Ácido nucleico antisentido capaz de hibridarse con un ácido nucleico que codifica a una proteína CRMP,

o anticuerpo anti-CRMP, para su utilización en el tratamiento de una patología que implica un disfuncionamiento de los linfocitos T, seleccionándose dicha patología de entre: - las enfermedades de priones; - las enfermedades neuroinflamatorias desmielinizantes; y - la esclerosis en placas.

La presente solicitud se refiere a una nueva utilización de proteínas llamadas "CRMPs" (Collapsin Response Mediator Proteins) para el diagnóstico y la terapia de patologías ligadas a un disfuncionamiento del sistema inmunitario.

Las CRMPs, también conocidas bajo las denominaciones TOAD-64 (Minturn y otros, 1995, J Neurosci 15:6757-6766) , DRP (Dihydropyrimidinase related protein, Hamajima y otros, 1996, Gene 180:157-163) , C-22 (Quach y otros, 1997, Mol Brain Res 46:329-332) o ULIP (Unc-33-Like protein, Byk y otros, 1998, Eur J Blochem 254:14-24 y solicitud internacional WO 98/37 192) , son moléculas de señalización intracelular a día de hoy reconocidas como específicas del sistema nervioso. Estas proteínas se han descrito en especial como estando implicadas en el control del desarrollo neuronal y el crecimiento axonal.

A día de hoy, se han identificado cinco proteínas de esta familia, CRMP1, CRMP2, CRMP3, CRMP4 y CRMP5.

Determinados miembros de la familia se han asociados a desórdenes neurodegenerativos humanos. En la enfermedad de alzhéimer, se observan niveles elevados de CRMP2 fosforilados en asociación con placas de neurofibrillas (Yoshida y otros, 1998, J Biol Chem 273:9761-9768) .

En los síndromes neurológicos paraneoplásicos (SNP) , que son desórdenes neurodegenerativos, unos pacientes desarrollan auto-anticuerpos (anticuerpos anti-CV2) que reconocen a las proteínas CRMP (Honnorat y otros, 1999, Eur J Neurosci 11:4226-4232) .

A continuación, se ha propuesto utilizar estas proteínas en el diagnóstico y la terapia de los cánceres y de los SNP (FR 2 805 540 y WO 98137192) .

Yu y otros, 2001 (Annals of Neurology, 49 (2) :146-154) informan por otro lado de la presencia de autoanticuerpos neuronales anti-CRMP5 en casos de cáncer de pulmón y de timoma.

De manera inesperada, los inventores han puesto en evidencia la presencia de las CRMP en los linfocitos T. Más especialmente, han mostrado CRMPs 1, 2 y 4 a concentraciones elevadas en los linfocitos T en pacientes con patologías disinmunes. En este caso, ocurre que la presencia de estas proteínas aumenta cuando está asociada a una anomalía de muerte o de proliferación de los linfocitos.

Por otro lado, los inventores también han observado una translocación nuclear muy aumentada de la CRMP2 de los linfocitos infectados por HTLV-1 y los hace probablemente hiperproliferativos, o de linfocitos T de pacientes que presentan una deficiencia inmune ligada al sistema ligante Fas-Fas. Esta translocación correspondería a una forma muy fosforilada de CRMP2, más especialmente reconocida por su anticuerpo específico.

Finalmente, como se verá a partir de los ejemplos siguientes, la presencia de estas proteínas también se ha caracterizado en células epiteliales tímicas desde el estadio embrionario. Este descubrimiento de CRMPs en las células epiteliales inmaduras es uno de los escasos ejemplos de proteína de señalización intracelular en el timo.

Por otro lado, la desaparición de los CRMPs en el timo adulto y su inducción en las células T tras estimulación del TCR indica una relación con la "recolocación" del receptor de las células T, TCR, y la educación de los timocitos.

Consecuentemente, el conjunto de estos nuevos datos testifica acerca de la intervención de las proteínas CRMPs en una vía de señalización que conduce a la proliferación, la muerte, la maduración y la educación de los linfocitos y por lo tanto de su implicación en la regulación de la respuesta inmunitaria.

Estas observaciones son tanto más inesperadas debido a que, hasta el día de hoy, las CRMPs solamente se consideraban sobre todo desde un punto de vista terapéutico como blancos potenciales para tratar patologías del sistema nervioso central (SNC) .

Está claro que este descubrimiento abre nuevas perspectivas terapéuticas. A partir de ahora es concebible actuar sobre la proliferación o la muerte de células T y/o actuar sobre las células del timo y la auto-inmunidad mediante una intervención al nivel de las proteínas CRMPs en los linfocitos.

En este caso, la presente solicitud propone utilizar las CRMPs como dianas para el tratamiento, el pronóstico y/o el diagnóstico de patologías ligadas a un disfuncionamiento del sistema inmunitario y en especial de la proliferación de las células T.

Se trata en particular de modular la expresión o la actividad de una o varias CRMPs, de tal manera que pueda modular la apoptosis, la proliferación o la migración de las células.

Así, una alteración de las CRMPs, como por ejemplo una modificación de la fosforilación de CRMP2, es susceptible de conducir a una hiperproliferación o a una muerte celular.

Asimismo, una estimulación de las CRMPs parece constituir un medio eficaz para restaurar una señalización deficiente y mejorar la supervivencia linfocitaria como en el caso de la infección por el VIH.

Finalmente, un control de la hiper-expresión de las CRMPs parece determinante para reducir la proliferación de linfocitos que se han vuelto "hiper" proliferativos como en el caso de una infección por HTLV-1 o una mutación de Fas. Esta inhibición podría también mejorar los procesos autoinmunes que implican linfocitos T que reconocen determinantes de uno mismo (auto reactivos) , y los ataques del SNC ligados a la invasión del SNC por estos linfocitos T (TSP/HAM ligada a HTLV-1, encefalitis ligada a la rubéola, esclerosis en placas) .

En determinados casos, se busca por lo tanto preferentemente aumentar o estimular la expresión o la actividad de las CRMPs (por ejemplo en el caso de una infección de los linfocitos por el virus VIH del SIDA) . En otros casos, en cambio, se busca reprimir o inhibir la expresión o la actividad de las CRMP, por ejemplo para reducir la proliferación o la migración de los linfocitos, por ejemplo en el caso de un linfoma.

Bloquear la actividad CRMP también puede ser ventajoso para bloquear el efecto de la proteína prión PrP patológica.

La solicitud describe ante todo la utilización de al menos una proteína de la familia de las CRMPs, fragmento polipeptídico o derivado biológicamente activo de esta, o de una secuencia o fragmento de secuencia nucleotídica que codifica a dicha proteína para la fabricación de un medicamento destinado a tratar patologías ligadas a un disfuncionamiento del sistema inmunitario.

La solicitud describe a continuación la utilización de una secuencia anti-sentido capaz de hibridarse específicamente con una secuencia nucleotídica que codifica a dicha proteína o a un anticuerpo dirigido contra dicha proteína para la fabricación de un medicamento destinado a tratar patologías ligadas a un disfuncionamiento del sistema inmunitario.

La solicitud describe también la utilización de una secuencia peptídica capaz de actuar con dicha proteína, o compuestos farmacéuticos capaces de controlar la expresión de dicha proteína, y/o de sus parejas y/o de sus interacciones, para la fabricación de un medicamento destinado a tratar patologías ligadas a un disfuncionamiento del sistema inmunitario.

La solicitud describe por otro lado un método de prevención y/o tratamiento de una patología ligada a un disfuncionamiento del sistema inmunitario, comprendiendo esta método la administración a un paciente que necesita un tal tratamiento en una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente modulador de la expresión o de la actividad de una CRMP, en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Estos modos de realización se detallan a continuación.

Más concretamente, la presente invención se refiere a un ácido nucleico antisentido capaz de hibridarse con un ácido nucleico que codifica a una proteína CRMP, o anticuerpo anti-CRMP, para su utilización en el tratamiento de una patología que implica un disfuncionamiento de los linfocitos T, seleccionándose dicha patología de entre:

- las enfermedades de priones;

- las enfermedades neuroinflamatorias desmielinizantes; y

- la esclerosis en placas.

La presente invención también tiene por objeto un método de cribado in vitro de moléculas útiles para el tratamiento de enfermedades de priones, en el cual se ponen en contacto una molécula a verificar con una proteína prión PrP y una proteína CRMP, y se evalúa la capacidad de la molécula para... [Seguir leyendo]

1. Ácido nucleico antisentido capaz de hibridarse con un ácido nucleico que codifica a una proteína CRMP, o anticuerpo anti-CRMP, para su utilización en el tratamiento de una patología que implica un disfuncionamiento de los linfocitos T, seleccionándose dicha patología de entre:

- las enfermedades de priones; -las enfermedades neuroinflamatorias desmielinizantes; y -la esclerosis en placas.

2. Ácido nucleico antisentido o anticuerpo anti-CRMP para su utilización según la reivindicación 1, en la cual la proteína CRMP es CRMP2 o CRMP5.

3. Método de cribado in vitro de moléculas útiles para el tratamiento de enfermedades de priones, en la cual se ponen en contacto una molécula a verificar con una proteína prión PrP y una proteína CRMP, y se evalúa la capacidad de la molécula para inhibir la interacción de la CRMP, o de un dímero de CRMP, con la proteína PrP, siendo una acción inhibidora de esta interacción indicativa de una molécula útil para el tratamiento de enfermedades de priones.

4. Método in vitro de pronóstico y/o de diagnóstico de una patología ligada a un disfuncionamiento del sistema inmunitario, comprendiendo el método la puesta en evidencia en células del sistema inmunitario extraídas de un paciente, de una expresión o localización anormal de una proteína CRMP con respecto a células de control, en la cual dichas células del sistema inmunitario son unos linfocitos, seleccionándose dicha patología de entre:

a. Las enfermedades de priones;

b. La esclerosis en placas;

c. y las enfermedades neuroinflamatorias desmielinizantes.

5. Método según la reivindicación 4, siendo dicha patología la esclerosis en placas.

6. Método según la reivindicación 4, siendo dicha patología una enfermedad neuroinflamatoria desmielinizante.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el cual la proteína CRMP es CRMP2 o CRMP5.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el cual la expresión o la localización anormal de la proteína CRMP está asociada a una fosforilación modificada de la proteína CRMP con respecto a células de control, y en la cual la proteína CRMP es CRMP2.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el cual la puesta en evidencia de una expresión o localización anormal de la proteína CRMP se realiza con ayuda de anticuerpos anti-CRMP.

10. Método según la reivindicación 9, en el cual dicho anticuerpo anti-CRMP es un anticuerpo dirigido contra un péptido de secuencia SEQ ID No 24, SEQ ID No 28 o SEQ ID No 27.

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FIG.8 (Final)

Nº de Células que han migrado x 103 Nº de Células que han migrado x 103 Células que han migrado x 103