Un inmunoensayo para detectar el docetaxel en una muestra, que comprende proporcionar una mezcla que contiene una muestra,

un anticuerpo que reacciona con el docetaxel y tiene una reactividad cruzado con relación al docetaxel con taxol del 20% o menos, y un conjugado de un vehículo con un ligando seleccionado entre un compuesto de fórmula: en la que B es -CH2-; Y es un grupo espaciador orgánico; X es un grupo funcional capaz de unirse a un vehículo; y p es un número entero de 0 a 1; un compuesto de fórmula: en la que B, X, Y y p son como anteriormente; un compuesto de fórmula en la que B, X, Y y p son como anteriormente, y mezclas de los mismos, causar que el docetaxel en la muestra y dicho conjugado se unan con dicho anticuerpo y después de ello medir la cantidad de dicho conjugado en dicha mezcla que está unido o no unido con dicho anticuerpo, mediante lo cual se puede determinar la presencia de docetaxel en la muestra

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de los ensayos inmunológicos para determinar la presencia y/o cuantificar la cantidad de docetaxel en fluidos biológicos humanos para determinar rápidamente las concentraciones óptimas de fármaco durante quimioterapia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El cáncer es un término usado para describir un grupo de malignidades que comparten todas el rasgo común de desarrollarse cuando las células en una parte del cuerpo empiezan a crecer sin control. La mayoría de los cánceres se forman como tumores, pero también pueden manifestarse en la sangre y circular a través de otros tejidos donde crecen. Las malignidades cancerosas se tratan de la forma más habitual con una combinación de cirugía, quimioterapia, y/o radioterapia. El tipo de tratamiento usado para tratar un cáncer específico depende de varios factores que incluyen el tipo de malignidad cancerosa y la fase durante la cual se ha diagnosticado.

El Taxotere, cuyo nombre químico es docetaxel, es un agente citotóxico común usado para el tratamiento de cáncer de mama, de próstata independiente de andrógenos y de pulmón macrocítico. El docetaxel, que también se conoce como Taxotere, tiene la fórmula:

**(Ver fórmula)**

Este compuesto se ha asociado con efectos secundarios debilitantes tales como pérdida de densidad de la médula ósea, reacción alérgica, neutropenia, náuseas y vómitos. Controlando los niveles de docetaxel en el cuerpo y ajustando la dosis, pueden controlarse y limitarse mejor estos efectos secundarios en los pacientes.

Al mismo tiempo, a menudo existe una relación muy variable entre la dosis de docetaxel y la concentración sérica resultante del fármaco que afecta al efecto terapéutico. El grado de variabilidad farmacocinética intra-e inter-individual del docetaxel puede ser tan alto como de factor 4 y está afectado por mucho factores, incluyendo:

○ Función orgánica

○ Regulación genética

○ Patología

○ Edad

○ Interacción fármaco-fármaco

○ Tiempo de ingestión del fármaco

○ Modo de administración del fármaco

○ Administración relacionada con la técnica

Como resultado de esta variabilidad, dosis iguales del mismo fármaco en diferentes individuos pueden provocar resultados clínicos drásticamente diferentes (Hon y col. Clinical Chemistry 44, pág. 388400, 1998). La eficacia de la misma dosificación de docetaxel varía significativamente en base a la eliminación individual del fármaco y la concentración sérica final del fármaco en el paciente. La gestión del fármaco terapéutico proporcionaría al médico una apreciación sobre la variación en el paciente con administración intravenosa del fármaco. Con la gestión del fármaco terapéutico, podrían individualizarse las dosificaciones del fármaco para el paciente, y serían mucho mayores las posibilidades de tratar de forma eficaz el cáncer, sin los efectos secundarios indeseados.

Además, la gestión del fármaco terapéutico de docetaxel serviría como excelente herramienta para asegurar el acatamiento en la administración de quimioterapia con la dosificación prescrita real y la consecución de los niveles séricos eficaces de concentración. Se ha descubierto que la variabilidad en la concentración sérica no se debe solamente a factores fisiológicos, sino que también pueden ser el resultado de la variación en la técnica de administración.

5 La gestión rutinaria del fármaco terapéutico de docetaxel requeriría la disponibilidad de ensayos automatizados simples adaptables al equipo general de laboratorio. Los ensayos que mejor se ajustan a estos criterios son los inmunoensayos. Para que sea un inmunoensayo eficaz, tendrán que desarrollarse anticuerpos que sean reactivos con la forma activa del fármaco. Actualmente no hay inmunoensayos disponibles para determinar los niveles de docetaxel en plasma o sangre. Grothaus, P. y col., J. Nat Prod, 1995, Vol. 58, pág. 1003-1014 da a conocer un anticuerpo específico de taxano genérico (SAIO) que también detecta el docetaxel.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

De acuerdo con esta invención, se ha producido una nueva clase de anticuerpos definidos en las reivindicaciones que son sustancialmente reactivos con el docetaxel para unirse al docetaxel.

15 Se ha descubierto que usando inmunógenos que son conjugados de un vehículo inmunogénico con un ligando seleccionado entre el grupo que consiste en derivados de 10-hidroxidocetaxel de fórmula:

**(Ver fórmula)**

20 derivados de 7-hidroxidocetaxel de fórmula:

**(Ver fórmula)**

25 derivados de 7,10-dihidroxidocetaxel de fórmula:

**(Ver fórmula)**

40

en las que B es -CH2-;

**(Ver fórmula)**

Y es un grupo espaciador orgánico;

X es un grupo funcional capaz de unirse a un vehículo;

p es un número entero de 0 a 1; y

o mezclas de los mismos, se producen anticuerpos que son reactivos con el docetaxel. Proporcionar estos anticuerpos que reaccionan con el docetaxel permite producir un inmunoensayo que puede detectar y controlar específicamente el docetaxel en la muestras de fluido de pacientes que se están tratando con docetaxel. También se incluyen dentro de esta invención reactivos y kits para dicho inmunoensayo, como se define en las reivindicaciones.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

De acuerdo con esta invención, se proporciona una nueva clase de anticuerpos que reaccionan con el docetaxel. Se ha descubierto que a través del uso de estos derivados de docetaxel de fórmula II-A, II-B o II-C o mezclas de los mismos; como inmunógenos, se proporciona esta nueva clase de anticuerpos de esta invención. Es a través del uso de estos anticuerpos que se ha desarrollado un inmunoensayo, incluyendo reactivos y kits para dicho inmunoensayo para detectar y/o cuantificar el docetaxel en muestras de sangre, plasma u otros fluidos corporales. Mediante el uso de este inmunoensayo, puede detectarse y/o cuantificarse la presencia y cantidad de docetaxel en muestras de fluido corporal, preferiblemente una muestra de sangre o plasma. De este modo, puede controlarse durante la terapia a un paciente que se está tratando con docetaxel y ajustarse el tratamiento de acuerdo con dicho control. Mediante esta invención se consigue la gestión del fármaco terapéutico de docetaxel en pacientes con cáncer que se están tratando con docetaxel como agente quimioterapéutico. Los anticuerpos preferidos son aquellos que son reactivos con el docetaxel y no reaccionan de forma cruzada sustancialmente con el taxol y compuestos relacionados con el docetaxel farmacéuticamente inactivos expedidos de 10-Odesacetilbaccatina III.

Los reactivos utilizados en el ensayo de esta invención son conjugados de un vehículo, preferiblemente que contiene grupos funcionales poliamina, con los compuestos de fórmula II-A, II-B y II-C

o mezclas de los mismos. Estos conjugados son compañeros de unión competitiva con el docetaxel presente en la muestras por la unión con los anticuerpos de esta invención. Por lo tanto, la cantidad de reactivo conjugado que se une al anticuerpo será inversamente proporcional a la cantidad de docetaxel en la muestra. De acuerdo con esta invención, el ensayo utiliza cualquier medio de medición convencional para detectar y medir la cantidad de dicho conjugado que está unido o no unido al anticuerpo. A través del uso de dicho medio, puede determinarse la cantidad del conjugado unido o no unido. Generalmente, la cantidad de docetaxel en una muestra se determina correlacionando la cantidad medida del conjugado unido o no unido producido por el docetaxel en la muestra con los valores de conjugado unido o no unido determinados a partir de las muestras de la curva patrón o de calibrado que contienen cantidades conocidas de docetaxel, estando dichas cantidades conocidas en el intervalo esperado para la muestra a ensayar. Estos estudios para producir curvas de calibrado se determinan usando el mismo procedimiento de inmunoensayo que el usado para la muestra.

Los conjugados, así como los inmunógenos, se preparan a partir de compuestos de fórmula II-A, II-B y II-C o mezclas de los mismos. En los conjugados o inmunógenos, el vehículo y el polímero de poliamina se unen a partes de ligando de los compuestos de fórmula II-A, II-B y II-C. Las partes de

10 ligando tienen la fórmula:

**(Ver fórmula)**

en... [Seguir leyendo]

1. Un inmunoensayo para detectar el docetaxel en una muestra, que comprende proporcionar una mezcla que contiene una muestra, un anticuerpo que reacciona con el docetaxel y tiene una reactividad cruzado con relación al docetaxel con taxol del 20% o menos, y un conjugado de un vehículo con un ligando seleccionado entre un compuesto de fórmula:

en la que B es -CH2-;

**(Ver fórmula)**

Y es un grupo espaciador orgánico; X es un grupo funcional capaz de unirse a un vehículo; y p es un número entero de 0 a 1; un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente; 20 un compuesto de fórmula

**(Ver fórmula)**

5 en la que B, X, Y y p son como anteriormente,

y mezclas de los mismos, causar que el docetaxel en la muestra y dicho conjugado se unan con dicho anticuerpo y después de ello medir la cantidad de dicho conjugado en dicha mezcla que está unido o no unido con dicho anticuerpo, mediante lo cual se puede determinar la presencia de docetaxel en la muestra.

2. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que p es 0, en el compuesto de fórmula II-A, II-B y/o II-C.

3. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que p es 1, en el compuesto de fórmula II-A, II-B y/o II-C.

4. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que Y es alquileno 15 que contiene de 1 a 10 átomos de carbono,

**(Ver fórmula)**

20 en el que n y o son número enteros de 0 a 6, y m es un número entero de 1 a 6, en el compuesto de fórmula II-A, II-B y/o II-C.

5. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que X es

**(Ver fórmula)**

oxígeno o azufre, en el compuesto de fórmula II-A, II-B y/o II-C.

6. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que X es

**(Ver fórmula)**

7. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que X es

**(Ver fórmula)**

8. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el éster formado es un éster de alquilo inferior, imidoéster o amidoéster, en el compuesto de fórmula II-A, II-B y/o II-C.

9. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la muestra es una muestra humana.

10 10. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dicho anticuerpo se genera a partir de un inmunógeno que comprende un vehículo inmunogénico unido a un ligando seleccionado entre el grupo constituido por un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

15 en la que p, Y y B son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y X es un grupo funcional capaz de unirse a un vehículo;

un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

20 en la que B, X, Y y p son como anteriormente; un compuesto de fórmula

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente, y mezclas de los mismos.

11. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un vehículo inmunogénico con un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

10 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

12. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un vehículo inmunogénico con un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

15 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

13. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un polímero de poliamina inmunogénico y un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

5 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

14. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo está unido a un soporte sólido.

15. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el soporte sólido es placas de microtitulación.

10 16. Un inmunoensayo de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el soporte sólido es nanopartículas.

17. Un anticuerpo que reacciona con docetaxel y tiene una reactividad cruzada con relación al docetaxel con taxol del 20% o menor.

18. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 17, en el que dicho anticuerpo se genera a partir

15 de un inmunógeno que comprende un vehículo inmunogénico unido a un ligando seleccionado entre el grupo que consiste en un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

20 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente; un compuesto de fórmula

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente; y mezclas de los mismos.

19. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un vehículo inmunogénico con un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

10 en la que X, Y, B y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

20. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un polímero de poliamina con un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

15 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

21. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18, en el que dicho anticuerpo se obtiene de un inmunógeno de un vehículo con un ligando de fórmula:

**(Ver fórmula)**

5 en la que B, X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

22. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 21, en el que dicho anticuerpo se obtiene de ratones, conejos o ratas.

23. Un inmunoensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 y 22 o un

10 anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 22, siendo dicho anticuerpo un anticuerpo monoclonal.

24. Un kit para determinar la presencia de docetaxel en la muestra de un paciente, que comprende reactivos envasados en recipientes diferentes, siendo uno de los reactivos un anticuerpo que reacciona con el docetaxel y tiene una reactividad cruzada con relación al docetaxel con taxol del 20% o menor, y siendo el otro reactivo un conjugado del vehículo con un ligando seleccionado entre un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

20 en la que B X, Y y p son como se han definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; un compuesto de fórmula:

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente; un compuesto de fórmula

**(Ver fórmula)**

en la que B, X, Y y p son como anteriormente; y mezclas de los mismos.