POLIPÉPTIDOS DEL CSF3R Y USOS DE LOS MISMOS.

La presente invención se refiere a polipéptidos del CSF3R. La invención también se refiere a ácidos nucleicos que codifican dichos polipéptidos, vectores que comprenden dichos ácidos nucleicos y células recombinantes que los contienen, así como las composiciones farmacéuticas correspondientes. La invención divulga además métodos para producir dichos polipéptidos. ANTECEDENTES El factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF o CSF3) ejerce su función mediante la activación de un receptor de membrana, el receptor 3 del factor estimulante de colonias (CSF3R), que pertenece a la super familia de los receptores de hematopoyetina, a los cuales se hace referencia además como receptores de citocina de clase I. El CSF3R también se conoce como el receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSFR) o CD114. Se ha descubierto que diversos receptores de linfocinas, factores de crecimiento hematopoyéticos y moléculas relacionadas con la hormona del crecimiento comparten un dominio de unión común. Estos receptores se conocen como receptores de hematopoyetina y los ligandos correspondientes como hematopoyetinas. Asimismo, las hematopoyetinas se subdividieron en dos grandes grupos estructurales: Hematopoyetinas grandes/largas y pequeñas/cortas. Un subgrupo de cadenas de receptores individuales que forman parte de los complejos de receptores para las hematopoyetinas grandes contiene elementos estructurales comunes en sus partes extracelulares: un dominio tipo inmunoglobina, un dominio de receptor de hematopoyetina y 3 dominios de fibronectina tipo III (2 en el receptor de leptina). Este subgrupo fue denominado familia de receptores gp130 (Mosley, et al. J. Biol. Chem. 1996, 271, 32635-43) e incluye el receptor de Leptina (LPTR), el receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSFR), la cadena beta común de Interleucina-6/-11/LIF/OSM/CNTF (GP130), el receptor del factor inhibidor de la leucemia (LIFR), la cadena beta del receptor de Oncostatina-M (OSMR), la cadena beta-1 del receptor de interleucina-12 (IL12RB1), la cadena beta-2 del receptor de Interleucina-12 (IL12RB2). Estas cadenas de receptores se homodimerizan (GCSFR, GP130, LPTR) o heterodimerizan (GP130 con LIFR o OSMR, IL12RB1 con IL12RB2) después de unirse a la citocina cognada. La proteína CSF3R humana es un polipéptido de 826 aminoácidos que comprende un péptido señal (residuos de aminoácidos 1-24), un dominio extracelular ubicado en la región N-terminal de la proteína (residuos de aminoácidos 25-627), un dominio intracelular (residuos de aminoácidos 651-836) y una región transmembrana (residuos de ami- noácidos 628-650). La porción extracelular contiene un dominio tipo inmunoglobulina (Ig) N-terminal (residuos de aminoácidos 25 a 117), un dominio de homología del receptor de citocina (CRH) (residuos de aminoácidos 122 a 330) y 3 dominios de fibronectinas tipo III (FNIII). Dentro de la región de CRH se encuentran 2 dominios de FNIII, 4 residuos de cisteína conservados y un motivo conservado WSXWS (residuos de aminoácidos 318 a 322) que estabi- liza el dominio de CRH. Los dominios tipo Ig y CRH son críticos para la unión de alta afinidad. En el dominio intrace- lular hay un motivo de caja 1 (residuos de aminoácidos 658 a 666) necesaria para la interacción y/o activación de JAK. En Hiratoka et al. (J. Biol. Chem. 1995; 270:25928-25934) se describe un CSF3R soluble que consiste en el dominio tipo lg y de la parte aminoterminal del dominio CRH. El GCSF estimula la proliferación, supervivencia y maduración de las células comprometidas con la estirpe de granulocitos neutrófilos mediante la unión al receptor específico de GCSF (ver Hartung T., et al., Curr. Opin. Hematol. 1998; 5: 221-5). El receptor del CSF3R no posee actividad intrínseca de quinasa en el dominio citoplásmico y utiliza cinasas proteicas intracelulares asociadas al receptor como la tirosina quinasa Janus (JAK) para iniciar la transducción de señales. Se ha demostrado que la estimulación de las células con G-CSF activa múltiples vías de transducción de señales, que incluyen los transductores de señal y los activadores de transcripción (STAT), Ras/Raf/Erk, fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3-K)/Akt, y también las proteasas Stat como la proteasa Stat5. La activación no regulada de la Stat5 puede conducir a respuestas celulares aberrantes al CSF3 y contribuir a la leucemogénesis. El GCSF se utiliza generalmente para el tratamiento de diferentes tipos de neutropenia en seres humanos. Es uno de los pocos factores de crecimiento aprobados para uso clínico. En particular, se utiliza para reducir la citopenia inducida por la quimioterapia (Viens et al., J. de Clin. Oncology, Vol. 20, No. 1, 2002: 24-36). El GCSF también se ha utilizado de manera terapéutica de enfermedades infecciosas como agente coadyuvante potencial (Hubel et al., J. de Infectious Diseases, Vol. 185: 1490-501, 2002). En un modelo de infarto de miocardio en ratón, el tratamiento con CSF3 no afectó la magnitud inicial del infarto el día 3 pero mejoró la función cardiaca tan solo 1 semana después del infarto y los efectos beneficiosos se redujeron por el retraso en el comienzo del tratamiento (Harada et al. Nature Med. Vol. 11: 305-311, 2005). El CSF3 indujo las proteínas antiapoptóticas e inhibió la muerte apoptótica de los cardiomiocitos. Asimismo, el CSF3 redujo la apoptosis de las células endoteliales y aumentó la vascularización en los corazones que habían sufrido infartos. En Harada et 1   al. se sugirió que el CSF3 promueve la supervivencia de los miocitos cardíacos y previene la remodelación del ventrículo izquierdo después del infarto de miocardio. La aplicación de una dosis unitaria de G-CSF en pacientes que padecen de neumonía adquirida en la comunidad (CAP) aumentó al duración de la supervivencia y la activación de la neutrófilos, combinado con una liberación sostenida de citocinas antiinflamatorias (Droemann et al. Respiration. 2005 Dec. 12. Epub previa a la publicación). El CSF3 también es beneficioso para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades inmunológicas, por ejemplo, enfermedad injerto contra huésped, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, enfermedad inflamatoria intestinal y diabetes (Rutella et al. J. Immunol. 2005 Dec. 1; 175(11):7085-91). SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención divulga nuevas variantes de polipéptidos del CSF3R. La invención divulga además ácidos nucleicos que codifican dichos polipéptidos, vectores que comprenden dichos ácidos nucleicos, en particular, vectores de expresión y células recombinantes que los contienen, así como las composiciones farmacéuticas correspondientes. La invención divulga además métodos para producir dichos polipéptidos. Más particularmente, la invención resulta de la identificación, el aislamiento y la caracterización de una nueva variante de empalme soluble de origen natural del CSF3 humano, denominada sCSF3R, que tiene propiedades estructurales y biológicas, lo que representa un valioso producto farmacéutico. Un objeto de la presente invención radica por tanto en variantes del polipéptido aislado del CSF3R. Las variantes de polipéptido de la presente invención comprenden la secuencia de un dominio de unión al ligando del CSF3, carecen de un dominio funcional transmembrana y carecen de dominio citoplasmático, donde dicho dominio de unión al li- gando es un dominio de tipo inmunoglobulina del CSF3R, donde dichos polipéptidos incluyen además después del dominio tipo inmunoglobulina los residuos de aminoácidos 97-165 de la SEQ ID NO: 4, o un fragmento de al menos 50 aminoácidos de los residuos de aminoácidos 97-165 de la SEQ ID No.4, y donde dichos polipéptidos retienen la habilidad de unir los ligandos naturales del CSF3R, caracterizados además porque la variante de polipéptidos de CSF3R soluble aislada se selecciona de la SEQ ID NO: 2, una forma madura de la SEQ ID NO: 2, una forma glicosi- lada de la SEQ ID NO: 2, una forma pegilada de la SEQ ID NO: 2 o un equivalente funcional de la SEQ ID NO: 2, donde el equivalente funcional tiene al menos más de un 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 2. Los polipéptidos del CSF3R de la presente invención representan formas solubles del CSF3R que pueden utilizarse como agonistas o antagonistas de estos en varias afecciones patológicas. Otro objeto de la presente invención radica en la forma madura del CSF3R como se define anteriormente. Otro objeto de la presente invención radica en una proteína de fusión que comprende una variante de polipéptido del CSF3R como se define anteriormente. Otro objeto de la presente invención radica en un conjugado que comprende una variante de polipéptido del CSF3R como se define anteriormente. Un objeto adicional de la presente invención radica en un ácido nucleico que codifica una variante de... [Seguir leyendo]

1. Una variante del polipéptido aislado soluble del CSF3R, donde dicha variante de polipéptido comprende o consiste en una secuencia de un dominio de unión al ligando, carece de dominio funcional transmembrana y carece de dominio citoplasmático, donde dicho dominio de unión al ligando es un dominio tipo inmunoglobulina del CSF3R, donde dichos polipéptidos incluyen además a continuación del dominio tipo inmunoglobulina los residuos de aminoácidos 97-165 de la SEQ ID NO: 4 o un fragmento de al menos 50 aminoácidos de los residuos de aminoácidos 97-165 de la SEQ ID NO: 4 y donde dichos polipéptidos retienen la habilidad de unir los ligandos naturales del CSF3R y están caracterizados además por que la variante del polipéptido soluble aislado del CSF3R se selecciona de la SEQ ID NO: 2, una forma madura de la SEQ ID NO: 2, una forma glicosilada de la SEQ: ID NO: 2, una forma pegilada de la SEQ ID NO: 2 o un equivalente funcional de la SEQ ID NO: 2, donde el equivalente funcional tiene al menos más de un 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 2 2. La variante del polipéptido aislado soluble del CSF3R de la reivindicación 1, donde dicha forma madura es la SEQ ID NO: 4. 3. La variante del polipéptido aislado soluble del CSF3R de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizada por que la variante es una variante soluble de origen natural. 4. La variante del polipéptido aislado soluble del CSF3R de conformidad con la reivindicación 2, donde dicha variante se selecciona de su forma su forma glicosilada, su forma pegilada o su equivalente funcional, donde el equivalente funcional tiene al menos un 75% de identidad, preferentemente al menos un 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 4. 5. Una proteína de fusión que comprende un polipéptido soluble del CSF3R de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ligado operativamente a un dominio de aminoácido adicional. 6. La proteína de fusión de la reivindicación 5, donde dicho dominio adicional de aminoácidos comprende un péptido señal, un marcador, un péptido dirigido, el dominio constante de una inmunoglobulina, un dominio de multidimerización o su proteína biológicamente activa o un fragmento de esta. 7. La proteína de fusión de la reivindicación 6, que comprende un polipéptido del CSF3R de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ligado operativamente al dominio constante de una inmunoglobulina. 8. Un conjugado que comprende un polipéptido del CSF3R de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una proteína de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7. 9. Una molécula aislada de ácido nucleico que codifica un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 10. La molécula aislada de ácido nucleico de la reivindicación 9 que es una molécula de ADNc. 11. La molécula aislada de ácido nucleico de la reivindicación 9 o la reivindicación 10 que comprende o consiste en una secuencia de nucleótidos seleccionada de la SEQ ID NO: 1, SEQ 10 NO: 3, SEQ 10 NO: 5, SEQ 10 NO: 7, o una hebra complementaria o su secuencia degenerada. 12. Un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11. 13. Una célula huésped recombinante, donde dicha célula comprende una molécula de ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11 o un vector de la reivindicación 12. 14. La célula huésped de la reivindicación 13, que expresa un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 15. La célula huésped de la reivindicación 13 o la reivindicación 14, que es una célula procariota o eucariota. 52   16. Un método para producir un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, método que comprende cultivar una célula huésped recombinante de cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 en condiciones que permiten la expresión de la molécula de ácido nucleico y recuperar el polipéptido producido. 17. Una composición farmacéutica que comprende una variante de polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, una proteína de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, un conjugado de la reivindicación 8 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 53   54     56