GRP18 COMO BIOMARCADOR PARA LA RESPUESTA INMUNE MEDIADA POR TH1.

GPR18 como biomarcador para la respuesta inmune mediada por Th1 La presente invención hace referencia a un receptor, tal como la utilización del receptor GPR18 acoplado a proteínas G. Los receptores acoplados a proteínas G (GPRs, por sus siglas en inglés) constituyen una clase principal de proteínas responsables de la transducción de una señal dentro de una célula y representan una de las mayores familias de proteínas con más de 350 genes revelados en el genoma humano. Los GPR tienen 3 dominios estructurales: un dominio extracelular amino terminal, un dominio transmembranal que contiene 7 segmentos transmembranales, 3 bucles extracelulares y 3 bucles intracelulares y un dominio intracelular carboxi-terminal. Ante la unión de un ligando con una parte extracelular de un GPR, se transduce una señal dentro de la célula que da como resultado un cambio en una propiedad biológica o fisiológica de la célula. Los GPR, junto con las proteínas G y efectores tales como por ejemplo enzimas intracelulares y canales modulados por proteínas G, son los componentes de un sistema de señalización modular que conecta el estado de segundos mensajeros intracelulares con entradas extracelulares. Por lo tanto, los GPR son una diana principal para la acción y desarrollo de fármacos. Por ello, es valioso para el campo del desarrollo farmacéutico identificar y caracterizar los GPR antes desconocidos. Como un GPR nuevo, se identificó el receptor GPR18 acoplado a proteínas G (véase por ejemplo, Gantz I. et al., Genomics 1997, 42:462- 466). Poco se sabe de la función del GPR18, por ejemplo, además de no tener evidencias, tampoco se conoce su ligando. La patente US 20040018522 informa sobre diferencias en la expresión del gen en células de sangre periférica medida con micromatrices de ADN entre voluntarios saludables o pacientes no autoinmunes (ELA) y pacientes que padecen esclerosis múltiple. El gen GPR18 aparece en la Tabla 4 como un gen (entre muchos otros) con sensibilización de receptores en muestras de pacientes con esclerosis múltiple. La patente WO 03088808 revela la utilización de los llamados polipéptidos TAT, entre ellos se encuentran los polipéptidos derivados de GPR18 revelados, en particular para el tratamiento del cáncer. La asociación de la expresión del gen GPR18 y el cáncer deriva de los perfiles de expresión del gen en tejido normal y tumores. La patente EP1121431 revela receptores acoplados a proteína G humana (GPR) que han sido modificados de modo tal que los GPCR ahora se expresan de manera constitutiva. También se revela la utilización de los GPCR modificados para la evaluación de compuestos terapéuticos. En los ejemplos se hace referencia a GPR18. De manera sorprendente, encontramos una correlación importante entre la expresión de GPR18 y el fenotipo Th1 de linfocitos T humanos y por lo tanto una correlación importante entre GPR18 y trastornos autoinmunes impulsados por Th1. También encontramos que GPR18 se expresa mucho menos en células Th2 que en células Th1. Por lo tanto, GPR18 puede utilizarse como diana para la inhibición específica de respuestas inmunes mediadas por Th1, por ejemplo asociadas a Th1, por ejemplo como un biomarcador para controlar específicamente la infiltración de células Th1 en la piel inflamada. Por ejemplo, la psoriasis es una enfermedad cutánea inflamatoria mediada por respuestas Th1 exacerbadas. Por lo tanto, la inhibición específica de la activación celular por Th1 y producción de citocina producirá una mejora del fenotipo psoriásico. Sin embargo, una inhibición general de respuestas de linfocitos T haría a un paciente vulnerable a todo tipo de agentes infecciosos. Por lo tanto, un fármaco seguro y efectivo contra enfermedades mediadas por Th1 inhibiría de manera específica las respuestas de Th1 incrementadas. El papel dominante de T-bet que induce la diferenciación de células Th1 hace de esta molécula, y de sus dianas de vía descendente, excelentes candidatas para la intervención terapéutica en la psoriasis y en enfermedades autoinmunes. Con este fin, T-bet, el factor de transcripción clave para la función celular de Th1, (véase por ejemplo, Szabo et al., Cell. 2000 Mar 17;100(6):655-69) se expresa de manera ectópica en células Th2 derivadas de piel que no expresan T-bet. A los cambios transcripcionales, que son directa o indirectamente (a través de una respuesta incrementada a IL-12) inducidos por T-bet les sigue la comparación de los niveles de ARNm de genes mediante análisis en micromatriz (micromatrices U133A y B Affymetrix) de células Th2 transfectadas por T-bet con células de control transfectadas (Lametschwandtner et al., J Allergy Clin. Immunol. 2004,113(5):987-94). De manera sorprendente, encontramos que el gen que codifica el receptor GPR18 acoplado a proteínas G es inducido por la estimulación de T-bet y TCR. 2   La inducción específica de GPR18 en linfocitos T derivados de células Th1 polarizadas de la piel se verifica mediante PCR en tiempo real. Los resultados se exponen en la Figura 1 y en la Tabla 1 a continuación. Además, el GPR18 puede ser inducido específicamente por condiciones de polarización de Th1 en linfocitos T coadyuvantes generados por precursores no activados. Por lo tanto, encontramos una correlación importante entre la expresión de GPR18 y el fenotipo Th1 de linfocitos T humanos y la psoriasis como enfermedad autoinmune impulsada por Th1. Se encontró que GPR18 es un biomarcador para el control específico de la infiltración de células Th1 en piel inflamada y generalmente como una diana para la inhibición específica de respuestas inmunes mediadas por Th1. En varios aspectos, la presente aplicación revela 1. GPR18 para la utilización, por ejemplo, o la utilización de GPR18 1.1 como diana para, por ejemplo, la inhibición específica de respuestas inmunes mediadas por Th1; 1.2 como diana para, por ejemplo, la inhibición específica de la activación de células Th1; 1.3 para el diagnóstico de trastornos mediados, por ejemplo asociados con, por ejemplo, impulsados por, por ejemplo, exacerbados por la activación de células Th1; 1.4 para el diagnóstico de trastornos inmunes mediados, por ejemplo asociados con, por ejemplo, impulsados por, por ejemplo, exacerbados por la activación de células Th1; 1.5 para el diagnóstico de trastornos autoinmunes mediados, por ejemplo asociados con, por ejemplo, impulsados por, por ejemplo, exacerbados por la activación de células Th1; 1.6 para el diagnóstico de trastornos inflamatorios asociados con enfermedades inmunes, tales como autoinmunes, mediados, por ejemplo asociados con, por ejemplo, impulsados por, por ejemplo, exacerbados por la activación de células Th1; 1.7 para el diagnóstico de psoriasis mediada por, por ejemplo asociada con, por ejemplo, impulsada por, por ejemplo, exacerbada por la activación de células Th1; 1.8 para el control de la infiltración de células Th1 en piel inflamada. En varios otros aspectos, la presente aplicación revela 2. GPR18, por ejemplo o la utilización de GPR18, para cualquiera de las utilizaciones que se indican en 1.1 a 1.8, 2.1 como biomarcador, por ejemplo en una muestra de un individuo, por ejemplo en una muestra de un fluido corporal o una muestra de un tejido de un individuo, por ejemplo en una muestra para biopsia de un individuo, por ejemplo en una muestra para biopsia de piel de un individuo. GPR18, como se indica en cualquiera de los puntos anteriores 1 ó 2, incluye GPR18 en cualquier forma, por ejemplo, en la forma de - un ácido nucleico que codifica GPR18, por ejemplo, incluyendo un ácido nucleico que codifica un derivado de GPR18, - proteína GPR18, por ejemplo incluyendo una proteína que es un derivado de GPR18, o - células que secretan GPR18, por ejemplo, o un derivado de células que secretan GPR18. "Un derivado" de un ácido nucleico o proteína GPR18, por ejemplo, en células que secretan, según la presente invención, incluye un fragmento, mutante, variante, homólogo o modificación de una proteína GPR18, o de un ácido nucleico que codifica GPR18, que retiene, por ejemplo, esencialmente, la función biológica de GPR18, por ejemplo, 3   que retiene, por ejemplo esencialmente, la función biológica de GPR18 como mediador en respuestas inmunes mediadas por Th1. Las células que secretan GPR18, por ejemplo, incluyendo las células que producen GPR18, incluyen células que presentan antígeno (APC, por sus siglas en inglés), tales como, por ejemplo, monocitos y células dendríticas (DC, por sus siglas en inglés). Por lo tanto, GPR18 para su utilización como se revela en la presente aplicación incluye variantes derivadas de un empalme ("splice variants") codificadas por ARNm generadas mediante el empalme alternativo de una transcripción primaria, mutantes de aminoácidos, modificaciones postraslacionales, tales como variantes de glicosilación y fosforilación,... [Seguir leyendo]

1. Inhibidores de GPR18 para su utilización en el tratamiento de trastornos mediados por la activación de células Th1, en donde dicho inhibidor de GPR18 es un anticuerpo que reduce el nivel de activación de células Th1 a través de la inhibición de GPR18. 2. Inhibidores de GPR18 según la reivindicación 1 para la utilización según la reivindicación 1 en donde dichos trastornos mediados por la activación de células Th1 se seleccionan entre enfermedades inflamatorias, psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, diabetes, lupus, trastornos asociados con trasplantes, cáncer asociado con la activación de células Th1. 3. Inhibidores de GPR18 según la reivindicación 1 ó 2 para la utilización según la reivindicación 1 y 2, en donde dicho trastorno mediado por la activación de células Th1 es psoriasis. 4. Composición farmacéutica que comprende un inhibidor de GPR18 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, junto con al menos un excipiente farmacéutico para la utilización en el tratamiento de trastornos mediados por la activación de células Th1, en donde dicho inhibidor de GPR18 es un anticuerpo que reduce el nivel de la activación de células Th1 mediante la inhibición de GPR18. 5. Un ensayo para la identificación de un agente que modula la activación de células Th1 que comprende a) determinar el nivel de GPR18 en células Th1, en la ausencia y presencia de un compuesto candidato que se espera que module el nivel de GPR18, b) identificar un compuesto candidato que modula el nivel de GPR18 como se determina en el paso a) como un agente.   11