USO DE INHIBIDORES DE IL-18.

La presente descripción se refiere al uso terapéutico de inhibidores de IL-18 en el tratamiento y/o prevención de la hepatitis alcohólica. Antecedentes de la invención ES 2 365 600 T3 En 1989, se describió una actividad de suero inducida por endotoxina que inducía interferón- (IFN-) obtenido a partir de células de bazo de ratón (Micallef et al., 1996). Esta actividad de suero no funcionó como un inductor directo de IFN-, sino como un co-estimulante conjuntamente con IL-2 o mitógenos. Un intento de purificar la actividad a partir de suero de ratón post-endotoxina puso de manifiesto una proteína de 50-55 kDa aparentemente homogénea. Como otras citoquinas pueden actuar como co-estimulantes para la producción de IFN-, el fallo para neutralizar anticuerpos para IL-1, IL-4, IL-5, IL-6 o TNF para neutralizar la actividad de suero sugirió que era un factor distinto. En 1995, los mismos científicos demostraron que el co-estimulante inducido por endotoxina para producción de IFN- estaba presente en extractos de hígados de ratones previamente acondicionados con P. acnes (Novick et al., 1992). En este modelo, la población de macrófagos hepáticos, (células de Kupffer) se expandía y en estos ratones, una dosis baja de lipopolisacárido bacteriano (LPS), que en ratones no preacondicionados no es mortal, se convierte en mortal. El factor, denominado factor inductor de IFN- (IGIF) y posteriormente denominado interleucina-18 (IL-18), fue purificado hasta una homogeneidad de 1200 gramos de hígados de ratón tratados con P. acnés. Los oligonucleótidos degenerados derivados de secuencias de aminoácidos de IL-18 purificada fueron usados para clonar un cDNA de IL-18 de múridos (Novick et al., 1992). La IL-18 es una proteína de 18-19 kDa de 157 aminoácidos, que no tenía analogías obvias con ningún péptido en las bases de datos. Los RNA mensajeros para IL-18 e interleucina-12 (IL-12) son fácilmente detectados en células de Kupffer y macrófagos activados. La IL­ 18 recombinante induce IFN-gamma de forma más potente que la IL-12, aparentemente a través de una trayectoria separada (Novick et al., 1992). De forma similar a la actividad de suero inducida por endotoxina, la IL-18 no induce IFN- por sí misma, sino que funciona principalmente como un co-estimulante con mitogenes o IL-2. La IL-18 aumenta la proliferación de células T, aparentemente a través de una trayectoria dependiente de IL-2 y aumenta la producción de citoquinas Th1 in vitro y exhibe un sinergismo cuando se combina con IL-12 en términos de producción mejorada de IFN- (Maliszewski et al., 1990). La neutralización de anticuerpos para IL-18 de ratón se mostró que evitaba la mortalidad de LPS de dosis baja en ratones pre-acondicionados con P acnés. Otros han descrito la importancia de IFN- como un mediador de la mortalidad de LPS en ratones pre-acondicionados. Por ejemplo, la neutralización de ratones protegidos con anticuerpos anti- IFN- contra un choque de tipo Shwartzman (Fantuzzi et al., 1998), y ratones tratados con galactosamina deficientes en el receptor de IFN- eran resistentes a la muerte inducida por LPS (Bym, 1990). Por tanto, no era de esperar que los anticuerpos neutralizantes para IL-18 de múridos protegieran ratones preacondicionados con P. acnes contra LPS mortal (Novick et al., 1992). El tratamiento de IL-18 anti-múridos protegía también los ratones supervivientes contra una citotoxicidad hepática grave. Después de que la forma de múrido fue clonada, se describió la secuencia de cDNA humano para IL-18 en 1996 (Okamura et al., 1995). La IL-18 humana recombinante exhibe actividad de IL-18 natural (Okamura et al., 1995). La IL-18 recombinante humana está sin actividad inductora de IFN- directa sobre células T humanas, pero actúa como una co-estimulante para la producción de IFN- y otras citoquinas de células-1 helper T (Th 1) (Okamura et al., 1995). Hasta la fecha, la IL-18 se creía que era principalmente un co-estimulante para la producción de citoquinas de th1 (IFN-, IL-2 y factor estimulante de colonias de granulocitos-macrofagos) (Izaki, 1978) y también como un coestimulante para la citotoxicidad mediada por ligandos FAS de clones de células asesinas naturales de múridos (Novick et al., 1989). Clonando IL-18 a partir de tejidos afectados y estudiando la expresión de genes de IL-18, se encontró una asociación estrecha de esta citoquina con una enfermedad autoinmune. El ratón diabético no obeso (NOD) desarrolla espontáneamente insulitis autoinmune y diabetes, que pueden ser aceleradas y sincronizadas mediante una inyección única de ciclofosfamida. El mRNA de IL-18 aumentó rápidamente después del tratamiento con ciclofosfamida y precedió una elevación en mRNA de IFN- y posteriormente diabetes. De forma interesante, estas cinéticas emulan la de mRNA de IL-12-p40, dando lugar a una estrecha correlación de los niveles individuales de mRNA. La clonación del cDNA de IL-18 de RNA de páncreas seguida de secuenciado puso de manifiesto una identidad con la secuencia de IL-18 clonada a partir de células de Kupffer y macrófagos pre-activados in vivo. También, los macrófagos de ratón NOD respondieron a la ciclofosfamida con una expresión génica de IL-18, mientras que los macrófagos de ratones Balb-c tratados en paralelo no lo hicieron. Por lo tanto, la expresión de IL-18 está anormalmente regulada en ratones NOD autoinmunes y estrechamente asociada con el desarrollo de diabetes (Novick et al., 1992). 2 ES 2 365 600 T3 La IL-18 desempeña una función potencial en la inmuno-regulación o en la inflamación aumentando la actividad funcional de ligando Fas en células Th1 (Conti et al., 1997). La IL-18 es expresada también en la corteza adrenal y, por lo tanto, puede ser un neuro-inmunomodulador secretado, desempeñando una función importante en la coordinación del sistema inmune a continuación de una experiencia estresante (Chater, 1986). In vivo, la IL-18 se forma mediante escisión de pro-IL-18 y su actividad endógena parece que toma parte en la producción de IFN- en la mortalidad mediada por P. acnés y LPS. La IL-18 madura es producida a partir de su precursor mediante la enzima conversora de IL-10 (enzima beta-conversora de IL-1 de IL-1 ICE, caspasa-1). El receptor de IL-18 consiste en la menos dos componentes que cooperan en la unión a ligandos. Se encontraron sitios de unión de afinidad elevada y baja para IL-18 en células T estimuladas por IL-12 de múridos (Yoshimoto et al., 1998), sugiriendo un complejo receptor de cadena múltiple. Han sido identificadas hasta ahora dos subunidades receptoras, pertenecientes ambas a la familia de recetores de IL-1 (Pamet et al., 1996). La transducción de señales de IL-18 incluye la activación de NF-B) (DiDonato et al., 1997). Varias proteínas de unión de citoquinas conocidas son receptores de citoquinas solubles y corresponden a los dominios de unión de ligandos extracelulares de sus receptivos receptores de citoquinas de superficies celulares. Son derivadas mediante escisión alternativa de pre-mRNA, común al receptor de superficie celular, o mediante escisión proteolítica del receptor de superficie celular. Estos receptores solubles han sido descritos en el pasado, e incluyen entre otros, los receptores solubles de IL-6 y de IFN- (Nakamura et al., 1989), TNF (Dao et al., 1996; Engelmann et al., 1989), IL-1 e IL-4 (John, 1986), IFN-/ (Mizushima y Nagata, 1990) y otros. Una proteína de unión a citoquinas, denominada osteoprotegerina (OPG, también conocida como factor inhibidor de osteoclastos, OCIF) y un miembro de la familia TNFR/Fas parece que es el primer ejemplo de un receptor soluble que existe solamente solo como una proteína secretada (Anderson, 1997; Bollon, 1980). Recientemente, ha sido aislada una proteína soluble que tiene una afinidad elevada por IL-18 a partir de orina humana y se describieron cDNAs humano y de ratón (Novick et al., 1999; documento WO 99/09063). La proteína ha sido denominada proteína de unión a IL-18 (IL-18BP). La IL-18BP no es el dominio extracelular de uno de los receptores de IL-18 conocidos, sino una proteína secretada que circula de forma natural. Pertenece a una nueva familia de proteínas secretadas. La familia incluye adicionalmente diversas proteínas codificadas por virus TOX que tienen una elevada homología a IL-18BP (Novick et al., 1999). La IL-18BP es constitutivamente expresada en el bazo, pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas y tiene una homología limitada al receptor de tipo II de IL-1. Su gen fue localizado en el cromosoma humano 11q13 yno se encontró ningún exón que codifique un dominio de transmembrana en una secuencia genómica de 8,3 kb (Novick et al., 1999). Cuatro isoformas humanas y dos de ratón de IL-18BP, resultantes de la escisión de mRNA y que se encontraban en diversas bibliotecas de cDNA han sido expresadas, purificadas y valoradas en cuanto... [Seguir leyendo]

1. Uso de un inhibidor de IL-18 seleccionado entre el grupo de un anticuerpo de IL-18 y una proteína de unión a IL­ 18, o una isoforma, una muteína, proteína fusionada, derivado funcional, fracción activa o derivado circularmente permutado del mismo que tiene esencialmente la misma actividad que una proteína de unión a IL-18, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de una lesión hepática crónica seleccionada entre el grupo que consiste en hepatitis alcohólica. 2. El uso según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo de IL-18 es un anticuerpo de IL-18 humanizado. 3. El uso según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo de IL-18 es un anticuerpo de IL-18 humano. 4. El uso según la reivindicación 1, en el que la proteína de unión a IL-18 está PEGilada. 5. El uso según la reivindicación 1, en el que el inhibidor de IL-18 es una proteína fusionada que comprende la totalidad o parte de una proteína de unión a IL-18 fusionada a la totalidad o parte de una inmunoglobulina y en el que la proteína fusionada se une a IL-18. 6. El uso según la reivindicación 5, en el que la proteína fusionada comprende la totalidad o parte de la región constante de una inmunoglobulina. 7. El uso según la reivindicación 6, en el que la inmunoglobulina es del isotipo IgG1 o IgG2. 8. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el medicamento comprende adicionalmente un interferón. 9. El uso según la reivindicación 8, en el que el interferón es interferón-ß. 10. El uso según la reivindicación 8 ó 9, en el que el inhibidor de IL-18 es usado de forma simultánea, secuencial o separada con el interferón. 11. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el medicamento comprende adicionalmente un antagonista del factor de necrosis tumoral (TNF). 12. El uso según la reivindicación 11, en el que el antagonista del TNF es un receptor I de TNF soluble (TBPI) y/o receptor II de TNF soluble (TBPII). 13. El uso según la reivindicación 11 ó 12, en el que el inhibidor de IL-18 y/o el interferón se usan de forma simultánea, secuencial o separada con el antagonista de TNF. 14. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el medicamento comprende adicionalmente un inhibidor de COX. 15. El uso según la reivindicación 14, en el que el inhibidor de COX es un inhibidor de COX-2. 16. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es usado en una cantidad de aproximadamente 0,0001 a 10 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 0,01 a 5 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 0,1 a 3 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 1 a 2 mg/kg de peso corporal. 17. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es usado en una cantidad de aproximadamente 0,1 a 1.000 µg/kg de peso corporal o 1 a 100 µg/kg de peso corporal o aproximadamente 10 a 50 µg/kg de peso corporal. 18. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es administrado por vía subcutánea. 19. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es administrado por vía intramuscular. 20. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es administrado diariamente. 24 ES 2 365 600 T3 21. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el inhibidor de IL-18 es administrado en días alternados. 22. Uso según de un vector de expresión que comprende la secuencia codificadora de la proteína de unión a IL-18 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una lesión hepática crónica seleccionada entre el grupo que consiste en hepatitis alcohólica. 23. Uso según la reivindicación 22, para una terapia génica. 24. Uso de una célula que ha sido genéticamente modificada para producir un inhibidor de IL-18, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una lesión hepática crónica seleccionada entre el grupo que consiste en hepatitis alcohólica. ES 2 365 600 T3 26 ES 2 365 600 T3 27 ES 2 365 600 T3 28 ES 2 365 600 T3 29 ES 2 365 600 T3 ES 2 365 600 T3 31 ES 2 365 600 T3 32 ES 2 365 600 T3 33 ES 2 365 600 T3 34 ES 2 365 600 T3 ES 2 365 600 T3 36 ES 2 365 600 T3 37 ES 2 365 600 T3 38 ES 2 365 600 T3 39