La presente invención se relaciona con composiciones que presentan capacidad de promover tanto la respuesta inmune innata como de la respuesta inmune adaptativa en un sujeto basadas en el uso conjunto de ApoA,

interleuquina 15 y del dominio sushi de la cadena alfa del receptor de IL 15, así como al uso de estas composiciones para estimular la respuesta inmune en un paciente y en métodos terapéuticos para el tratamiento de enfermedades infecciosas y neoplásicas.

Nuevos conjugados y composiciones para inmunoterapia y tratamiento anti-tumoral.

Campo técnico de la invención La presente invención se encuentra dentro del ámbito de la inmunología y, más concretamente, en el campo de composiciones que presentan capacidad de promover tanto la respuesta inmune innata como de la respuesta inmune adaptativa en un sujeto. Estas composiciones son de utilidad para el tratamiento de todas aquellas enfermedades que requieran de una mayor actividad del sistema inmune como, por ejemplo, tumores y enfermedades infecciosas.

Antecedentes de la invención La interleuquina 15 (IL15 o IL15) es una citoquina imprescindible para la actividad de células NK, NKT y linfocitos T CD8 memoria. Ejerce su función por medio de un receptor que consta de 3 subunidades denominadas α, β y γ. Las subunidades β y γ son comunes al receptor de IL-2. La cadena α del receptor de IL15 es único para la IL15 y es necesario para la salida al medio extracelular de la citoquina [Duitman, E.H., et al., Mol Cell Biol, 2008. 28:485161] y "presenta" la IL15 a las subunidades IL15Rβ y IL15Rγ.

Debido a las propiedades estimulantes del sistema inmune, esta interleuquina tiene propiedades anti-tumorales dependientes de la presencia de células NK (Suzuki, 2001, J. Leuokoc. Biol., 69:531-537) y de células T (Hazama, 1999, Br. J. Cancer., 80:1420-1426, Meazza, 2000, Int. J. Cancer, 87:574-581 y Klebanoff, 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, 101:1969-1974) . IL15 también está implicada en la protección frente a infecciones virales y en la expansión y mantenimiento de una respuesta basada en células T en la inmunización y desarrollo de células dendríticas.

Por tanto, IL15 puede ser un agente terapéutico útil en el tratamiento de enfermedades en las que se encuentra involucrado el sistema inmune. Sin embargo, los estudios in vivo para caracterizar la función de IL15 se han visto impedidos debido en parte a la falta de disponibilidad de IL15 recombinante y al bajo nivel de secreción observado cuando IL15 se expresa a partir del gen nativo. Adicionalmente, la mayor parte de las citoquinas tienen vidas medias en plasma muy reducidas dado que se producen in vivo de forma local y transitoria. Por tanto, el uso de IL15 in vivo requiere el uso de dosis relativamente altas y administraciones frecuentes, lo que resulta en distintos efectos secundarios que pueden resultar en que pacientes que sufren de cáncer no pueden tolerar el tratamiento.

Con el fin de evitar estas desventajas, IL15 ha sido utilizada en terapia antitumoral en combinación con otros tratamientos como anticuerpos anti-CD40, IL-7 o IL-6 [Chou, P.C., et al., 2009, Vet Immunol Immunopathol, 130:2534; Lin, C.Y., et al., Cancer Lett, 2008. 272 (2) : p. 285-95; Zhang, M., et al., Proc Natl Acad Sci USA, 2009, 106:75138 and Cha, E., et al., Breast Cancer Res Treat, 2009]. Estas combinaciones muestran un efecto sinérgico lo que permite alcanzar efectos similares con menores dosis de IL15.

Otra posibilidad de aumentar la actividad de IL15 consiste en su co-administración con una proteína de fusión que comprende la región constante de una inmunoglobulina y la región soluble de la cadena α del receptor de IL15, lo que resulta en un aumento de 50 veces en la actividad de IL15 (Rubinstein M.P. et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:9166-71 y Stoklasek T.A. et al., 2006, J. Immunol.; 177:6072-80) .

Recientemente se ha demostrado que un polipéptido formado por los aminoácidos 1 al 77 del extremo amino terminal de la cadena α del receptor de IL15 (el llamado "dominio sushi") es un agonista de la IL15 [Mortier, E., et al., J Biol Chem, 2006. 281 (3) : p. 1612-9]. Así, la administración de una proteína de fusión que contiene dicho dominio e IL15 muestra un efecto antitumoral superior al de IL15 y que resulta en la disminución del 65% en el número de metástasis en pulmón del tumor B16F10 y en la disminución del número de metástasis de tumor HCT-116 humano implantado en el intestino ciego de ratones nude [Bessard, A., et al., Mol Cancer Ther, 2009. 8 (9) : p. 2736-45].

Otra alternativa para conseguir mejorar el efecto de IL15 sin incurrir en efectos secundarios indeseados consiste en modificar la molécula con el fin de aumentar su vida media. Así, US2006257361 describe proteínas de fusión que comprenden la región constante de una inmunoglobulina e IL15 que presentan vidas medias en suero tras su administración superiores a IL15 no modificada.

No obstante, existe una necesidad en el estado de la técnica de formulaciones alternativas de IL15 en las que la proteína mantenga su actividad promotora de la respuesta inmune pero que permitan reducir al máximo los efectos secundarios asociados con IL15.

Compendio de la invención En un primer aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende, juntos o separados, (i) un primer componente seleccionado del grupo de

(a) un polipéptido que comprende un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(ii) un segundo componente seleccionado del grupo de

(a) IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma y

(b) un polinucleótido que codifica IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma y

(iii) un tercer componente seleccionado del grupo de

(a) el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(b) un polinucleótido que codifica el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo.

En un segundo aspecto, la invención se relaciona con una proteína de fusión que comprende

(i) una región A formada por un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii) una región B formada por IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma y

(iii) una región C formada por el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo.

En sucesivos aspectos, la invención se relaciona con un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de la invención, con un vector o una construcción génica que comprende un polinucleótido de la invención, con una célula huésped que comprende una proteína de fusión de la invención, con un polinucleótido de la invención, con un vector de la invención o una construcción génica de la invención.

En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende una composición de la invención, una proteína de fusión de la invención, un polinucleótido de la invención, un vector o una construcción génica de la invención, una célula huésped de la invención, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro para promover la expansión de linfocitos T específicos de un antígeno que comprende poner en contacto una población de linfocitos previamente expuestos in vivo a dicho antígeno con una composición de la invención, una proteína de fusión de la invención, un polinucleótido de la invención, un vector o una construcción génica de la invención, una célula huésped de la invención.

Adicionalmente, la invención se relaciona con una composición de la invención, una proteína de fusión de la invención, un polinucleótido de la invención, un vector o una construcción génica de la invención, una célula huésped de la invención para su uso en medicina o para la estimulación de la respuesta inmune de un sujeto.

Breve descripción de las figuras Figura 1. Cinética de la expresión de hIL15 (ng/mL) en el tiempo t (h: horas) . Grupos de Ratones C57B16 recibieron una inyección hidrodinámica con los plásmidos pApo-hIL15, pApo-hIL15 + pSushi, phIL15, phIL15 + pSushi, pApo o solución salina (S) . A las 8, 24, 96, 168 y 240 horas se extrajo sangre y se analizó mediante ELISA la concentración sérica de hIL15. Se muestra la media y el error estándar de la media de un experimento representativo con 2-3 animales por grupo. Los resultados se compararon estadísticamente mediante ANOVA de medidas repetidas, seguido de un test de Bonferroni. Se observan diferencias significativas entre los niveles de hIL15 a las 8 y 24 h del grupo tratados con pApo-hIL15 con respecto al resto de los grupos (p<0, 001) .

Figura 2.... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende, juntos o separados,

(i) un primer componente seleccionado del grupo de

(a) un polipéptido que comprende un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho polipéptido ApoA y

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho polipéptido ApoA y

(ii) un segundo componente seleccionado del grupo de

(a) IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15 y

(b) un polinucleótido que codifica IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15 y

(iii) un tercer componente seleccionado del grupo de

(a) el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 y

(b) un polinucleótido que codifica el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15.

2. Una composición según la reivindicación 1 en donde el primer y segundo componente forman parte de una única molécula y en donde

a. si el primer y segundo componentes son polipéptidos, dicha única molécula es una proteína de fusión que comprende un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho polipéptido ApoA, e IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15, y

b. si el primer y segundo componentes son polinucleótidos, dicha única molécula es un polinucleótido que codifica una proteína de fusión que comprende un polipéptido que comprende un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho polipéptido ApoA, e IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15.

3. Una composición según la reivindicación 2 en donde el ordenamiento del primer y segundo componente en dicha única molécula se selecciona del grupo consistente en

a. el primer componente se encuentra en posición N terminal o 5' con respecto al segundo componente y

b. el primer componente se encuentra en posición C terminal o 3' con respecto al segundo componente.

4. Una proteína de fusión que comprende

(i) una región A formada por un polipéptido Apo A o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho polipéptido APO A,

(ii) una región B formada por IL15 o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15 y

(iii) una región C formada por el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con dicho dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15.

5. Una proteína de fusión según la reivindicación 4 en donde el ordenamiento de las regiones A, ByCen sentido N-a C-terminal en dicha proteína de fusión se selecciona del grupo consistente en A-B-C, A-C-B, B-A-C, B-C-A, C-A-B y C-B-A.

6. Una proteína de fusión según las reivindicaciones 4 ó 5 en donde al menos una de las uniones entre las regiones A, ByCse establece a través de un enlazador peptídico.

7. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones4a6en donde

a. Apo A o la variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con Apo A es de origen humano o de origen murino,

b. IL15 o la variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta, al menos, un 70% de identidad con IL15 es de origen humano o de origen murino y/o

c. el polipéptido que comprende el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta, al menos, un 70% de identidad con el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 es de origen humano o de origen murino.

8. Un polinucleótido que codifica una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones4a7.

9. Un vector o una construcción génica que comprende un polinucleótido según la reivindicación 8.

10. Una célula huésped que comprende una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, un polinucleótido según la reivindicación 8, un vector según la reivindicación 9 o una construcción génica según la reivindicación 9.

11. Una composición farmacéutica que comprende una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7, una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, un polinucleótido según la reivindicación 8, un vector o una construcción génica según la reivindicación 9 o una célula huésped según la reivindicación 10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Método in vitro para promover la expansión de linfocitos T específicos de un antígeno que comprende poner en contacto una población de linfocitos previamente expuestos in vivo a dicho antígeno con una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7, una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, un polinucleótido según la reivindicación 8, un vector o una construcción génica según la reivindicación 9 o una célula huésped según la reivindicación 10.

13. Método según la reivindicación 12 en donde los linfocitos se someten previamente a una activación in vitro mediante la puesta en contacto de los linfocitos con el antígeno al que han sido expuestos dichos linfocitos T.

14. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones1a3y7, una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, un polinucleótido según la reivindicación 8, un vector o una construcción génica según la reivindicación 9 o una célula huésped según la reivindicación 10 para la preparación de un medicamento en el tratamiento de una enfermedad infecciosa, de una enfermedad de tipo alérgico o de una enfermedad neoplásica.

15. Uso según la reivindicación 14, en donde la enfermedad infecciosa se selecciona del grupo que consiste en una enfermedad viral, una enfermedad bacteriana, una enfermedad fúngica o una enfermedad parasitaria.

16. Uso según la reivindicación 14, en donde la enfermedad neoplásica se selecciona del grupo que consiste en un tumor y una metástasis.

LISTA DE SECUENCIAS

<110> PROYECTO DE BIOMEDICINA CIMA S.L.

<120> NUEVOS CONJUGADOS Y COMPOSICIONES PARA INMUNOTERAPIA Y TRATAMIENTO ANTI-TUMORAL

<130> P5443ES00

<140> ES 200931158

<141> 2009-12-11

<160> 50

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 267

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 1

<210> 2

<211> 264

<212> PRT

<213> Mus musculus <400> 2 <210> 3

<211> 259

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 3

<210> 4

<211> 965

<212> DNA

<213> Homo sapiens <400> 4

<210> 5

<211> 795

<212> DNA

<213> Mus musculus <400> 5 <210> 6

<211> 889

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus <400> 6

<210> 7

<211> 162

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 7

<210> 8

<211> 162

<212> PRT

<213> Mus musculus <400> 8 <210> 9

<211> 162

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 9 <210> 10

<211> 162

<212> PRT

<213> Felis catus <400> 10 <210> 11

<211> 162

<212> PRT

<213> Bos taurus <400> 11 <210> 12

<211> 411

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica un polipéptido que comprende la IL15 humana <220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (66)

<223> Secuencia que codifica el péptido señal de la cadena IgV-ji <220>

<221> mis_feature <222> (67) .. (411)

<223> Secuencia que codifica la IL15 humana madura (NM_172174.2 REGION: 990..1331)

<400> 12

<210> 13

<211> 489

<212> DNA

<213> Mus musculus <400> 13 <210> 14

<211> 489

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus <400> 14

<210> 15

<211> 489

<212> DNA

<213> Felis catus <400> 15 <210> 16

<211> 489

<212> DNA

<213> Bos taurus <400> 16

<210> 17

<211> 61

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 17

<210> 18

<211> 61

<212> PRT

<213> Mus musculus <400> 18

<210> 19

<211> 291

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica un polipéptido que comprende el dominio Sushi de la subunidad alfa del receptor de IL15 humano (IL15RA)

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (288)

<223> Secuencia que codifica el péptido señal y el dominio Sushi de la subunidad alfa del receptor de IL15 humano (IL15RA) (NM_002189.2 REGION: 83..371)

<400> 19

<210> 20

<211> 273

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica un polipéptido que comprende el dominio Sushi del Receptor IL15alfa murino (Il15ra)

<220>

<221> misc_features <222> (1) .. (64)

<223> Secuencia que codifica un péptido señal de Ig-kappa <220>

<221> misc_features <222> (65) .. (273)

<223> Secuencia que codifica el dominio Sushi de la subunidad alpha del receptor de la IL15 (Il15ra) murino <400> 20

<210> 21

<211> 279

<212> DNA

<213> Homo sapiens <400> 21

<210> 22

<211> 93

<212> PRT

<213> Homo sapiens <400> 22

<210> 23

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 23

<210> 24

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 24

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 25

<210> 26

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 26

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 27

<210> 28

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 28

<210> 29

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 29

<210> 30

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 30

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 31

<210> 32

<211> 19

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Enlazador <400> 32 <210> 33

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de cote de enteroquinasa <400> 33

<210> 34

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de corte de Factor Xa <400> 34

<210> 35

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de corte de trombina <400> 35

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de corte de proteasa TEV

<400> 36 <210> 37

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de corte de proteasa PreScission <400> 37

<210> 38

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Sitio de corte de MMP9

<400> 38

<210> 39

<211> 1155

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica la proteína de fusión hApo-hIL15

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (801)

<223> Secuencia que codifica la apolipoproteína A-I humana (APOA1) (NM_000039.1 REGION: 39..839)

<220>

<221> misc_feature <222> (802) .. (810)

<223> Secuencia que codifica el enlazador GAP

<220>

<221> misc_feature <222> (811) .. (1153)

<223> Secuencia que codifica la IL15 humana madura (NM_172174.2 REGION: 990..1331)

<400> 39

<210> 40

<211> 1146

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica una proteína de fusión mApo-hIL15

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (792)

<223> Secuencia que codifica la apolipoproteína A-I murina (Apoa1) (NM_009692.2 REGION: 47..838)

<220>

<221> misc_feature <222> (793) .. (800)

<223> Secuencia que codifica el enlazador GAP <220>

<221> misc_feature <222> (801) .. (1143)

<223> Secuencia que codifica la IL15 humana madura (NM_172174.2 REGION: 990..1331)

<400> 40

<210> 41

<211> 1290

<212> DNA

<213> mApoA1-mIL15

<400> 41

<210> 42

<211> 443

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> hSushi-hIL15-hApoA1

<400> 42

<210> 43

<211> 459

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> mSushi-mIL15-mApoA1

<400> 43

<210> 44

<211> 1428

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Secuencia que codifica una proteína de fusión hSushi-hIL15-hApo <220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (288)

<223> Secuencia que codifica el péptido señal y el dominio Sushi de la subunidad alfa del receptor de IL15 humano (IL15RA) (NM_002189.2 REGION: 83..371)

<220>

<221> misc_feature <222> (289) .. (345)

<223> Secuencia que codifica un enlazador (Linker)

<220>

<221> misc_feature <222> (346) .. (687)

<223> Secuencia que codifica la IL15 humana madura (NM_172174.2 REGION: 990..1331)

<220>

<221> misc_feature <222> (688) .. (696)

<223> Secuencia que codifica el enlazador GAP (Linker)

<220>

<221> misc_feature <222> (697) .. (1425)

<223> Secuencia que codifica la apolipoproteína A-I humana madura (APOA1) (NM_000039.1 REGION: 111..839)

<400> 44

<210> 45

<211> 1407

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> mSushi-mIL15-mApo <400> 45 <210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Cebador FwATGmApoA1

<400> 46

<210> 47

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Cebador RvTGAmApoA1

<400> 47

<210> 48

<211> 28

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Cebador FwAscIhIL15

<400> 48

<210> 49

<211> 27

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Cebador RvNotIhIL15

<400> 49

<210> 50

<211> 28

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Cebador RvAscImApoA1

<400> 50

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

Nº solicitud: 200931158

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 11.12.2009

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional DOCUMENTOS RELEVANTES

2. 28; reivindicaciones 1, 19, 20, 21. 1-5, 7, 11, 14-16 A WO 2008007146 A1 (UPPERTON LIMITED [GB]) 17.01.2008, resumen; página 29, línea 13 - página 30, línea 5; reivindicaciones 1, 3, 5. 1-5, 7, 11, 14-16 Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº : Fecha de realización del informe 22.03.2011 Examinador M. García Grávalos Página 1/5

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud: 200931158

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

A61K47/48 (2006.01) C07K14/54 (2006.01) C12N15/62 (2006.01) A61P31/00 (2006.01) A61P35/00 (2006.01)

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

A61K, C07K, A61P

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)

INVENES, EPODOC

Informe del Estado de la Técnica Página 2/5

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 200931158

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 22.03.2011

Declaración

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986) .

Base de la Opinión.

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/5

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 200931158

1. Documentos considerados.

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración La presente solicitud divulga composiciones y proteínas de fusión con capacidad inmunomoduladora que comprenden la apolipoproteína A (Apo A) , la interleuquina 15 (IL15) , y el dominio Sushi de la cadena alfa del receptor de IL15 (IL15Ra-Sushi) , o variantes funcionales de estos polipéptidos. Se refiere también a polinucleótidos que codifican los polipéptidos o proteínas de fusión de la invención y a vectores y células hospedadoras para la expresión de dichos polipéptidos o proteínas de fusión. Adicionalmente, la solicitud divulga métodos in vitro para estimular la proliferación de linfocitos T específicos de antígeno y el uso de medicamentos que comprenden los productos de la invención para el tratamiento de infecciones, alergias o neoplasias.

El documento D01 se refiere a la capacidad de estimulación de la expansión de linfocitos T y células "natural killer" (NK) de composiciones que comprenden IL15 y el dominio Sushi del receptor de IL15, así como de proteínas de fusión constituidas por la unión covalente de IL15 e IL15Ra-Sushi a través de un enlazador peptídico. Asimismo, los autores hacen referencia al potencial uso terapéutico de las proteínas de fusión de IL15 y IL15Ra-Sushi como adyuvantes en terapias contra el cáncer, inmunodeficiencias y enfermedades infecciosas (ver todo el documento) .

El documento D02 divulga composiciones farmacéuticas que comprenden agentes anticancerígenos o antivirales como polinucleótidos o polipéptidos, entre los que se incluye IL15. Estos agentes se incorporan en liposomas que son específicamente dirigidos al hígado gracias al uso de Apo A (resumen; página 1, párrafos 0006-0011; página 3, párrafos 0043-0047; reivindicaciones 1, 6, 9, 10, 13, 14, 17) .

El documento D03 se refiere a agentes de contraste, empleados en técnicas de diagnóstico por imagen, que se conjugan con componentes proteicos en nanopartículas. En particular, comprende el uso en dichas nanopartículas de Apo A1 como transportador específico de agentes de contraste a placas arterioescleróticas (ver página 5, líneas 15-18; página 6, línea.

2. 28; reivindicaciones 1, 19, 20, 21) .

El documento D04 tiene por objeto la producción de partículas constituidas por proteínas unidas covalentemente. Dichas partículas pueden ser utilizadas para el transporte y liberación de agentes terapéuticos en el cuerpo humano. Como ejemplo, los inventores de D04 preparan las mencionadas partículas empleando Apo A (ver resumen, página 29, línea 13 - página 30, línea 5; reivindicaciones 1, 3, 5) .

1. NOVEDAD (Art. 6.1 LP 11/1986) .

1.1. Reivindicaciones 1-16.

El documento D01 se considera el más cercano en el estado de la técnica al objeto de la presente solicitud, ya que anticipa composiciones que comprenden IL15 e IL15Ra-Sushi y proteínas de fusión en las que estos dos polipéptidos se encuentran unidos covalentemente a través de enlazadores peptídicos. D01 establece además la capacidad estimuladora de la proliferación de linfocitos T de las mencionadas composiciones y proteínas de fusión y su potencial aplicación terapéutica en enfermedades infecciosas y tumorales. Asimismo, la metodología empleada en D01 abarca polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de IL15 e IL15Ra-Sushi, así como los vectores y células para llevar a cabo su expresión.

Sin embargo, existe una clara diferencia entre D01 y la presente solicitud, que consiste en la incorporación del polipéptido Apo A a las composiciones y proteínas de fusión de la invención. Este elemento se encuentra ausente en el conjunto de polipéptidos y proteínas de fusión divulgadas en D01.

Por su parte, D02 recoge el uso de Apo A unido covalentemente a liposomas que pueden ser empleados para el transporte específico de agentes terapéuticos al hígado. Sin embargo, dichas construcciones difieren en su naturaleza química de las proteínas de fusión de la presente solicitud.

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OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 200931158

En base a lo expuesto, ninguno de los documentos del estado de la técnica tomados en cuenta anticipa de forma idéntica el objeto de la presente solicitud y, en consecuencia, se considera que las reivindicaciones 1-16 cumplen con el requisito de novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) .

2. ACTIVIDAD INVENTIVA (Art. 8.1 LP 11/1986)

2.1. 1-16.

La invención objeto de la presente solicitud aborda el problema de la mejora de la actividad inmunoestimuladora de IL15. A este respecto, el estado de la técnica, y en particular el documento D01, nos indica que es posible obtener una mayor actividad estimuladora de la expansión de los linfocitos T cuando se administran conjuntamente IL15 e IL15Ra-Sushi, y que esta mejora es aún más notable cuando se emplean ciertas proteínas de fusión que comprenden IL15 e IL15Ra-Sushi unidos covalentemente mediante un enlazador peptídico.

La solución aportada por los inventores, que a su vez constituye la diferencia fundamental con D01, es la incorporación de Apo A a las composiciones y proteínas de fusión que contienen IL15 e IL15Ra-Sushi. Esta incorporación produce, a la luz de la descripción aportada por los inventores, una actividad superior de IL15 en la estimulación de la expansión de linfocitos T, que finalmente se traduce en un mayor efecto terapéutico, en particular en un mayor efecto antitumoral de las composiciones y proteínas de fusión de la invención.

Sin embargo, cabe señalar que la conjugación de Apo A a compuestos de interés terapéutico se encuentra en el estado de la técnica. Más aún, la mejora del perfil farmacológico de ciertos agentes terapéuticos mediante la conjugación de los mismos con Apo A es un hecho anticipado en el estado de la técnica, y en concreto en D02. Por lo tanto, se considera que ante el problema técnico planteado resultaría obvio para un experto en la materia aplicar las enseñanzas de los documentos D01 y D02 de forma conjunta y emplear Apo A en las composiciones y proteínas de fusión de D01 para mejorar la actividad inmunomoduladora de IL15.

Por último, en referencia a los métodos definidos en las reivindicaciones 12 y 13, se considera que éstos constituyen procedimientos básicos conocidos en inmunología para promover la expansión de linfocitos T específicos de un antígeno. Por lo tanto, su aplicación resultaría obvia para un experto en la materia toda vez que los productos empleados en dichos métodos no implican un salto inventivo según se ha argumentado en el párrafo anterior.

En consecuencia, el objeto de la presente solicitud tal y como se define en las reivindicaciones 1 a 16 no satisfaría el requisito de actividad inventiva (Art. 8.1 LP 11/1986) .

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