Anticuerpo monoclonal que se une a TAT226, donde el anticuerpo comprende (1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:

4; (2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5; (3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO: 7-10; (4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:12; (5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:13; y (6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO: 15-18, donde dicho anticuerpo que se une TAT226 tiene una constante de disociación (KD) de ≤ 10 nM

Anticuerpos anti-TAT226 e inmunoconjugados

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a anticuerpos anti-TAT226 e inmunoconjugados de los mismos. La invención se refiere además a métodos de utilización de anticuerpos anti-TAT226 e inmunoconjugados de los mismos.

ANTECEDENTES

Los anticuerpos que se unen a polipéptidos en la superficie de células cancerosas han demostrado que son terapias anticáncer efectivas. Dichos anticuerpos actúan a través de diversos mecanismos incluyendo, por ejemplo, la activación de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) ; inducción por el anticuerpo de la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) ; aumento de la liberación de citoquinas; e inducción de apoptosis. Véase, por ejemplo, Cardarelli et al. (2002) Cancer Immunol. Immunother. 51:15-24. Por ejemplo, HERCEPTIN® y RITUXAN® (ambos de Genentech Inc., South San Francisco, California) son anticuerpos que se han utilizado satisfactoriamente para tratar el cáncer de mama y el linfoma no de Hodgkin, respectivamente. HERCEPTIN® es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente al dominio extracelular del protooncogén del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico (HER2) humano. La sobreexpresión de la proteína HER2 se observa en el 35-30% de cánceres de mama primarios. RITUXAN® es un anticuerpo monoclonal murino/humano quimérico modificado genéticamente dirigido contra el antígeno CD20 hallado en la superficie de linfocitos B normales y malignos. Ambos anticuerpos se producen recombinantemente en células CHO. HERCEPTIN® parece actuar, en parte, inhibiendo la angiogénesis (Izumi et al. (2002) Nature 416:279280) , y RITUXAN® parece actuar, al menos en parte, induciendo la apoptosis (Cardarelli et al. (2002) Cancer Immunol. Immunother. 51:15-24) . EBI Accession No. GSP:AEG35724 describe un polipéptido de secuencia de consenso humano 01034/05915.

Los inmunoconjugados o “conjugados anticuerpo-fármaco” son útiles para la liberación local de agentes citotóxicos en el tratamiento del cáncer. Véase, por ejemplo, Syrigos et al. (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz et al. (1997) Adv. Drug Deliv. Rev. 26:151-172; patente de Estados Unidos No. 4, 975, 278. Los inmunoconjugados permiten la liberación dirigida de un grupo farmacológico a un tumor, mientras que una admisnitración sistémica de agentes citotóxicos no conjugados puede dar lugar a niveles inaceptables de toxicidad en células normales, así como en células tumorales que se desean eliminar. Véase, Baldwin et al. (Mar. 15, 1986) Lancet pp. 603-05; Torpe (1985) "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, " in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications (A. Pinchera et al., eds.) pág. 475-506. Los inmunoconjugados que reconocen polipéptidos de la superficie celular se han desarrollado y continúan desarrollándose para el tratamiento del cáncer. Para una revisión, véase, por ejemplo, Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103.

Está claro que existe una continua necesidad de agentes que reconozcan polipéptidos de la superficie celular para fines de diagnóstico y/o terapéuticos. La invención descrita aquí cumple esta necesidad y proporciona otras ventajas.

DECRIPCIÓN RESUMIDA

La presente invención proporciona anticuerpos anti-TAT226 tal como se define en las reivindicaciones.

En un aspecto, se proporciona un anticuerpo que se une a TAT226, donde el anticuerpo es tal como se define en la reivindicación 1, reivindicación 2, o reivindicación 6.

En ciertas realizaciones, cualquiera de los anticuerpos anteriores comprende además por lo menos un armazón seleccionado entre un armazón de consenso del subgrupo III de VH y un armazón de consenso del subgrupo I de VL.

En un aspecto, se proporciona un anticuerpo que se une a TAT226, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO: 22-25, y un dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO:2730, donde el anticuerpo tiene una KD de : 10nM. En una realización, el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:24 y un dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:29. En una realización, el dominio variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:24, y el dominio variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:29. En una realización, el anticuerpo comprende a dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:25, y un dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:30. En una realización, el dominio variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:25, y el dominio variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:30.

El anticuerpo anterior es un anticuerpo monoclonal. En una realización, el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado entre un fragmento Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, o (Fab') 2. En una realización, el anticuerpo es humanizado. En una realización, el anticuerpo es humano.

La presente invención proporciona además inmunoconjugados tal como se define en las reivindicaciones.

En un aspecto, un inmunoconjugado comprende cualquiera de los anticuerpos anti-TAT226 de la invención unidos convalentemente a un agente citotóxico. En una realización, el agente citotóxico se selecciona entre una toxina, un agente quimioterapéutico, un anticuerpo, un isótopo radioactivo, y una enzima nucleolítica.

En un aspecto, se proporciona un inmunoconjugado que tiene la fórmula Ab- (L-D) p, donde:

(a) Ab es cualquiera de los anticuerpos anti-TAT226, de la invención,

(b) L es un enlazador;

(c) D es un fármaco de fórmula DE o DF

y donde R2 y R6 son cada uno metilo, R3 y R4 son cada uno isopropilo, R7 es sec-butilo, cada R8 se selecciona independientemente entre CH3, O-CH3, OH, y H; R9 es H; R10 es arilo; Z es -O- o -NH-; R11 es H, alquilo C1-C8, o - (CH2) 2-O (CH2) 2-O- (CH2) 2-O-CH3; y R18 es -C (R8) 2-C (R8) 2-arilo; y (d) p varía desde aproximadamente 1 a 8.

Las siguientes realizaciones se porporcionan además para cualquiera de los inmunoconjugados anteriores. En una realización, un inmunoconjugado tiene una actividad de citólisis in vitro o in vivo. En una realización, el enlazador está unido al anticuerpo a través de un grupo tiol en el anticuerpo. En una realización, el enlazador es separable por una proteasa. En una realización, el enlazador comprende un dipéptido val-cit. En una realización, el enlazador comprende una unidad de p-aminobencilo. En una realización, la unidad de p-aminobencilo se dispone entre el fármaco y un sitio de división por proteasa en el enlazador. En una realización, la unidad de p-aminobencilo es p-aminobenciloxicarbonilo (PAB) . En una realización, el enlazador comprende 6-maleimidocaproilo. En una realización, el 6-maleimidocaproilo se dispone entre el anticuerpo y un sitio separable por proteasa en el enlazador. Las realizaciones anteriores pueden tener lugar de forma individual o en cualquier combinación entre sí.

En una realización, el fármaco se selecciona entre MMAE y MMAF. En una realización, el inmunoconjugado tiene la fórmula donde Ab es cualquiera de los anticuerpos anti-TAT226 anteriores, S es un átomo de azufre, y p varía de 2 a 5. En una realización el inmunoconjugado tiene la fórmula donde Ab es cualquiera de los anticuerpos anti-TAT226 anteriores, S es un átomo de azufre, y p varía de 2 a 5.

En un aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los inmunoconjugados anteriores y un portador farmacéuticamente aceptable. La composición puede utilizarse en un método de tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

En una realización, el trastorno proliferativo celular se selecciona entre cáncer de ovario, cáncer uterino,... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal que se une a TAT226, donde el anticuerpo comprende

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:4;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5;

(3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO: 7-10;

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:12;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:13; y

(6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO: 15-18,

donde dicho anticuerpo que se une TAT226 tiene una constante de disociación (KD) de : 10 nM.

2. Anticuerpo monoclonal que se une a TAT226, donde el anticuerpo comprende (a) , (b) , (c) o (d) :

(a)

(1) una HVR -H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:4;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5;

(3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 7;

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:12;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 13; y

(6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 15

(b)

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:4;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5;

(3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 8;

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:12;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:13; y

(6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 16

(c)

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:4;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5;

(3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 9;

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 12;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 13; y

(6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 17

(d)

(1) una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:4;

(2) una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:5;

(3) una HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 10;

(4) una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:12;

(5) una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:13; y

(6) una HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 18.

3. Anticuerpo según la reivindicación 2 (c) .

4. Anticuerpo según la reivindicación 2 (d) .

5. Anticuerpo según la reivindicación 2, que comprende además por lo menos un armazón seleccionado entre el armazón consenso del subgrupo III de VH y un armazón consenso del subgrupo I de VL.

6. Anticuerpo monoclonal que se une a TAT226, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO:22-25 y un dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEC ID NO:27-30, y donde dicho anticuerpo que se une a TAT226 tiene una constante de disociación (KD) de : 10 nM.

7. Anticuerpo según la reivindicación 6, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:24 y un

dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:29.

8. Anticuerpo según la reivindicación 7, donde el dominio variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:24, y el dominio variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:29.

9. Anticuerpo según la reivindicación 6, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:25 y un dominio variable de cadena ligera que tiene por lo menos un 95% de identidad en la secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:30.

10. Anticuerpo según la reivindicación 9, donde el dominio variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:25, y el dominio variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:30.

11. Anticuerpo según la reivindicación 1, 2 ó 6, donde el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado entre un fragmento Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, o (Fab') 2.

12. Anticuerpo según la reivindicación 1, 2 ó 6, donde el anticuerpo es humanizado.

13. Anticuerpo según la reivindicación 1, 2 ó 6, donde el anticuerpo es humano.

14. Inmunoconjugado que comprende un anticuerpo que se une a TAT226 tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, unido covalentemente a un agente citotóxico.

15. Inmunoconjugado según la reivindicación 14, donde el agente citotóxico se selecciona entre una toxina, un agente quimioterapéutico, un antibiótico, un isótopo radioactivo y una enzima nucleolítica.

16. Inmunoconjugado que tiene la fórmula Ab- (L-D) p, donde:

(a) Ab es un anticuerpo monoclonal tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13;

(b) L es un enlazador;

y donde R2 y R6 son cada uno metilo, R3 y R4 son cada uno isopropilo, R5 es -H o metilo, R7 es sec-butilo, cada R8 se selecciona independientemente entre CH3, O-CH3, OH, y H; R9 es H; R10 es arilo; Z es -O- o -NH-; R11 es H, alquilo C1-C8, o - (CH2) 2-O- (CH2) 2-O- (CH2) 2-O-CH3; y R18 es -C (R8) 2-C (R8) 2-arilo; y (d) p varía desde aproximadamente 1 a 8.

17. Inmunoconjugado según la reivindicación 16, donde el enlazador está unido al anticuerpo a través de un grupo tiol en el anticuerpo.

18. Inmunoconjugado según la reivindicación 16, donde el fármaco se selecciona entre MMAE y MMAF.

19. Inmunoconjugado según la reivindicación 18, donde el fármaco es MMAE.

20. Inmunoconjugado según la reivindicación 18, donde el fármaco es MMAF.

21. Inmunoconjugado según la reivindicación 18, donde el enlazador es separable por una proteasa.

22. Inmunoconjugado según la reivindicación 21, donde el enlazador comprende a dipéptido val-cit .

23. Inmunoconjugado según la reivindicación 21 donde el enlazador comprende una unidad p-aminobencilo.

24. Inmunoconjugado según la reivindicación 21, donde el enlazador comprende 6-maleimidocaproilo.

25. Inmunoconjugado según la reivindicación 19, donde el inmunoconjugado tiene la fórmula

donde S es un átomo de azufre, y p varía de 2 a 5.

26. Inmunoconjugado según la reivindicación 20, donde el inmunoconjugado tiene la fórmula

27. Composición farmacéutica que comprende un inmunoconjugado tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 14 a 26 para utilizar en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

28. Composición farmacéutica según la reivindicación 27, donde el trastorno proliferativo celular se selecciona entre cáncer de ovario, cáncer de útero, tumor de cerebro y tumor de Wilms.

29. Utilización de un inmunoconjugado tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 14 a 26, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

30. Utilización según la reivindicación 29, donde el trastorno proliferativo celular se selecciona entre cáncer de ovario, cáncer de útero, tumor de cerebro y tumor de Wilms.

31. Inmunoconjugado según la reivindicación 25, donde Ab es un anticuerpo monoclonal tal como se define en la reivindicación 2 (c) o la reivindicación 8.

32. Inmunoconjugado según la reivindicación 25, donde Ab es un anticuerpo monoclonal tal como se define en la reivindicación 2 (d) o la reivindicación 10.

33. Inmunoconjugado según la reivindicación 26, donde Ab es un anticuerpo monoclonal tal como se define en la reivindicación 2 (c) o la reivindicación 8.

34. Inmunoconjugado según la reivindicación 26, donde Ab es un anticuerpo monoclonal tal como se define en la reivindicación 2 (d) o la reivindicación 10.

Figura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4 Figura 5A Figura 5B Figura 6A Figura 6B Figura 7 Figura 8 Figura 9 Figura 10 Figura 11 Figura 12 Figura 13 Figura 14 Figura 15 Figura 16 Figura 17 Figura 18 Figura 19

artemisa Figura 20