Un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO:

1, SEQ ID NO: 2, SEQ 1D NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ IDNO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 9

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Campo de la invención

La invención está relacionada con la detección de anticuerpos dirigidos contra el virus de la inmunodeficiencia felina.

Antecedentes de la invención

El virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), anteriormente llamado el lentivirus T-linfotrópico felino, fue aislado por primera vez en 1986 de un alojamiento grande para múltiples gatos en Petaluma, California (Pederson y col., Science (1987) 235:790). El VIF infecta a gatos para producir un síndrome similar al SIDA. Aunque el VIF es morfológicamente y patológicamente similar al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), se ha demostrado que es antigénicamente distinto del VIH. Al igual que el VIH, una vez que un gato se infecta por el VIF, la enfermedad progresa de una infección primaria (viremia, fiebre, linfadenitis general) a una fase prolongadamente asintomática, seguida de alteración grave de la función inmunitaria producida por una reducción en linfocitos CD4, y produciendo una elevada susceptibilidad a infecciones secundarias y por último la muerte.

El VIF se ha clasificado como un miembro de la subfamilia Lentiviridae en la familia Retroviridae, la familia que incluye los virus de la inmunodeficiencia humana y simia, anemia infecciosa equina, maedi visna de oveja y virus de la artritis-encefalitis caprina (VAEC). El genoma del VIF está organizado como otros lentivirus con tres marcos de lectura abiertos largos correspondientes a gag, pol y env (Talbott y col., Proc. Natl. Acad. Sci. (1989) 86:5743; Olmsted y col., Proc. Natl. Acad. Sci. (1989) 86:2448). El gen gag codifica los principales componentes estructurales del virus, el gen env codifica la glicoproteína de la envoltura y el gen pol codifica la proteína polimerasa.

El gen gag se expresa como una poliproteína de 55 kD que es procesada en tres subunidades: una proteína de la matriz p15, una proteína de la cápside p24 y una proteína de la nucleocápside p10. El gen pol codifica tres proteínas: la proteasa, la transcriptasa inversa y una proteína p14.6 de función desconocida. El autoprocesamiento por la porción de proteasa del gen da lugar a las tres proteínas de la región pol. Adicionalmente, la proteasa es responsable del procesamiento del precursor gag. El gen pol se expresa como una proteína de fusión gag-pol. El gen de la envoltura se expresa como una glicoproteína de 160 kD, gp160. La antigenicidad de las proteínas del núcleo del VIF es similar a la de otros lentivirus.

En todo el mundo se han preparado varias cepas aisladas víricas independientes, y se ha llevado a cabo un cierto número de estudios con el fin de demostrar la estructura de las cepas aisladas: la cepa americana Petaluma, Talbott y col. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5743-5747; Philipps y col., J. Virol., 1990, 64, 10, 4605-4613), las cepas japonesas (las cepas TM1 y TM2), Miyazawa y col., Arch. Virol., 1989, 108, 59-68, y las cepas aisladas suizas (VIFZ1 y VIFZ2), Morikawa y col., Virus Research, 1991, 21, 53-63.

Se han descrito las secuencias de nucleótidos de tres clones províricos derivados de las cepas aisladas del VIF americano (cepa Petaluma) (clones VIF34TF10, VIF14 y cepa aislada PPR) (Olmsted y col. 1989; Philipps y col., 1990; Talbott y col., 1989) y se han comparado con dos cepas aisladas suizas (Morikawa y col. 1991). Esta comparación condujo a Morikawa y col. a especificar la presencia de ciertas regiones conservadas y ciertas regiones variables dentro del gen env de VIF. También se han aislado cepas francesas (cepas Wo y Me) (Moraillon y col., 1992, Vet. Mic., 31, 41-45).

El virus se replica óptimamente en células mononucleares de la sangre y tiene un tropismo por linfocitos T, macrófago peritoneal, macrófago cerebral y astrocitos. En común con los otros retrovirus, el material genético del VIF está compuesto por ARN y la producción de una copia de ADN del ARN vírico es una etapa esencial en la replicación del VIF en el huésped. Esta etapa requiere que la enzima transcriptasa inversa entre en el huésped por el virus invasor. La versión de ADN del genoma vírico se inserta en el material genético de células huésped infectadas en las que sigue residiendo como un provirus. Este provirus se replica cada vez que la célula se divide y puede codificar la producción de nuevas partículas víricas. Las células infectadas por el VIF siguen estando infectadas durante la duración de su vida.

Parece que el virus se propaga naturalmente por transmisión horizontal, predominantemente mediante heridas por mordeduras de un gato infectado ya que estos animales derraman cantidades apreciables de virus en la saliva (Yamamoto y col., Am. J. Vet. Res. 1988, 8:1246). Se ha informado de la transmisión vertical, pero es rara.

Las actuales pruebas de cribado diagnóstico para la infección por el VIF detectan anticuerpo (Ab) en suero para el

VIF. También están disponibles kits de detección del virus, pero no están extendidos. Están disponibles varias pruebas de diagnóstico para determinar la presencia de anticuerpo para el VIF en animales infectados. Por ejemplo, el kit de prueba de Ab para el VIF PetChek® y el kit de prueba SNAP® Combo FeLV Ag/FIV Ab (IDEXX Laboratories, Westbrook, Maine) son pruebas de diagnóstico basadas en inmunoensayo para la infección por el VIF.

El detectar la infección por el VIF está siendo cada vez más importante ya que los estudios revelan que la infección por el VIF está extendida mundialmente.

Resumen de la invención

En un aspecto, la invención se refiere a polipéptidos gag del VIF. En otro aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para determinar si un animal está infectado por el VIF detectando la presencia de anticuerpos para el VIF en una muestra biológica del animal. En diversos otros aspectos, la invención también se refiere a dispositivos y kits para detectar anticuerpos para el VIF en una muestra. Los dispositivos y kits incluyen un polipéptido gag para el VIF inmovilizado sobre una fase sólida. El kit incluye un componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF conjugado con una marca.

Descripción detallada

Antes de describir la presente invención en detalle se definirán varios términos. Como se usa en este documento, las formas singulares “un,” “una”, “el” y “la” incluyen referentes plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otro modo.

Como se usa en este documento, el término “polipéptido” se refiere a un compuesto de una única cadena o un complejo de dos o más cadenas de restos de aminoácidos ligados por enlaces peptídicos. La(s) cadena(s) puede(n) ser de cualquier longitud. Una proteína es un polipéptido, y los términos se usan sinónimamente. Dentro del alcance de la invención también están incluidas variantes funcionalmente equivalentes y fragmentos de polipéptidos del VIF. El polipéptido puede unirse a uno o más anticuerpos específicos para el polipéptido.

Los polipéptidos derivados del VIF incluyen cualquier región del proteoma del VIF que incluye por ejemplo, porciones de las regiones gag y env y mimítopes de las mismas. Las patentes de EE.UU. nº 5.648.209, 5.591.572 y 6.458.528 describen polipéptidos del VIF derivados de las proteínas env y gag del VIF.

Las SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 4 se derivan de la gag del VIF nativa p24.

Las SEQ ID NO: 5 a SEQ ID NO: 9 se derivan de la gag del VIF nativa p15.

“Especificidad de unión” o “unión específica” se refiere al reconocimiento sustancial de una primera molécula por una segunda molécula, por ejemplo, un polipéptido y un anticuerpo policlonal o monoclonal, o un fragmento de anticuerpo (por ejemplo, un fragmento Fv, Fv monocatenario, Fab' o F(ab')2) específico para el polipéptido.

Un “par de unión específica” es un conjunto de dos moléculas diferentes en el que una molécula tiene un área de su superficie o en una cavidad que se une específicamente a y, por tanto, es complementaria de, a un... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ 1D NO: 3, SEQ ID

NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ IDNO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 9. 2. Un procedimiento de detección de la presencia de anticuerpos para el VIF en una muestra biológica, comprendiendo el procedimiento:

poner en contacto una muestra biológica de un animal con el polipéptido del VIF de la reivindicación 1, y detectar si los anticuerpos para el VIF en la muestra se unen sustancialmente al polipéptido, detectándose así la presencia de anticuerpos para el VIF en la muestra. 3. Un procedimiento para detectar una infección por el VIF en un animal que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica del animal con una fase sólida que tiene unida a la misma el polipéptido del VIF de la reivindicación 1;

(b) poner en contacto la muestra y la fase sólida con un componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF, en el que el componente de unión específica está conjugado con una marca;

(c) detectar la marca, detectándose así una infección por el VIF en el animal.

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que el componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF es un anticuerpo dirigido contra IgG de gato. 5. Un procedimiento para detectar una infección por el VIF en un animal que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica del animal con un componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF, en el que el componente de unión específica está conjugado con una marca;

(b) poner en contacto la muestra y el componente de unión específica para el anticuerpo de muestra conjugado con una marca con la fase sólida que tiene unida a la misma el polipéptido del VIF de la reivindicación 1; y

(c) detectar la marca, detectándose así una infección por el VIF en el animal,

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF es un anticuerpo dirigido contra IgG de gato.

7. Un dispositivo para detectar una infección por el VIF en un animal que comprende una fase sólida que tiene inmovilizada sobre la misma el polipéptido del VIF de la reivindicación 1.

8. Un kit para detectar una infección por el VIF en un animal que comprende el dispositivo de la reivindicación 7 y un componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF, en el que el componente de unión específica está conjugado con una marca.

9. El kit de la reivindicación 8, en el que el componente de unión específica para un anticuerpo para el VIF es un anticuerpo dirigido contra IgG de gato.