DIFERENCIACIÓN ENTRE LAS MENINGITIS BACTERIANAS Y VÍRICAS.

Procedimiento in vitro para llevar a cabo la detección de la presencia de una meningitis bacteriana,

que consiste en: i) la determinación de la concentración en procalcitonina, que está presente en una muestra sanguínea de ensayo; y ii) la comparación de la concentración determinada de este modo con la concentración en procalcitonina, que está presente en una muestra de referencia o con un valor de referencia; iii) la determinación de la concentración en proteínas presentes en una muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo; y iv) la comparación de la concentración determinada de este modo con la concentración en proteínas presentes en una muestra de referencia o con un valor de referencia

La presente invención se refiere al campo de la diferenciación entre meningitis bacterianas y víricas. La invención se refiere de una manera más particular a un procedimiento para llevar a cabo la detección de una infección del tipo meningitis bacteriana que consiste, principalmente, en la determinación de parámetros biológicos como la concentración en procalcitonina en la sangre y la concentración en proteínas presentes en el líquido cefalorraquídeo.

Las meningitis agudas son infecciones comunes, en la mayoría de los casos de origen vírico (82-94 %) y que entonces pueden ser resorbidas de manera espontánea. Sin embargo, cuando sean de origen bacteriano (6-18 %), las meningitis pueden ser mortales y con frecuencia están asociadas con secuelas neurológicas severas, de manera particular cuando el diagnóstico y el tratamiento han sido iniciados de forma tardía. En el momento actual, como consecuencia de la dificultad de distinguir rápidamente y de manera cierta las meningitis bacterianas de las meningitis víricas, los pacientes en los que ha sido identificada una meningitis son tratados rápidamente con antibióticos en hospitalización y su tratamiento se prolonga hasta que el origen de la meningitis esté claramente diagnosticado. Las consecuencias de esta administración sistemática de antibióticos a los pacientes en los cuales se ha identificado una meningitis son importantes, no solamente al nivel económico sino también al nivel médico. En efecto, este tipo de administración contribuye al riesgo de desarrollar cepas bacterianas, que son resistentes a los antibióticos, enfermedades nosocomiales y, sobre todo, presenta un coste elevado. Un estudio que ha sido realizado en los Estados Unidos ha mostrado de la misma manera que la hospitalización de los pacientes afectados de meningitis vírica representan un coste de 250 a 300 millones de dólares por año (Khetsuriani et al., Neuroepidemiology 2003, vol. 22, páginas 345-352).

Como consecuencia, parece necesario establecer un diagnóstico rápido y simple que permita distinguir las meningitis bacterianas de las meningitis víricas con una sensibilidad del 100 % para las meningitis bacterianas.

Se conocen numerosos signos clínicos para distinguir las meningitis bacterianas de las meningitis víricas con una cierta sensibilidad, como se ha descrito en los artículos de los autores Michelow et al. (Pediatr. Infect. Dis. Journal, 2000, vol. 19, páginas 66-72) y Tatara et al. (Pediatr. Int., 2000, vol.42, páginas 541-546). A título de ejemplos de tales signos clínicos, se pueden citar el púrpura, el aspecto denominado "séptico y/o tóxico" y las convulsiones que contribuyan al diagnóstico de la meningitis bacteriana. No obstante, estos signos clínicos no están siempre presentes ni son detectables en el caso de los pacientes afectados de meningitis bacteriana.

De la misma manera, existen ensayos bacteriológicos susceptibles de dar un resultado con una gran especificidad, pero estos ensayos no alcanzan la sensibilidad requerida del 100 % para las meningitis bacterianas. Por lo tanto, existe todavía un riesgo con tales ensayos de no identificar la totalidad de los pacientes afectados de meningitis bacterianas. Por consiguiente, dichos ensayos no pueden ser utilizados para evitar la administración sistemática de antibióticos a los pacientes en los que haya sido identificada una meningitis. A título de ejemplos de ensayos bacteriológicos, se pueden citar la coloración de Gram o los estudios de antígenos bacterianos del líquido cefalorraquídeo como se ha descrito en las publicaciones de los autores Nigrovic et al. (Pediatrics, 2002, vol. 110, páginas 712-719), Saez-Llorens et al. (Lancet, 2003, vol. 88, páginas 615-620), Tunkel et al. (Clin. Infect. Dis., 2004, vol. 39, páginas 1267-1284), Maxson et al. (J. Pediatr., 1994, vol. 125, páginas 235-238). De la misma manera han sido propuestos marcadores biológicos para mejorar el diagnóstico etiológico de las meningitis, como se ha descrito en las publicaciones de los autores Seaz-Lorens et al. (Lancet, 2003, vol. 88, páginas 615620) y Tunkel et al. (Clin. Infect. Dis., 2004, vol. 39, páginas 1267-1284). A título de ejemplos de marcadores biológicos propuestos, se pueden citar los marcadores presentes en la sangre como la proteína C-reactiva, la interleucina 6, los leucocitos entre los cuales se encuentran los neutrófilos, los marcadores presentes en el líquido cefalorraquídeo como las proteínas, los leucocitos entre los cuales se encuentran los neutrófilos y los marcadores presentes en la sangre y en el líquido cefalorraquídeo como la procalcitonina, el lactato, la glucosa, tales como los que han sido descritos por los autores Ferriere et al. (annales de biología clinique, 2000, vol.58, páginas 4959), Jereb et al. (infection, 2001, vol. 29, páginas 209-212), Mary et al. (annales de biología clinique, 2003, vol.61, páginas 127-137), Bender et al. (neurology, vol. 63, páginas 1311-1313), Gendrel et al. (Méd. Mal. Infect., vol. 26, páginas 1068-1072), Van Rossum et al., (Lancet Infect. Dis., 2004, vol. 4, páginas 620-630), Schwartz et al. (critical care medicine, 2000, vol. 28, páginas 1828-1832), Viallon et al. (presse médicale, 2000, vol. 29, páginas 584-588), Gendrel et al., (presse médicale, 1998, vol. 27, páginas 1133-1139).

Numerosas reglas, que combinan estos signos clínicos y/o estos marcadores biológicos, han sido propuestas con el fin de distinguir las meningitis bacterianas y víricas.

De este modo, se puede citar la regla de los autores Jaeger et al. (Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 200, vol. 19, páginas 1418-1421), que es un modelo basado en la determinación de la concentración en glucosa y en glóbulos blancos en la sangre y la concentración en neutrófilos y en proteínas en el líquido cefalorraquídeo.

La regla de los autores Bonsu et al. (Pediatr. Infect. Dis. J., 2004, vol. 23, páginas 511-517) es una ecuación fraccional polinomial que está basada en la determinación de la concentración en neutrófilos y en proteínas en el líquido cefalorraquídeo y que toma también en consideración la edad del paciente.

La regla de los autores Freedman et al. (Freedman et al., (Arch. Pediatr. Adolesc. Med., 2001, vol. 155, páginas 1301-1306) está basada en una lista de diferentes características que incluyen la edad del paciente, la coloración de Gram del líquido cefalorraquídeo y la concentración en glóbulos blancos, en proteínas, en glucosa en el líquido cefalorraquídeo.

La regla de los autores Nigrovic et al. (Pediatrics 2002, vol. 110, páginas 712719) está igualmente basada en una lista de características que incluyen la presencia de convulsiones en el paciente, la concentración en neutrófilos en la sangre, la coloración de Gram del líquido cefalorraquídeo, la concentración en neutrófilos y en proteínas en el líquido cefalorraquídeo.

La regla de los autores Ooestenbrink et al. (Arch. Pediatr. Adolesc. Med., 2002, vol. 156, páginas 1189-1194) asocia en una trama compleja elementos clínicos con elementos bioquímicos.

No obstante, en el momento actual no existen ensayos rápidos y simples que permitan distinguir las meningitis bacterianas y víricas con la sensibilidad requerida del 100 % para las meningitis bacterianas y con una especificidad suficientemente elevada.

Los inventores han establecido ahora un procedimiento rápido y simple para llevar a cabo la detección precoz de la presencia de una meningitis bacteriana que presenta una sensibilidad del 100 % para las meningitis bacterianas y esto con una especificidad superior al 50 %.

De este modo, un primer objeto de la invención corresponde a un procedimiento in vitro para llevar a cabo la detección de la presencia de una meningitis bacteriana, que consiste en: i) la determinación de la concentración en procalcitonina, que está presente en

una muestra sanguínea de ensayo; y ii) la comparación de la concentración determinada de este modo con la

concentración en procalcitonina, que está presente en una muestra de

referencia o con un valor de referencia; iii) la determinación de la concentración en proteínas presentes en una muestra de

líquido cefalorraquídeo de ensayo; y iv) la comparación de la concentración determinada de este modo con la

concentración en proteínas presentes en una muestra de referencia o con un

valor de referencia.

Se entiende por meningitis bacteriana, una inflamación de las meninges, que puede ser provocada...

1. Procedimiento in vitro para llevar a cabo la detección de la presencia de una meningitis bacteriana, que consiste en:

i) la determinación de la concentración en procalcitonina, que está presente en una muestra sanguínea de ensayo; y

ii) la comparación de la concentración determinada de este modo con la concentración en procalcitonina, que está presente en una muestra de referencia o con un valor de referencia;

iii) la determinación de la concentración en proteínas presentes en una muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo; y

iv) la comparación de la concentración determinada de este modo con la concentración en proteínas presentes en una muestra de referencia o con un valor de referencia. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque dicha

muestra de referencia de la etapa ii) se elige entre el grupo que comprende: -una muestra sanguínea, que procede de un individuo sano; -una muestra sanguínea, que procede de un individuo, en el que está presente

una meningitis vírica; y

- una solución de procalcitonina con una concentración determinada, principalmente con una concentración en procalcitonina comprendida entre 0,05 ng/ml y 10 ng/ml, de manera preferente entre 0,1 ng/ml y 1 ng/ml. 3. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2,

caracterizado porque la etapa i) se efectúa por medio de técnicas inmunológicas cuantitativas.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicha muestra de referencia en la etapa iv) se elige entre el grupo que comprende: -una muestra de líquido cefalorraquídeo, que procede de un individuo sano, -una muestra de líquido cefalorraquídeo, que procede de un individuo, en el

que está presente una meningitis vírica; y -una solución de proteínas con una concentración determinada, principalmente con una concentración en proteínas comprendida entre 0,05 g/l y 5 g/l, de

- 23 manera preferente entre 0,1 g/l y 1 g/l. 5. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la etapa iii) se efectúa por medio de un ensayo colorimétrico. 6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque dicha muestra sanguínea de ensayo y, eventualmente, dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo proceden de un individuo, cuya edad está comprendida entre 2 semanas y 25 años, de manera preferente entre 3 semanas y 18 años. 7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque dicha muestra sanguínea de ensayo y, eventualmente, dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo proceden de un individuo para el cual se ha establecido que está afectado de una meningitis, principalmente de un individuo que presenta más de 5 glóbulos blancos/mm3, de manera preferente más de 7 glóbulos blancos/mm3 en su líquido cefalorraquídeo. 8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque dicha muestra sanguínea de ensayo y, eventualmente, dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo no proceden de un individuo que haya sufrido previamente una intervención neuroquirúrgica, de un individuo que sufra de inmunodepresión y/o de un individuo que presente un púrpura, un aspecto séptico y/o tóxico y/o convulsiones. 9. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque dicha muestra sanguínea de ensayo y, eventualmente, dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo no proceden de un individuo en el que se haya realizado un tratamiento antibiótico en las 48 horas que preceden a la toma de dicha muestra sanguínea de ensayo y, eventualmente, de dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo. 10. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque dicha muestra de líquido cefalorraquídeo de ensayo no presenta una concentración en glóbulos rojos mayor que 12.000 glóbulos rojos/mm3, de manera preferente mayor que 10.000 glóbulos rojos/mm3. 11. Estuche que consiste en: -medios para llevar a cabo la detección de la procalcitonina y, eventualmente,

- 24 una solución de procalcitonina con una concentración determinada; y -medios para llevar a cabo la detección de las proteínas en una muestra de líquido cefalorraquídeo y, eventualmente, una solución de proteínas con una concentración determinada. 12. Estuche según la reivindicación 11, caracterizado porque dichos medios para llevar a cabo la detección de la procalcitonina son medios de aplicación de técnicas inmunológicas cuantitativas que comprenden anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que enlazan específicamente la procalcitonina. 13. Estuche según una de las reivindicaciones 11 o 12, caracterizado porque dichos medios para llevar a cabo la detección de las proteínas son reactivos colorimétricos, cuya reacción con dichas proteínas permite determinar su concentración, eligiéndose dichos medios para llevar a cabo la detección entre el grupo que comprende el rojo de pirogalol, una solución de amidoschwartz, una solución de metanol acético o una mezcla de éstos. 14. Utilización de un estuche según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 para llevar a cabo la fabricación de un útil de diagnóstico de la meningitis bacteriana. 15. Utilización según la reivindicación 14, caracterizada porque dicho útil de diagnóstico está destinado a individuos, cuya edad está comprendida entre 2 semanas y 25 años, de manera preferente entre 3 semanas y 18 años. 16. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 14 o 15 caracterizada porque dicho útil de diagnóstico está destinado a individuos para los cuales se ha establecido que están afectados de meningitis, principalmente individuos que presentan más de 5 glóbulos blancos/mm3, de manera preferente más de 7 glóbulos blancos/mm3 en su líquido cefalorraquídeo. 17. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16 caracterizada porque dicho útil de diagnóstico no está destinado a individuos que hayan sufrido previamente una intervención neuroquirúrgica, individuos que sufran de inmunodepresión y/o individuos que presenten un púrpura, un aspecto séptico y/o tóxico y/o convulsiones. 18. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17 caracterizada porque dicho útil de diagnóstico no está destinado a individuos que

- 25 presenten más de 12.000 glóbulos rojos/mm3, de manera preferente más de 10.000 glóbulos rojos/mm3 en su líquido cefalorraquídeo. 19. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18 caracterizada porque dicho útil de diagnóstico no está destinado a individuos en los 5 cuales se haya realizado un tratamiento antibiótico en las 48 horas que preceden a la toma, en dichos individuos, de una muestra sanguínea y, eventualmente, de una muestra de líquido cefalorraquídeo. 20. Utilización de un estuche según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en un procedimiento in vitro para llevar a cabo la detección de la presencia de 10 una meningitis bacteriana en un individuo.