Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero,

que comprende las etapas de: obtener espermatozoides de mamífero; crioconservar dichos espermatozoides; descongelar dichos espermatozoides; tratar dichos espermatozoides; y crioconservar dichos espermatozoides;

REFERENCIAS CRUZADAS A APLICACIONES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de patente de EE.UU. Nº 60/410.884, presentada el 13 de septiembre de 2.003 y la solicitud no provisional de patente de EE.UU. Nº 10/340.881, presentada el 9 de enero de 2.003.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a conservación de espermatozoides y al tratamiento de espermatozoides, en general. La invención se puede aplicar a inseminación artificial, fertilización in vitro, ovulación múltiple, producción de mamíferos, muestras de esperma y tratamiento de espermatozoides, incluyendo tratamiento tal como elementos de recogida, manipulación, clasificación, almacenamiento, transporte, uso, fertilización o inseminación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La fertilización de óvulos de mamíferos, referidos potencialmente como oocitos, tal como por inseminación artificial y en técnicas de fertilización in vitro se ha dirigido a conseguir aumentar los índices de fertilidad del ganado. Además, la preselección eficaz del sexo se ha llevado a cabo en muchas especies de ganado después del desarrollo de procedimientos seguros y fiables de clasificación, generalmente, o específicamente separación de los espermatozoides en poblaciones enriquecidas portadoras de un cromosoma X y portadoras de un cromosoma Y. La separación de espermatozoides portadores de un cromosoma X de espermatozoides portadores de un cromosoma Y, así como técnicas de recogida, manipulación, clasificación, almacenamiento, transporte, uso, fertilización o inseminación o tratamiento de espermatozoides y semen generalmente se puede realizar como se describe en la presente memoria y como se describe en diversas solicitudes de patente, por ejemplo: PCT/US99/17.165; PCT/US01/45.023; PCT/US01/15.150; PCT/US98/27.909; PCT/US01/45.237, PCT/US01/18.879, PCT/US00/30.155, PCT/US01/02.304, Patente de EE.UU. Nº 6.071.689, Patente Nº 6.372.422, solicitud de patente divisional Nº 10/081.955, solicitud de patente divisional Nº 60/400.486 y solicitud de patente divisional Nº 60/400.971.

Aunque los distintos dispositivos y procedimientos de tratamiento de espermatozoides, en general, y la recogida, manipulación, clasificación, almacenamiento, transporte, uso, fertilización e inseminación de espermatozoides han mejorado durante los últimos años, quedan problemas significativos con respecto al mantenimiento de la calidad del esperma, tal como viabilidad, motilidad y funcionalidad y conservación y estimulación de espermatozoides, especialmente con respecto a procedimientos de inseminación artificial (in vivo) y fertilización in vitro (FIV). Una consecuencia potencial es la reducción en los índices de fertilización. La calidad del esperma, tal como la viabilidad del esperma separado en poblaciones enriquecidas portadoras de un cromosoma X y portadoras de un cromosoma Y, se pudo comparar directamente in vitro (por ejemplo, junto con procedimientos FIV) e in vivo (por ejemplo, junto con procedimientos de inseminación artificial), se reduce en general durante el tratamiento de las espermatozoides tradicional. Más en general, las técnicas de tratamiento tradicionales que estudian la viabilidad, la motilidad, la funcionalidad, la conservación, la estimulación, la fertilización y la inseminación del esperma pueden no haber proporcionado índices de fertilización o calidad del esperma preferida o incluso adecuada, por ejemplo.

Como un ejemplo de tratamiento de esperma tradicional, las técnicas de clasificación de espermatozoides para la cría de mamíferos pueden estar limitadas, por ejemplo, con respecto a la calidad de los espermatozoides, tal como viabilidad, motilidad y funcionalidad de los espermatozoides e índices de fertilización así como potencialmente otras características o elementos limitados. Por ejemplo, si el aparato de clasificación está a una distancia relativamente grande de los machos o si el aparato de clasificación está a una distancia relativamente grande de las hembras receptoras que se van a inseminar o los óvulos que se van a fertilizar con esperma tratado, la calidad de los espermatozoides, los índices de fertilización u otras características o elementos se pueden ver afectados perjudicialmente. Algunas de las técnicas o algunas técnicas tradicionales pueden conseguir en cierta extensión viabilidad, motilidad o funcionalidad de los espermatozoides e índices de fertilización deseables, mientras se estudia, por ejemplo, la conservación del esperma durante el transporte al aparato de clasificación. Sin embargo, más técnicas que consiguen suficiente calidad de los espermatozoides, tal como viabilidad, motilidad y funcionalidad y otros elementos tales como estimulación de los espermatozoides, conservación e índices de fertilización mantenidos

o mejorados, pueden ser deseables, especialmente para una cualquiera o una combinación de diversas etapas de tratamiento de esperma. Los elementos del tratamiento pueden incluir por ejemplo, recogida, manipulación, clasificación, almacenamiento, transporte, uso, fertilización o inseminación y especialmente la conservación de los espermatozoides clasificados desde el aparato de clasificación al sitio de fertilización (potencialmente mediante muestras individuales recogidas o mediante tubos de aspiración o “pajillas”) o en cualquier otra fase de tratamiento del esperma.

Como otro ejemplo de las limitaciones del tratamiento del esperma tradicional, las técnicas de tratamiento tradicionales pueden estar limitadas con respecto a la calidad de los espermatozoides, en general, tal como viabilidad de los espermatozoides, motilidad y funcionalidad y estimulación de los espermatozoides, conservación de los espermatozoides e índices de fertilización, debido al tipo y la extensión del tratamiento implicado. Las técnicas de tratamiento conocidas tales como conservación o clasificación, por ejemplo, pueden degradar la calidad del esperma y reducir además los índices de fertilización. La degradación de la calidad del esperma y los índices de fertilización pueden haber resultado previamente problemáticas en circunstancias que pueden haber requerido más etapas de conservación de las espermatozoides, tal como en circunstancias en las que el aparato de clasificación está a relativamente gran distancia de los machos o cunado el aparato de clasificación está a una distancia relativamente grande de las hembras receptoras que se van a inseminar o fertilizar de otro modo con esperma tratado. Sin embargo, la degradación potencialmente identificada de la calidad del esperma y los índices de fertilización puede no haberse estudiado hasta este momento en el contexto de la conservación de las espermatozoides o incluso identificado como referente a la conservación de las espermatozoides o tratamiento de los espermatozoides en general, ya que puede haberse entendido que las técnicas de conservación tradicionales en realidad han contribuido a los efectos perjudiciales para la calidad del esperma, los índices de fertilización u otras características o resultados relevantes.

Se puede haber entendido tradicionalmente que las etapas de tratamiento adicionales en el tratamiento de espermatozoides o semen con una concentración de espermatozoides degradarían la calidad del esperma y reducirían los índices de fertilización hasta tal punto que se evitarían las etapas del tratamiento adicionales en general. Específicamente, también se puede haber entendido tradicionalmente que las etapas de tratamiento tales como conservación, específicamente crioconservación y clasificación podían dañar demasiado los espermatozoides, especialmente en tratamiento de secuencias que incorporan tanto crioconservación como clasificación. Además, incluso se puede haber sugerido y explicado en procedimientos tradicionales que la conservación de esperma tal como crioconservación, proporcionada después de las etapas de tratamiento previas a fin de conservar el esperma para procedimientos posteriores, tal como para técnicas in vivo o in vitro, no se podían realizar sin comprometer los espermatozoides y la propia técnica hasta tal punto que los resultados de los procedimientos posteriores se verían perjudicialmente afectados. De acuerdo con esto, tales preocupaciones se han podido demostrar incluso en procedimientos de tratamiento de espermatozoides tradicionales, que explican lejos de etapas de tratamiento posteriores tales como clasificación y crioconservación o etapas de tratamiento que incorporan múltiples etapas de crioconservación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero, que comprende las etapas de:

obtener espermatozoides de mamífero;

crioconservar dichos espermatozoides;

descongelar dichos espermatozoides;

tratar dichos espermatozoides;

y crioconservar dichos espermatozoides;

2. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de tratamiento comprende clasificar dichos espermatozoides.

3. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 2, en el que dicha etapa de clasificación comprende seleccionar dichos espermatozoides basándose en al menos una característica deseada de los espermatozoides.

4. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 3, en el que dicha etapa de selección comprende teñir dichos espermatozoides basándose en al menos una característica deseada de los espermatozoides.

5. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 4, en el que dicha etapa de selección comprende además diferenciar dichos espermatozoides basándose en dicha al menos una característica de las espermatozoides deseada.

6. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 5, en el que dicha etapa de diferenciación comprende diferenciar dichos espermatozoides como un espermatozoide portador de un cromosoma X o un espermatozoide portador de un cromosoma Y.

7. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 5, en el que dicha etapa de selección comprende además separar dichos espermatozoides que tienen dicha al menos una característica de los espermatozoides deseada.

8. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en las reivindicaciones 5 ó 7, que comprende además la etapa de recoger dichos espermatozoides.

9. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 2, en el que dicha etapa de clasificación comprende clasificación con citómetro de flujo.

10. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, que comprende además la etapa de establecer una muestra de esperma a partir de dichos espermatozoides tratados.

11. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 10, en el que dicha segunda etapa de crioconservación comprende crioconservar dicha muestra de esperma.

12. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 10, en el que dicha etapa de establecimiento de una muestra de esperma comprende establecer una pluralidad de muestras de esperma y en el que dicha segunda etapa de crioconservación comprende crioconservar dicha pluralidad de muestras.

13. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, que comprende además la etapa de establecer una muestra de esperma de dichos espermatozoides crioconservados tratados.

14. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, que comprende además la etapa de descongelar dichos espermatozoides crioconservados tratados.

15. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 14, que comprende además la etapa de establecer una muestra de esperma a partir de dichos espermatozoides descongelados, crioconservados y tratados.

16. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 13, en el que dicha etapa de establecimiento de una muestra de esperma comprende establecer una pluralidad de muestras de esperma.

17. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 15, en

el que dicha etapa de establecimiento de una muestra de esperma comprende establecer una pluralidad de muestras de esperma.

18. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de obtención comprende obtener semen con una concentración de espermatozoides, en el que dicha etapa de crioconservación comprende crioconservar dicho semen y en el que dicha etapa de descongelación comprende descongelar dicho semen crioconservado.

19. Un procedimiento de tratamiento de espermatozoides de mamífero como se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de obtención comprende obtener espermatozoides de especies zoológicas.