VARIANTES DE PECTATO LIASA.

Una variante de una enzima parental con actividad de pectato liasa,

EC 4.2.2.2, teniendo la variante la estabilidad detergente mejorada en comparación con dicha enzima parental, y comprendiendo la variante una alteración en una o más posiciones seleccionadas del grupo que consiste en el número de posiciones: 5, 9, 11, 26, 28, 30, 31, 37, 40, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 54, 61, 64, 68, 69, 70, 71, 74, 75, 76, 79, 86, 87, 91, 99, 105, 106, 107, 111, 115, 116, 118, 122, 123, 134, 136, 139, 140, 141, 146, 148, 156, 158, 170, 182, 185, 186, 189, 193, 194, 196, 199, 201, 202, 204, 213, 215, 218, 224, 228, 229, 234, 235, 237, 251, 256, 257, 258, 272, 277, 286, 295, 298, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 314, 316, 323, 324, 326, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 349, 356, 357, 363, 366, 378, 381, 384, 386, 387, 389, 390, 391, 393 y 397, donde a) la o las alteraciones son independientemente i) una inserción de un aminoácido debajo del aminoácido que ocupa la posición, ii) una deleción del aminoácido que ocupa la posición, o iii) una sustitución del aminoácido que ocupa la posición con un aminoácido diferente; b) cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º 2: c) la enzima parental es la pectato liasa mostrada en SEC ID N.º 2 o una pectato liasa con al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2 y d) la variante tiene actividad de pectato liasa

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/DK2003/000316.

Solicitante: NOVOZYMES A/S.

Nacionalidad solicitante: Dinamarca.

Dirección: KROGSHOJVEJ 36 2880 BAGSVAERD DINAMARCA.

Inventor/es: BORCHERT, TORBEN VEDEL, BJORNVAD, MADS, ESKELUND, ANDERSEN, CARSTEN, GLAD,SANNE,SCHRODER, JOHANSEN,Katja,Salomon, FRISNER,Henrik, THISTED,Thomas.

Fecha de Publicación: 23 de Mayo de 2011.

Fecha Solicitud PCT: 14 de Mayo de 2003.

Clasificación Internacional de Patentes:

C11D3/386E
C12N9/88 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Liasas (4.).

Clasificación PCT:

C11D3/386 C […] › C11 ACEITES, GRASAS, MATERIAS GRASAS O CERAS ANIMALES O VEGETALES; SUS ACIDOS GRASOS; DETERGENTES; VELAS. › C11D COMPOSICIONES DETERGENTES; UTILIZACION DE UNA SOLA SUSTANCIA COMO DETERGENTE; JABON O SU FABRICACION; JABONES DE RESINA; RECUPERACION DE LA GLICERINA. › C11D 3/00 Otros compuestos que entran en las composiciones detergentes cubiertas por C11D 1/00. › Preparaciones que contienen enzimas.
C12N1/15 C12N […] › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N15/60 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Liasas (4).
C12N9/88 C12N 9/00 […] › Liasas (4.).
C12P19/00 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58).

Clasificación antigua:

C11D3/386 C11D 3/00 […] › Preparaciones que contienen enzimas.
C12N1/15 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N15/60 C12N 15/00 […] › Liasas (4).
C12N9/88 C12N 9/00 […] › Liasas (4.).
C12P19/00 C12P […] › Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58).

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

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Fragmento de la descripción:

Variantes de pectato liasa.

Campo técnico

La presente invención se refiere a variantes de pectato liasa que muestran alteraciones en relación a una enzima parental que muestra la actividad de pectato liasa como su actividad enzimática principal; a un método para producir tales enzimas y a métodos para usar tales enzimas en las industrias de tratamiento de fibra de celulosa, de detergentes y textiles. En comparación con la enzima parental, las variantes de pectato liasa de la presente invención pueden mostrar estabilidad mejorada en detergentes.

Antecedentes de la invención

Lo polímeros de pectina son ingredientes importantes de las paredes celulares vegetales. La pectina es un heteropolisacárido con un esqueleto compuesto de forma alternante por homogalacturonano (regiones homogéneas) y ramnogalacturonano (regiones velludas). Las regiones homogéneas son polímeros lineales de ácido alfa-D-galacturónico unidos por enlaces 1,4. Los residuos de ácido galacturónicos se pueden metil-esterificar en el grupo carboxilo a un grado variable, normalmente en una forma no aleatoria con bloques de ácido poligalacturónico que son metil-esterificados completamente.

Las enzimas pectolíticas (pectinasas) se pueden clasificar según su sustrato preferencial, pectina altamente metil-esterificada o pectina metil-esterificada baja y ácido poligalacturónico (pectato) y su mecanismo de reacción, beta-eliminación o hidrólisis. La pectinasas pueden ser principalmente endoactivas, cortando el polímero en sitios al azar dentro de la cadena para dar una mezcla de oligómeros, o pueden ser exoactivas, atacando desde un extremo del polímero y produciendo monómeros o dímeros. Diferentes actividades de pectinasa que actúa sobre las regiones homogéneas de pectina se incluyen en la clasificación de enzimas proporcionada por la Nomeclatura Enzimática (1992) tal como pectato liasa (EC 4.2.2.2), pectina liasa (EC 4.2.2.10), poligalacturonasa (EC 3.2.1.15), exo-poligalacturonasa (EC 3.2.1.67), exo-poligalacturonato liasa (EC 4.2.2.9) y exo-poli-alfa-galacturonosidasa (EC 3.2.1.82).

Las pectato liasas han sido clonadas a partir de distintos géneros bacterianos tales como Erwinia, Pseudomonas, Klebsiella y Xanthomonas. También se ha descrito la clonación de una pectato liasa a partir de Bacillus subtilis (Nassen et al. (1993) FEBS 335:319-326) y Bacillus sp. YA-14 (Kim et al. (1994) Biosci. Biotech. Biochem. 58:947-949).

Las pectato liasas generalmente se caracterizan por un pH alcalino óptimo y un requisito absoluto de cationes bivalentes, siendo Ca²⁺ el más estimulador.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una variante de enzima degradadora de la pared celular, especialmente, una variante de enzima de pectato liasa, que muestra rendimiento mejorado por encima de la pectato liasa parental cuando se aplica, por ejemplo, en detergentes o en procesos de la industria textil.

Resumen de la invención

La invención es tal y como se define en las reivindicaciones. Los inventores han detectado ahora que determinadas sustituciones de aminoácido de enzimas degradadoras de la pared celular, especialmente las pectato liasas con una estructura que incluye una hélice beta, producen variantes enzimáticas con rendimiento mejorado en la gama de pH alcalino o neutro en comparación con la enzima parental. Las variantes de pectato liasa de la invención, cuando se las usa en composiciones de detergentes, han mejorado la estabilidad de almacenamiento, es decir, menor sensibilidad a los detergentes.

Así, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a una variante de pectato liasa que comprende alteraciones en una o más posiciones seleccionadas del grupo que consiste en el número de posiciones:

5, 9, 11, 26, 28, 30, 31, 37, 40, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 54, 61, 64, 68, 69, 70, 71, 74, 75, 76, 79, 86, 87, 91, 99, 105, 106, 107, 111, 115, 116, 118, 122, 123, 134, 136, 139, 140, 141, 146, 148, 156, 158, 170, 182, 185, 186, 189, 193, 194, 196, 199, 201, 202, 204, 213, 215, 218, 224, 228, 229, 234, 235, 237, 251, 256, 257, 258, 272, 277, 286, 295, 298, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 314, 316, 323, 324, 326, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 349, 356, 357, 363, 366, 378, 381, 384, 386, 387, 389, 390, 391, 393 y 397, donde las alteraciones son independientemente

(i) una inserción de un aminoácido abajo del aminoácido que ocupa la posición,

(ii) una deleción del aminoácido que ocupa la posición, o

(iii) una sustitución del aminoácido que ocupa la posición con un aminoácido diferente,

y caracterizadas por el hecho de que cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2, y donde la enzima parental es la pectato liasa mostrada en SEC ID N.º 2 o una pectato liasa con al menos 95% de identidad con la secuencia de hbox{aminoácidos de SEC ID N.º 2.}

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos que codifica la variante de pectato liasa.

En un tercer aspecto de la invención, se proporciona un vector de expresión.

En un cuarto aspecto de la presente invención, se proporciona una célula huésped microbiana transformada con el vector de expresión anteriormente mencionado.

En un quinto aspecto de la presente invención, se proporciona un método para mejorar la estabilidad del detergente de una pectato liasa que comprende la alteración de uno o más aminoácidos.

En un sexto aspecto de la invención, se proporcionan métodos para producir una variante de pectato liasa según la invención. Los mismos comprenden el cultivo de una célula en la cual se ha introducido un vector de expresión como se describe más arriba, por el cual dicha célula expresa la variante codificada por la secuencia de ácidos nucleicos y la recuperación de la variante de pectato liasa.

La variante de pectato liasa de la invención es útil para el tratamiento de material celulósico, especialmente, fibra con celulosa, hilo, tela tejida o no tejida, tratamiento de pastas de papel de producción de papel mecánicas o desperdicios de papel para reciclaje, y para el enriado de fibras. El tratamiento puede llevarse a cabo durante el tratamiento de material celulósico en un material preparado para la producción de prendas o producción de tejidos, por ejemplo, en el paso de desencolado o descrudado; o durante el lavado industrial o doméstico de tales tejidos o prendas.

Por consiguiente, en otros aspectos, la presente invención se refiere a una composición de detergente que comprende una variante de pectato liasa con considerable actividad de degradación de la pared celular. También se refiere al uso de la variante de pectato liasa de la invención para el tratamiento, por ejemplo, de la limpieza de fibras con celulosa, hilo, tela tejida o no tejida.

Además, aspectos adicionales de la invención se refieren a una composición enzimática que comprende la variante de pectato liasa de la invención en combinación con otras enzimas, y a una composición de detergente o de limpieza, preferiblemente, una composición de lavado de platos o de lavandería, comprendiendo la variante de pectato liasa de la invención.

La variante de pectato liasa de la invención es muy eficaz para el uso en un proceso de descrudado enzimático en la preparación de material celulósico, por ejemplo, para una respuesta apropiada en operaciones de tinte posteriores.

Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de vino y zumo. La enzima o preparación enzimática se puede utilizar en el tratamiento de trituración de frutas y verduras para mejorar la capacidad extractiva y de degradación de la trituración.

Además, un aspecto de la invención es la aplicación como un aditivo de pienso. Cuando se agrega a pienso con material vegetal de soja, semilla de colza, lupín, etc., la variante de pectato liasa mejora significativamente la descomposición in vivo del material de la pared celular vegetal, por lo que se consigue una mejor utilización de los nutrientes vegetales por parte del animal.

Definiciones

Antes de describir esta invención con más detalle, se definirán primeramente los siguientes términos y convenciones.

El... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Una variante de una enzima parental con actividad de pectato liasa, EC 4.2.2.2, teniendo la variante la estabilidad detergente mejorada en comparación con dicha enzima parental, y comprendiendo la variante una alteración en una o más posiciones seleccionadas del grupo que consiste en el número de posiciones: 5, 9, 11, 26, 28, 30, 31, 37, 40, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 54, 61, 64, 68, 69, 70, 71, 74, 75, 76, 79, 86, 87, 91, 99, 105, 106, 107, 111, 115, 116, 118, 122, 123, 134, 136, 139, 140, 141, 146, 148, 156, 158, 170, 182, 185, 186, 189, 193, 194, 196, 199, 201, 202, 204, 213, 215, 218, 224, 228, 229, 234, 235, 237, 251, 256, 257, 258, 272, 277, 286, 295, 298, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 314, 316, 323, 324, 326, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 349, 356, 357, 363, 366, 378, 381, 384, 386, 387, 389, 390, 391, 393 y 397, donde

a) la o las alteraciones son independientemente i) una inserción de un aminoácido debajo del aminoácido que ocupa la posición, ii) una deleción del aminoácido que ocupa la posición, o iii) una sustitución del aminoácido que ocupa la posición con un aminoácido diferente; b) cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º 2: c) la enzima parental es la pectato liasa mostrada en SEC ID N.º 2 o una pectato liasa con al menos 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2 y d) la variante tiene actividad de pectato liasa.

2. Variante según la reivindicación 1 donde la o las alteraciones son sustitución o sustituciones.

3. Variante según la reivindicación 1 o 2 que comprende una o más sustituciones seleccionadas del grupo que consisten en: H5R, E9G, N11Y, K26Q, S28T, S30F, S30P, S30T, H31N, N37D, Q40E, L45V, G46D, K47N, K47R, D48E, D48P, T49P, N50D, N50L, N50Y, N51Y, T52M, K54V, T61A, M64F, D68*, N69*, L70*, K71*, K71 E, G74D, L75A, L75P, N76D, K79A, D86N, K87A, K87E, A91E, K99I, K99N, K99R, T105A, T105P, L106Q, E107K, A111E, K115A, K115I, K115N, K115Q, N116D, K118A, K118E, M122E, M122K, M122N, M122Q, V123I, S134L, T136S, K139E, K139F, K139I, K139M, K139N, K139S, I140V, V141G, V141E, V141L, V141N, Q146F, Q146H, Q146I, Q146V, K148E, K148Q, N156S, E158N, D170N, Q182D, Q182E, N185H, N186H, N189D, H193Y, I194V, I196V, C199N, C199S, F201L, N202K, G204R, K213E, K213N, K213T, F215Y, K218E, K218L, K218P, G224S, A228I, S229T, Y234H, I235V, M237I, F251I, S256C, K257E, K257N, T258I, L286Y, R272C, R272H, R272Y, V277D, G286A, Y295H, S298N, S301Y, S302A, D303S, A305P, S307R, Y308S, K314N, S316F, N323M, V324A, D326N, S331P, S331T, A332P, A333E, K334E, T335S, T335R, I336S, S337C, S337K, S337L, S337R, V338E, V338Y, F339I, S340A, S340K, S340N, S340P, S340Q, G341S, G349R, Q356H, I357V, N363S, S366N, T378G, T378S, A381D, H384N, K386P, K386R, S387A, V389I, I390N, I390T, S391 N, A393V y K397D, y caracterizada por el hecho de que cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.º 2.

4. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende un conjunto de sustituciones seleccionadas del grupo que consisten en:

K139I+Q146H+S337C;

D48P+K99I+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S33IP;

D48P+M64F+K139I+Q146H+K213T+K218L+A305P+S337C;

D48P+M64F+K139I+Q146H+K213T+K218L+A305P+S337K;

D48P+M64F+K1391+Q146H+K213T+K218L+A305P+S337R;

D48P+M64F+K99I+K118E+M122K+Q146H+K213N+K218P+A305P+S331P;

D48P+M64F+K99R+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K;

D48P+M64F+L106Q+K139I+Q146H+K213T+K218L+Y234H+A305P+S331P+S337C;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+C199S+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K148E+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337R;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K148Q+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337R;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S340P;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K+S340P;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+K334E+S340P;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+K334E+ S337K+S340P;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+ S337K;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+K334E+S337K;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+K213T+K218P+T258I+Y295H+A305P+S331P+S337K;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+N189D+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337R;

D48P+M64F+T105P+K139I+Q146H+N189D+K213T+K218P+T258I+S298N+A305P+ S331P+S337R;

D48P+M64F+T105P+K139I+V141E+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K;

D48P+M64F+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+5337K;

D48P+M64F+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337R;

D48P+M64F+T105P+K139N+Q146H+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P;

D48P+M64F+T105P+M122K+K118E+K213T+K218P+A305P+S331P;

D48P+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P;

D48P+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337K;

D48P+T105P+K139N+K213T+K218P+T258I+A305P+S331P+S337R;

M64F+M122K+K118E+Q146H+K213T+K218L+A305P+S337K;

M64F+M122K+K118E+Q146H+K213T+K218L+A305P+S337R; y

M64F+M122K+K118E+Q146H+K213T+K218L+A305P+S340P;

5. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la pectato liasa progenitora se codifica por un polinucleótido que hibridiza bajo condiciones de astringencia alta, con el polinucleótido de SEC ID N.º 1 o su cadena complementaria.

6. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es trece.

7. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es doce.

8. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es once.

9. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es diez.

10. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es ocho.

11. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es siete.

12. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es cuatro.

13. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es tres.

14. Variante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el número total de alteraciones es dos.

15. Polinucleótido que codifica la variante de cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

16. Vector de expresión que comprende el polinucleótido según la reivindicación 15.

17. Célula huésped microbiana transformada con el vector de expresión según la reivindicación 16.

18. Célula huésped microbiana según la reivindicación 17, en la que la célula es una Bacillus subtilis.

19. Célula huésped microbiana según la reivindicación 17, en la que la célula es una Aspergillus.

20. Método para la producción de una variante de pectato liasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que una célula huésped microbiana según cualquiera de las reivindicaciones 17-19 es cultivada bajo condiciones conductoras a la expresión y la secreción de la variante, y siendo la variante es recuperada.

21. Método para mejorar la estabilidad detergente de una pectato liaza, que comprende la aleración de una o más posiciones seleccionadas a partir del grupo que consiste en el número de posiciones: 5, 9, 11, 26, 28, 30, 31, 37, 40, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 54, 61, 64, 68, 69, 70, 71, 74, 75, 76, 79, 86, 87, 91, 99, 105, 106, 107, 111, 115, 116, 118, 122, 123, 134, 136, 139, 140, 141, 146, 148, 156, 158, 170, 182, 185, 186, 189, 193, 194, 196, 199, 201, 202, 204, 213, 215, 218, 224, 228, 229, 234, 235, 237, 251, 256, 257, 258, 272, 277, 286, 295, 298, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 314, 316, 323, 324, 326, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 349, 356, 357, 363, 366, 378, 381, 384, 386, 387, 389, 390, 391, 393 y 397, caracterizada por el hecho de que

a) la o las alteraciones son independientemente i) una inserción de un aminoácido debajo del aminoácido que ocupa la posición, ii) una deleción del aminoácido que ocupa la posición, o iii) una sustitución del aminoácido que ocupa la posición con un aminoácido diferente; b) cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2; c) la pectato liasa tiene al menos 95% de identidad a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2 y d) la variante tiene actividad de pectato liasa.

22. Método según la reivindicación 21, donde la o las alteraciones son sustituciones.

23. Método según la reivindicación 21 o 22 que comprende una o más sustituciones seleccionadas a partir del grupo que consisten en: H5R, E9G, N11Y, K26Q, S28T, S30F, S30P, S30T, H31N, N37D, Q40E, L45V, G46D, K47N, K47R, D48E, D48P, T49P, N50D, N50L, N50Y, N51Y, T52M, K54V, T61A, M64F, D68*, N69*, L70*, K71*, K71E, G74D, L75A, L75P, N76D, K79A, D86N, K87A, K87E, A91E, K99I, K99N, K99R, T105A, T105P, L106Q, E107K, A111E, K115A, K115I, K115N, K115Q, N116D, K118A, K118E, M122E, M122K, M122N, M122Q, V123I, S134L, T136S, K139E, K139F, K139I, K139M, K139N, K139S, I140V, V141G, V141 E, V141L, V141N, Q146F, Q146H, Q146I, Q146V, K148E, K148Q, N156S, E158N, D170N, Q182D, Q182E, N185H, N186H, N189D, H193Y, I194V, I196V, C199N, C199S, F201L, N202K, G204R, K213E, K213N, K213T, F215Y, K218E, K218L, K218P, G224S, A228I, S229T, Y234H, I235V, M237I, F251I, S256C, K257E, K257N, T258I, L286Y, R272C, R272H, R272Y, V277D, G286A, Y295H, S298N, S301Y, S302A, D303S, A305P, S307R, Y308S, K314N, S316F, N323M, V324A, D326N, S331P, S331T, A332P, A333E, K334E, T335S, T335R, I336S, S337C, S337K, S337L, S337R, V338E, V338Y, F339I, S340A, S340K, S340N, S340P, S340Q, G341S, G349R, Q356H, I357V, N363S, S366N, T378G, T378S, A381 D, H384N, K386P, K386R, S387A, V389I, I390N, I390T, S391N, A393V y K397D, y donde cada posición corresponde a una posición de la secuencia de aminoácidos de la pectato liasa con la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2.

24. Composición de detergente o limpieza, preferiblemente una composición de lavado de lavandería o de vajillas, que comprende la variante tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-14 y además comprende un tensioactivo.

25. Composición según la reivindicación 24, que adicionalmente comprende una celulasa, una lipasa, una cutinasa, una oxidorreductasa, una proteasa, una amilasa, una hemicelulasa, tal como una mananasa, una xilanasa, una galactanasa, una arabinofuranosidasa, una esterasa, un liquenasa, una arabinanasa, otra pectato liasa o una mezcla de las mismas.

26. Uso de una variante de pectato liasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-14 en una composición de detergente.

27. Uso de una variante de pectato liasa según cualquiera de las reivindicaciones 1-14 en el tratamiento de fibra celulósica y textil.

28. Método de descrudado enzimático, que comprende el contacto del material de la pared celular con la variante de pectato liasa definida en cualquiera de las reivindicaciones 1-14.

29. Método para la eliminación enzimática de material de pared celular de tejidos, que comprendiente el contacto del tejido con la variante de pectato liasa definida en cualquiera de las reivindicaciones 1-14.

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