REACTIVOS Y MÉTODOS PARA EL PRONÓSTICO Y ESTADIFICACIÓN PATOLÓGICA DEL CÁNCER.

Método para evaluar la progresión del cáncer colorrectal en un individuo,

que comprende la etapa de someter a ensayo una muestra tisular o celular obtenida del individuo para detectar un modelo de expresión, de fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos, caracterizado porque los marcadores biológicos son EGFR, PTEN, pAKT, pMEK, pHER1, pERK o Ki67, caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos es sustancialmente similar al modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de los dos o más marcadores biológicos procedentes de una muestra tisular o celular característica para un diagnóstico de la progresión colorrectal, o caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos difiere del modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de los dos o más marcadores biológicos procedentes de una segunda muestra tisular o celular

La presente invención se refiere a métodos para evaluar la progresión del cáncer colorrectal en un individuo. Más en particular, la invención proporciona dichos métodos para determinar o diagnosticar la progresión o la estadificación patológica de un cáncer con el fin de adaptar de manera más precisa la terapia a un individuo. La invención se refiere también a métodos para monitorizar y analizar muestras biológicas con el fin de cuantificar la expresión y activación de dos o más biomarcadores de la vía del EGFR, incluyendo EGFR, PTEN, pHER1, pAKT, pERK, pMEK y Ki67.

Un objetivo esencial de la terapia del cáncer es eliminar o inhibir selectivamente el crecimiento incontrolado de células malignas sin que se vean afectadas negativamente las células normales. Los medicamentos quimioterapéuticos tradicionales son agentes altamente citotóxicos que preferentemente tienen una mayor afinidad por las células malignas que por las células normales, o que afectan al menos preferentemente a las células malignas en base a su alta velocidad de crecimiento celular y actividad metabólica. Sin embargo, estos agentes no han llegado a ser “balas mágicas” y a menudo dañan tanto las células normales como las cancerosas; paradójicamente, ciertos cánceres desarrollan resistencia a tales agentes quimioterapéuticos, que no desarrollan las células normales. Las terapias de tratamiento del cáncer que pueden dirigirse a las células malignas y salvar las células normales, denominadas terapias “diana”, representan una nueva clase de productos quimioterapéuticos contra el cáncer. Dichas nuevas propuestas son particularmente relevantes para tratar cánceres tumorales sólidos, que siguen siendo condiciones crónicas que necesitan tratamientos adaptables y con capacidad de respuesta con menos efectos secundarios, y es necesario investigar su desarrollo.

En general, las terapias dirigidas contra el cáncer intentan bloquear el crecimiento y la propagación de las células cancerosas obstaculizando las moléculas o vías intracelulares que son específicas de la carcinogénesis, salvando por tanto las células no cancerosas. Estos agentes trabajan en oposición a los agentes quimioterapéuticos o quimiopreventivos tradicionales, que se utilizan para poner freno al crecimiento, producir diferenciación terminal y muerte celular de las células cancerosas o precancerosas, pero que también pueden interrumpir el desarrollo de las células normales. Sin embargo, ha resultado difícil desarrollar fuertes biomarcadores candidatos a diagnóstico para terapias dirigidas, debido en parte a la diversidad de ligandos y receptores expresados por células tanto normales como cancerosas y a las consecuencias variables resultantes procedentes de la señalización de los receptores.

Han surgido varias vías de señalización como dianas importantes para entender y tratar la oncogénesis; éstas incluyen las vías de transducción de señales del factor de crecimiento. Las vías del factor de crecimiento regulan el crecimiento celular y el metabolismo en respuesta a indicios intracelulares y ambientales. Con frecuencia, estas vías de señalización se alteran o desregulan en el cáncer, resultando en un fenotipo de crecimiento incontrolado e invasión del tejido circundante.

Un determinante clave del crecimiento celular y un objetivo de la investigación activa en el diagnóstico y tratamiento del cáncer es el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y su receptor (EGFR). El EGF es un factor de crecimiento que activa la actividad del receptor de la proteína tirosina-quinasa (RTK) para iniciar una cascada de transducción de señales que resulta en cambios en el crecimiento, la proliferación y la diferenciación celular. El EGF y sus dianas aguas abajo (ilustradas en la Figura 1), incluidas ras/raf, mek y erk, son conocidas por estar implicadas en la patogénesis y progresión de distintos cánceres. Esta vía y sus moléculas de señalización proporcionan dianas atractivas para la intervención terapéutica y tales propuestas están en desarrollo (Stadler, 2005, Cancer, 104: 2323-33; Normanno, y col., 2006, Gene, 366:2-16).

Los agentes que se dirigen al EGF y su receptor incluyen bevacizumab, PTK787, SU011248 y BAY 43-9006. Se ha demostrado que el BAY 43-9006 inhibe también las dianas aguas abajo en la vía del EGF, incluidas raf, mek y erk (Stadler, 2005, Cancer. Id.). Este sistema receptor ha sido implicado también en el desarrollo y la progresión de diversos tumores sólidos humanos, incluyendo el de pulmón, pecho, próstata, colon, ovario, cabeza y cuello. HER1/EGFR es un miembro de una familia de cuatro receptores {EGFR (también denominado HER1 o ErbB1), ErbB2 (HER2/neu), ErbB3 (HER3) y ErbB4 (HER4)}. Los receptores residen en la membrana plasmática celular y se componen de un dominio externo de unión al ligando, un dominio transmembrana y un dominio interno tirosina-quinasa. La unión del ligando desencadena la dimerización y autofosforilación del receptor del dominio receptor interno. Ello inicia una cascada de reacciones celulares que influyen en la división celular y en numerosos otros aspectos del crecimiento celular. La actividad creciente en el receptor EGF, causada por una mayor concentración de ligando, un aumento del números de receptores o por la mutación del receptor, puede conducir a un aumento de la proliferación celular. Existe ahora evidencias notables para demostrar que el sistema de HER1/EGFR puede ser mediador en el establecimiento y la progresión de diversos tumores sólidos.

Aunque los estudios han examinado el papel de la vía EGF en el control y el tratamiento del cáncer, se conoce poco sobre los cambios en esta vía durante la progresión y metástasis tumoral. Alteraciones sutiles en los efectores aguas abajo en la vía EGFR pueden proporcionar dianas únicas y adaptables para una intervención terapéutica basada, entre otros, en el tipo de tumor, estadio y composición individual. Dicha variación podría tener un impacto significativo en el diagnóstico y el tratamiento tumoral.

En este contexto, Kanavaros y col. (Kanavaros, P. y col., Expression of p53, p21/waf, bcl-2, bax, Rb and Ki67 proteins in colorectal carcinomas, Medical Oncology 16(1), abril 1999, pp. 23-30) describen la inmunoexpresión de las proteínas p53, p21, bcl-2, bax, Rb y Ki67 en adenocarcinomas colorrectales y ponen en correlación los modelos de expresión con el estadio y la clase de tumor. Además, Kopp y col. (Kopp, R. y col., Clinical implications of the EGF receptor / ligand system for tumor progression and survival in gastrointestinal carcinomas: evidence for new therapeutic options, Recent Results in Cancer Research 162, 2003, pp. 115-132) describen la determinación cuantitativa de los receptores EGF en carcinomas colorrectales en comparación con la mucosa adyacente normal. Además, Hayashi y col. (Hayashi, Y. y col., Expression of EGF, EGF-receptor, p3, v-erb B and ras p21 in colorectal neoplasms by immunostaining paraffin-embedded tissues, Pathology International 44(2), 1994, pp. 124-130) describen el significado de la expresión o sobreexpresión de EGF, receptor EGF, v-erb B, ras y p21 en casos de adenoma tubular y adenocarcinoma. También, Kato y col. (Kato, S. y col., An immunohistologic study on Ki67, p53, p21 and CEA expression in colorectal carcinogenesis, Annals of Cancer Research and Therapy 11(1-2), 2003, pp. 109-120) describen la expresión de Ki67, p53, p21 y CEA en mucosa colónica normal, adenomas, adenocarcinomas, cánceres y cánceres avanzados, respectivamente.

Finalmente, Tuynman y col. (Tuynman, J. y col., Detection of kinase activity profiles of colon cancer predicts stage of disease and identifies potential macromolecular targets for therapy, Proceedings of the American Association for Cancer Research 46, April 2005, p. 292) describen un microensayo de proteínas para la detección de la actividad quinasa en pacientes sanos y con carcinoma de colon.

Se han desarrollado regímenes terapéuticos tradicionales para el cáncer basados en los resultados derivados de ensayos a gran escala y dependen de los resultados predictivos para una amplia variedad de pacientes y tumores. La capacidad para adaptar la terapia al paciente, al tumor y al estadio patológico particular (mostrada en la Figura 2) puede proporcionar tratamientos más eficaces contra los tumores con menos efectos secundarios. Además, la capacidad para monitorizar la progresión del tratamiento del cáncer y ajustar la terapia en consecuencia podría implicar una reacción más rápida a las diferencias particulares en respuesta a regímenes terapéuticos que se han desarrollado anteriormente utilizando...

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Método para evaluar la progresión del cáncer colorrectal en un individuo, que comprende la etapa de someter a ensayo una muestra tisular o celular obtenida del individuo para detectar un modelo de expresión, de fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos, caracterizado porque los marcadores biológicos son EGFR, PTEN, pAKT, pMEK, pHER1, pERK o Ki67, caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos es sustancialmente similar al modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de los dos o más marcadores biológicos procedentes de una muestra tisular o celular característica para un diagnóstico de la progresión colorrectal, o caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos o más marcadores biológicos difiere del modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de los dos o más marcadores biológicos procedentes de una segunda muestra tisular o celular.

Método según la reivindicación 1, caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos

o más marcadores biológicos difiere del modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de los dos o más marcadores biológicos procedentes de una segunda muestra tisular o celular.

Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la segunda muestra tisular o celular es una muestra de tejido o célula sin cáncer colorrectal o es una muestra de tejido o célula con cáncer colorrectal procedente de un estadio temprano de progresión.

Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque los marcadores biológicos son EGFR y PTEN.

Método según la reivindicación 1 ó 2, que comprende además la etapa de medir la amplificación, deleción o rearreglo del ADN genómico que codifica EGFR por medio de una sonda etiquetada basada en ácido nucleico.

6. Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el método evalúa la progresión del cáncer colorrectal en un individuo en un estadio de pequeño adenoma o en un estadio de adenocarcinoma o en un estadio de adenocarcinoma maligno.

7. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque el modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos

o más marcadores biológicos es sustancialmente similar al modelo de expresión, fosforilación o tanto de expresión como de fosforilación de dos

o más marcadores biológicos procedentes de una muestra de tejido o

10 célula característicos de un adenoma pequeño o de un adenocarcinoma o de un adenocarcinoma maligno.

8. Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la etapa de ensayo comprende el análisis de imágenes asistido por ordenador de la muestra de tejido o de célula después de la tinción mediante un reactivo de unión específico etiquetado.