 o 18, en donde el carbón vegetal está contenido en una columna.

20. El uso de partículas virales modificadas para la fabricación de una composición farmacéutica de acuerdo con la 5 reivindicación 17 o 18, en donde el carbón vegetal está en forma de una suspensión.

21. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

15. 20, en donde la composición farmacéutica se administra a un individuo que no está infectado con el propósito de incitar una respuesta inmune positiva después de exposición al virus para prevenir la infección.

22. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicacione.

15. 20, en donde la composición farmacéutica se administra a un individuo infectado de tal manera que la composición farmacéutica disminuya la severidad de la infección iniciando una respuesta inmune positiva.

23. El uso de partículas virales modificadas que tienen al menos un antígeno viral expuesto que no fue expuesto en una pluralidad de partículas virales infecciosas que contienen lípido para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una infección viral, en donde las partículas virales modificadas pueden obtenerse

obteniendo plasma de sangre que contiene una pluralidad de partículas virales infecciosas que contienen lípido, conteniendo el plasma las partículas virales infecciosas que contienen lípido;

poniendo en contacto al plasma que contiene las partículas virales infecciosas que contienen lípido con un primer disolvente capaz de extraer lípido de las partículas virales infecciosas que contienen lípido para producir partículas 25 virales modificadas que tienen un contenido reducido de lípido, en donde el primer disolvente contiene éter en una concentración de 0, 5% a 10%, o de 0, 5% a 10% de éter en combinación con un alcohol;

mezclar el plasma y el primer disolvente;

permitir que se separen una primera y una segunda fases;

recolectar la segunda fase que contiene las partículas virales modificadas, en donde la partícula viral modificada es virus de inmunodeficiencia, y la partícula viral modificada comprende además una proteína y la proteína es al menos una proteína escogida entre gp41, gp120, o p24, o p27.

24. El uso de la reivindicación 17, en donde el primer disolvente comprende además un alcohol que tiene º 5 átomos de C, una amina, un hidrocarburo, un éster, un surfactante o una combinación de estos disolventes.

25. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 18 ó 20, en donde el éter es un éter C4 a C8 y el alcohol es un alcohol C1 a C8.

26. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 15 a 25 que comprende partículas virales parcialmente deslipidadas obtenidas a partir de más de una cepa de un virus o más de un tipo de virus.

27. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 15 a 26, en donde la partícula viral modificada es VIH o SIV.