Uso de una composición que comprende una proteína plasmina truncada que comprende un dominio catalítico de plasmina (TPCD) en la preparación de un medicamente para tratar o prevenir un trastorno,

o una complicación de un trastorno, de un ojo de un sujeto, en el que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de la retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones.

Composición que comprende una proteína plasmina truncada

5 Campo de la invención

La presente invención proporciona generalmente métodos de tratamiento o prevención de un trastorno, o una complicación de un trastorno, en el ojo de un mamífero. Más específicamente, la presente invención se refiere al uso de una proteína plasmina truncada que comprende un dominio catalítico en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un trastorno o una complicación de un trastorno, en el ojo del mamífero.

Antecedentes de la invención El ojo adulto humano es una esfera ligeramente asimétrica con un diámetro sagital aproximado de 24 a 25 mm, un diámetro transversal de 24 mm, y un volumen de aproximadamente 6, 5 cc. El ojo humano se puede dividir en tres capas diferentes, concretamente, una capa externa, una capa intermedia y una capa interna. La capa externa del ojo consiste en la esclerótica, que se denomina a menudo como el "blanco del ojo", y la córnea, que cubre la parte frontal del ojo. La capa intermedia se divide es una porción anterior y una porción posterior; la porción anterior consiste en el iris pigmentado circular, las lentes del cristalino y el cuerpo ciliar, mientras que la porción posterior consiste en la capa coroide. La capa interna consiste en la retina, que es la parte sensorial del ojo. La retina es esencialmente una capa de tejido nervioso, que recorre toda la superficie posterior interior de la capa coroide y que se puede dividir en una parte óptica y una parte no óptica. La parte óptica, que participa en el mecanismo visual, contiene los bastoncillos y los conos que son los órganos efectivos de la visión.

El ojo humano se puede dividir también en tres cámaras. La cámara anterior entre la córnea y el iris, y la cámara posterior entre el iris y las lentes del cristalino, están llenas con un humor acuoso. En contraste, la cámara vítrea entre las lentes del cristalino y la retina está rellena con un líquido más viscoso, denominado vítreo (conocido también como el cuerpo vítreo o el humor vítreo) . El humor vítreo en un ojo normal es un gel trasparente que ocupa aproximadamente un 80 % del volumen del globo ocular. La luz que entra en el ojo a través de la córnea, la pupila, y las lentes, se trasmite a través del vítreo a la retina.

El humor vítreo de un ojo humano normal es un gel que tiene, de manera grosera, un 99 % de agua y un 1 % de macromoléculas. Estas macromoléculas incluyen una red de fibrillas de colágeno, ácido hialurónico, glicoproteínas solubles, azúcares y otros metabolitos de bajo peso molecular. El colágeno de tipo II es el colágeno fibrilar principal del vítreo, pero el vítreo contiene también colágeno de los tipos V, IX, y XI. La porción posterior del cuerpo vítreo, la superficie hialoide posterior (conocida también como la corteza vítrea posterior) , está en contacto directo con la superficie retinal interna más prominente en la base vítrea, el disco óptico, y a lo largo de los vasos retinales mayores. La adhesión normal del vítreo a la retina se realiza por las interacciones celulares y moleculares que aparecen entre la corteza vítrea posterior y la membrana limitante interna (ILM) de la retina. La ILM es esencialmente la membrana basal de las células de Mueller retinales. La ILM contiene colágeno de los tipos I y IV, glicoproteínas tales como la laminina y la fibronectina y otros glicoconjugados. Se cree que estos componentes establecen puentes y uniones de las fibras de colágeno entre el vítreo y la ILM.

Con la edad, el humor vítreo cambia de gel a líquido y de esta manera, gradualmente se contrae y se separa de la 45 ILM de la retina. Este proceso se conoce como "desprendimiento posterior del vítreo" (PVD) y es algo que sucede habitualmente después de los 40 años. Sin embargo, se pueden inducir cambios degenerativos en el vítreo debidos a dolencias patológicas tales como diabetes, enfermedad de Eale y uveítis. Análogamente, el PVD puede aparecer más pronto en personas miopes y en aquellas que se han sometido a cirugía de cataratas. Normalmente, el vítreo experimenta una rotura limpia de la retina. Ocasionalmente, sin embargo, el vítreo se adhiere estrechamente a la retina en algunos lugares. Estos pequeños focos de uniones resistentes anormalmente firmes del vítreo pueden transmitir importantes fuerzas de tracción desde el vítreo a la retina en el sitio de unión. Esta persistente sensación de tracción del vítreo da a menudo como resultado desgarros en la retina con forma de herradura. A no ser que se reparen los desgarros retinales, el fluido vítreo puede filtrarse a través de este desgarro en o por debajo de la retina y producir un desprendimiento de la retina, una dolencia muy grave que compromete la visión. Además, la unión 55 persistente entre el vítreo y la ILM puede dar como resultado un sangrado que se produce por la ruptura de vasos sanguíneos, lo que da como resultado el enturbiamiento y la opacificación del vítreo.

El desarrollo de un PVD incompleto influye sobre muchas enfermedades vitreorretinales entre las que se incluyen el síndrome de tracción vitreomacular, la hemorragia del vítreo, agujeros maculares, edema macular, retinopatía diabética, maculopatía diabética y desprendimiento de la retina. De esta manera, una importante meta de la cirugía vítrea es separar el vítreo de la retina de una manera que evite la tracción del vítreo.

Con el fin de retirar el vítreo del ojo, se lleva a cabo normalmente un procedimiento microquirúrgico denominado vitrectomía. En este procedimiento se elimina el vítreo del ojo con un dispositivo de corte en miniatura manipulado 65 manualmente, mientras que de manera simultánea se sustituye el vítreo eliminado con solución salina para evitar el colapso del ojo. La retirada quirúrgica del vítreo usando este método depende mucho de la habilidad, y la retirada completa del vítreo cortical sigue siendo una tarea difícil. Además, la vitrectomía mecánica lleva aparejada el riesgo de complicaciones tales como, la cicatrización, el lagrimeo y otros daños a la retina. Obviamente, dicho daño es muy indeseable y puede comprometer la visión del paciente tras la cirugía.

De esta manera, la investigación reciente se ha centrado en métodos alternativos para eliminar el vítreo de la retina. Dichos métodos han explorado el uso de enzimas y sustancias químicas que se pueden usar para inducir/promover la licuefacción del vítreo y/o el desprendimiento de la interfase vitreorretinal (PVD) . Estas soluciones, que se denominan como "vitrectomía farmacológica", han incluido algunas enzimas proteolíticas tales como la alfaquimotripsina, la hialuronidasa, la colagenasa bacteriana, la condroitinasa y la dispasa, que se han inyectado intravitrealmente en ensayos experimentales y/o clínicos para inducir el PVD. Sin embargo, la mayoría de estas técnicas no liberan el hialoide posterior de la ILM de una manera completa o exenta de complicaciones. Adicionalmente, en algunos de estos casos, el riesgo de reacciones adversas es elevado. Por ejemplo, el uso de proteasas bacterianas en sistemas mamíferos genera una respuesta inmune que conduce a la vitreoretinopatía proliferativa, que da como resultado una redesprendimiento del complejo retinal. Se ha informado de la colagenasa para licuificar el vítreo, pero también se ha demostrado que perturba las capas externas de la retina. Finalmente, se ha informado que la alfa-quimotripsina produce toxicidad en la capa interna de la retina 15 minutos después de la inyección. Dependiendo de la concentración de la dispasa usada, se pueden desarrollar tanto retinopatía proliferativa como membranas celulares epirretinales en los ojos inyectados.

Dadas la inmunogenicidad y otros efectos adversos de las proteasas bacterianas, puede ser deseable la vitreololisis farmacológica usando proteasas endógenas derivadas de ser humano. La plasmina es una serina proteasa derivada de plasminógeno. El plasminógeno es un importante componente de la sangre de los mamíferos, El plasminógeno humano es una glicoproteína monocatenaria que consiste en 791 aminoácidos, con un peso molecular de aproximadamente 92.000 daltons (véase Forsgren M. y col., FEBS Lett. 213 (2) : 254-60, 1987) . El plasminógeno natural con un ácido glutámico aminoterminal (denominado "plasminógeno Glu") se convierte mediante digestión limitada por plasmina de los enlaces peptídicos Arg68-Met69, Lys77-Lys78, o Lys78-Val79 en las proteínas comúnmente designadas como "plasminógeno Lys". La activación del plasminógeno mediante activadores del plasminógeno tales como uroquinasa o estreptoquinasa escinde... [Seguir leyendo]

1. Uso de una composición que comprende una proteína plasmina truncada que comprende un dominio catalítico de plasmina (TPCD) en la preparación de un medicamente para tratar o prevenir un trastorno, o una complicación de un trastorno, de un ojo de un sujeto, en el que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de la retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones.

2. El uso de la reivindicación 1, en la que el TPCD tiene un peso molecular de menos de 40.000 daltons, entre

20.000 y 30.000 daltons, 26.500 daltons en forma reducida o 29.000 daltons en forma no reducida, o menos de

20.000 daltons. 15

3. El uso de la reivindicación 1, en la que dicho TPCD se selecciona entre el grupo que consiste en miniplasmina, miniplasmina estabilizada, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada recombinante, microplasmina, microplasmina estabilizada, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada recombinante, y una variante de microplasmina.

4. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el tratamiento o la prevención da como resultado uno de los siguientes; reducción de la viscosidad del vítreo, licuefacción del vítreo, inducción del desprendimiento posterior del vítreo, aclaramiento o reducción de la sangre hemorrágica del vítreo y/o el humor acuoso, aclaramiento

o reducción de las sustancias extrañas intraoculares procedentes del vítreo y/o el humor acuoso, aumento de la difusión de un agente o una composición administrados al vítreo y/o al humor acuoso, y disminución de la neovascularización extrarretinal, o cualquiera de sus combinaciones.

5. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la composición es una disolución líquida.

6. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el sujeto es un ser humano.

7. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que, el tratamiento o la prevención se lleva a cabo en ausencia de vitrectomía, o en la que el tratamiento o la prevención se lleva a cabo como un auxiliar de la vitrectomía.

8. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la composición comprende una cantidad eficaz de TPCD que se va a administrar por ojo en el intervalo de 0, 005 mg a 0, 2 mg.

9. Uso de una composición que comprende al menos dos TPCD en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un trastorno, o una complicación de un trastorno, del ojo de un sujeto, en el que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de la retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y 45 cualquiera de sus combinaciones.

10. El uso de la reivindicación 9, en la que al menos dos TPCD se seleccionan entre el grupo que consiste en miniplasmina, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada, miniplasmina estabilizada recombinante, variantes de miniplasmina, microplasmina, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada, microplasmina estabilizada recombinante, variantes de microplasmina y cualquiera de sus combinaciones.

11. Un kit para uso en un método de tratamiento o prevención de un trastorno, o una complicación de un trastorno, del ojo de un sujeto, comprendiendo el método poner en contacto un vítreo y/o un humor acuoso con una primera composición, y una segunda composición en la que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en

55 desprendimiento de retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones, en el que el kit comprende una primera composición que comprende al menos un TPCD y una segunda composición que comprende al menos un TPCD.

12. El kit para uso de acuerdo con la reivindicación 11 en el que la primera composición que comprende al menos un TPCD y las segundas composiciones que comprenden al menos un TPCD se seleccionan entre el grupo que 65 consiste en miniplasmina, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada, miniplasmina estabilizada recombinante, variantes de miniplasmina, microplasmina, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada, microplasmina estabilizada recombinante, variantes de microplasmina y cualquiera de sus combinaciones.

13. El kit para uso de acuerdo con la reivindicación 11 o 12, en el que la primera composición que comprende al menos un TPCD y la segunda composición que comprende al menos un TPCD se administran al sujeto en 5 sustancialmente el mismo momento o en diferentes momentos.

14. Uso de una cantidad eficaz de una composición que comprende al menos un TPCD en la preparación de un medicamento para uso en la realización de una vitrectomía en un sujeto.

15. El uso de la reivindicación 14, en el que dicho medicamento se usa antes de la vitrectomía, o se usa al mismo tiempo que la vitrectomía.

16. El uso de la reivindicación 14 o 15, en el que el TPCD se selecciona entre el grupo que consiste en miniplasmina, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada, miniplasmina estabilizada recombinante, variantes de miniplasmina, microplasmina, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada, microplasmina estabilizada recombinante, variantes de microplasmina y cualquiera de sus combinaciones.

17. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, en el que el sujeto es un ser humano.

18. El uso de una cualquiera de la reivindicaciones 14 a 17, en el que se realiza la vitrectomía para tratar o prevenir un trastorno, o una complicación de un trastorno de un ojo, en el que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones.

19. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, en el que se lleva a cabo la vitrectomía con un objetivo seleccionado entre el grupo que consiste en reducir la viscosidad del vítreo, licuificar el vítreo, inducir el desprendimiento posterior del vítreo, aclarar o reducir la sangre hemorrágica procedente del vítreo, aclarar o reducir las sustancias extrañas intraoculares procedentes del vítreo, aclarar o reducir los materiales tóxicos en la retina, aumentar la difusión de un agente o una composición administrados en el vítreo y/o el humor acuoso, disminuyendo la neovascularización extrarretinal y cualquiera de sus combinaciones.

20. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19, en el que el medicamento es una disolución líquida.

21. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 20, en el que se va a administrar una cantidad eficaz de

TPCD por ojo en el intervalo de 0, 005 mg a 0, 2 mg. 40

22. Una composición que comprende una proteína plasmina truncada que comprende un dominio catalítico de la plasmina (TPCD) para el uso en el tratamiento o la prevención de un trastorno, o una complicación de un trastorno, de un ojo de un sujeto, en el que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética 45 proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones.

50 23. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 22, en la que el TPCD tiene un peso molecular de menos de 40.000 daltons, entre 20.000 y 30.000 daltons, 26.500 daltons en forma reducida o 29.000 daltons en forma no reducida, o menos de 20.000 daltons.

24. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 22, en la que dicho TPCD se selecciona entre el 55 grupo que consiste en miniplasmina, miniplasmina estabilizada, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada recombinante, microplasmina, microplasmina estabilizada, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada recombinante, y una variante de microplasmina.

25. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24 que comprende 60 además al menos un segundo agente.

26. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 25, en la que el segundo agente se selecciona entre el grupo que consiste en hialuronidasa, dispasa, condroitinasa, colagenasa, péptidos que contienen RGD, anticuerpo dirigido contra integrina, urea, hidroxiurea, tiourea, antagonistas del receptor P2Y, inhibidores angiogénicos, 65 inhibidores de VEGF, inhibidores de P1GF y cualquiera de sus combinaciones.

27. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 26, en la que el tratamiento o la prevención dan como resultado uno de los siguientes; reducir la viscosidad del vítreo, licuificar el vítreo, inducir el desprendimiento posterior del vítreo, aclarar o reducir la sangre hemorrágica procedente del vítreo, aclarar o reducir las sustancias extrañas intraoculares procedentes del vítreo, aclarar o reducir los materiales tóxicos en la retina, aumentar la difusión de un agente o una composición administrados en el vítreo y/o el humor acuoso, disminuyendo la neovascularización extrarretinal y cualquiera de sus combinaciones.

28. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en la que la composición es una disolución líquida. 10

29. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 28, en la que el sujeto es un ser humano.

30. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 29, en la que el

tratamiento o la prevención se llevan a cabo en ausencia de vitrectomía, o en la que el tratamiento o la prevención se llevan a cabo como un auxiliar a la vitrectomía.

31. La composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 30, en la que la composición comprende una cantidad eficaz de TPCD que se va a administrar por ojo en el intervalo de 0, 005 mg a 20 0, 2 mg.

32. Una composición que comprende al menos dos TPCD para el uso en el tratamiento o la prevención de un trastorno, o una complicación de un trastorno, del ojo de un sujeto, en la que el trastorno del ojo se selecciona entre el grupo que consiste en desprendimiento de retina, desgarro de la retina, hemorragia del vítreo, hemorragia diabética del vítreo, retinopatía diabética proliferativa, retinopatía diabética no proliferativa, degeneración macular relacionada con la edad, agujeros maculares, tracción vitreomacular, membrana epirretinal, exudados maculares, edema macular cistoide, deposición de fibrina, oclusión de la vena de la retina, oclusión de la arteria de la retina, hemorragia subretinal, ambliopía, endoftalmitis, retinopatía de precocidad, glaucoma, retinitis pigmentosa, y cualquiera de sus combinaciones.

33. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 32, en la que al menos dos TPCD se seleccionan entre el grupo que consiste en miniplasmina, miniplasmina recombinante, miniplasmina estabilizada, miniplasmina estabilizada recombinante, variantes de miniplasmina, microplasmina, microplasmina recombinante, microplasmina estabilizada, microplasmina estabilizada recombinante, variantes de microplasmina y cualquiera de sus combinaciones.

34. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o 14 a 21, el kit para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, o la composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 33 en la que dicho TPCD es una microplasmina humana.

35. El uso de acuerdo con la reivindicación 9 o 10 o la composición para el uso de acuerdo con las reivindicaciones 32 o 33, en el que uno de dichos al menos dos TPCD es una microplasmina humana.

36. El uso, el kit para el uso, o la composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 34 o 35, en el que la

45 secuencia de aminoácidos de dicha microplasmina humana consiste en los aminoácidos 543 a 791 de la SEQ ID NO: 10 de la figura 1 en la que el enlace peptídico entre la Arg 561 y la val 562 se escinde mediante un activador del plasminógeno.

37. El uso, el kit para el uso, o la composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 34 o 35, en el que dicha 50 microplasmina humana es un microplasminógeno activado en el que dicho microplasminógeno está codificado por la SEQ ID NO: 3 de la figura 2.

38. El uso, el kit para el uso, o la composición para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 34

a 37, en el que dicha microplasmina humana está producida mediante expresión recombinante en una levadura 55 metilotrófica.

39. El uso, el kit para el uso, o la composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 38, en el que dicha levadura metilotrófica es Pichia pastoris.