COMBINACIÓN DE UNA PROTEÍNA DE FUSIÓN ENTRE UN ANTICUERPO CONTRA EL DOMINIO EDB DE LA FIBRONECTINA E IL2 CON UNA PEQUEÑA MOLÉCULA ADICIONAL.

Una combinacion que comprende al menos (i) una proteina de fusion y (ii) gemcitabina,

en la que la proteina de fusion comprende una parte de anticuerpo que reconoce especificamente el dominio EDb de la fibronectina y una parte de interleucina-2, y en la que la combinacion sirve para el uso en un procedimiento de tratamiento del cancer

DESCRIPCIÓN [0001] La invención se refiere a una combinación de (i) una proteína de fusión que comprende una parte de interleucina 2 y una parte de anticuerpo que reconoce específicamente el dominio extra B de la fibronectina (ED-B-fibronectina) y (ii) gemcitabina, y a su uso para el tratamiento del cáncer, en particular del cáncer de páncreas, como se expone en las reivindicaciones.

ESTADO DE LA TÉCNICA [0002] El adenocarcinoma de páncreas constituye la quinta causa de muerte relacionada con cáncer en los países occidentales industrializados (Parker SL, Tong T, Bolden S, Wingo PA. Cancer statistics, 1997. CA Cancer J Clin 1997; 47:5-27). El pronóstico para los pacientes a los que se ha diagnosticado cáncer de páncreas es extremadamente malo, con una tasa de supervivencia global estimada a 5 años de tan solo 1 a 4%. La extirpación quirúrgica es el único tratamiento potencialmente curativo, pero en la mayoría de los casos la extensión local o la enfermedad metastásica excluye el tratamiento quirúrgico (Rosewicz S, Wiedenmann B. Pancreatic carcinoma. Lancet 1997; 349:485-489; Cohen SJ, Pinover WH, Watson JC, Meropol NJ. Pancreatic cancer. Curr Treat Options Oncol 2000; 1:375-386). Además, las estrategias paliativas actualmente disponibles influyen poco en el curso agresivo de este neoplasma, alcanzándose unas tasas de respuesta objetiva inferiores al 20% con una pésima supervivencia media de 4 a 6 meses (Burris HA, III, Moore MJ, Andersen J, Green MR, Rothenberg ML, Modiano MR, Cripps MC, Portenoy RK, Storniolo AM, Tarassoff P, Nelson R, Dorr FA, Stephens CD, Von Hoff DD. Improvements in survival and clinical benefit with gemcitabine as first-line therapy for patients with advanced pancreas cancer: a randomized trial. J Clin Oncol 1997; 15:2403-2413). Los agentes quimioterapéuticos y las radioterapias actuales se basan en que las células tumorales, por su naturaleza, se dividen rápidamente, por lo que su selectividad es baja. La toxicidad inaceptable para las células proliferativas no malignas limita la escalada de dosis e impide la administración de una dosis curativa. Además, la mayoría de los agentes quimioterapéuticos no se acumula con preferencia en el lugar del tumor (Bosslet K, Straub R, Blumrich M, Czech J, Gerken M, Sperker B, Kroemer HK, Gesson JP, Koch M, Monneret C. Elucidation of the mechanism enabling tumor selective prodrug monotherapy. Cancer Res 1998; 58:1195-1201). Debido a la alta presión intersticial y la vasculatura tumoral irregular, los agentes quimioterapéuticos no consiguen alcanzar niveles adecuados en el tumor (Folli S, Pelegrin A, Chalandon Y, Yao X, Buchegger F, Lienard D, Lejeune F, Mach JP. Tumor-necrosis factor can enhance radio-antibody uptake in human colon carcinoma xenografts by increasing vascular permeability. Int J Cancer 1993; 53:829-836; Jain RK. Transport of molecules in the tumor interstitium: a review. Cancer Res 1987; 47:3039-3051). Sin embargo, el desarrollo clínico de TNFα sistémico no prosperó porque las dosis necesarias para obtener un efecto anticanceroso estaban asociadas a una toxicidad inaceptable (Jones AL, Selby P. Tumor necrosis factor: clinical relevance. Cancer surveys 1989; 8:817836). Una manera prometedora de salvar estos obstáculos consiste en el suministro dirigido de agentes terapéuticos al microentorno del tumor por medio de ligandos específicos de antígeno, por ejemplo de anticuerpos específicos de marcadores asociados a tumores. En particular, tener como objetivo marcadores asociados a la angiogénesis tumoral constituye una estrategia terapéutica atractiva por numerosas razones. En primer lugar, las dianas que se expresan selectivamente alrededor de la neovasculatura tumoral y en el estroma tumoral son fácilmente accesibles a derivados de anticuerpos administrados por vía intravenosa. En segundo lugar, los marcadores de neovasculatura son producidos típicamente por células endoteliales y/o fibroblastos, que son más estables genéticamente que las células tumorales. En tercer lugar, puesto que la angiogénesis es un requisito previo para el crecimiento tumoral y la metástasis, el suministro selectivo de agentes tóxicos a los vasos sanguíneos de nueva formación debería ofrecer un beneficio terapéutico. Por último, puesto que la angiogénesis, es decir, el crecimiento de nuevos capilares a partir de vasos sanguíneos preexistentes, es característica de todos los tumores sólidos agresivos, estas dianas pueden considerarse antígenos pantumorales (Halin C, Zardi L, Neri D. Antibody-based targeting of angiogenesis. News Physiol Sci 2001; 16:191-194; Alessi P, Ebbinghaus C, Neri D. Molecular targeting of angiogenesis. Biochim Biophys Acta 2004; 1654:39-49). [0003] Uno de los marcadores oncofetales asociados a la neoangiogénesis y el remodelado tisular más selectivo conocido hasta la fecha es el domino extra B (ED-B) de la fibronectina (FN) (Castellani P, Viale G, Dorcaratto A, Nicolo G, Kaczmarek J, Querze G, Zardi L. The fibronectin isoform containing the ED-B oncofetal domain: a marker of angiogenesis. Int J Cancer. 1 de diciembre de 1994; 59(5):612-8. Errata en: Int J Cancer, 4 de julio de 1995; 62(1):118). Las FN son componentes de la matriz extracelular (MEC) de alto peso molecular que se expresan abundantemente en una serie de tejidos sanos y líquidos corporales. Se pueden generar varias isoformas de FN diferentes por empalme alternativo a nivel del transcrito primario. El ED-B, un pequeño dominio de 91 aminoácidos, cuya secuencia es idéntica en hombres y ratones, habitualmente está ausente en la fibronectina plasmática y tisular, excepto en algunos vasos sanguíneos del endometrio regenerativo y los ovarios (Alessi P, Ebbinghaus C, Neri D. Molecular targeting of angiogenesis. Biochim Biophys Acta 2004; 1654:3949; Viti F, Tarli L, Giovannoni L, Zardi L, Neri D. Increased binding affinity and valence of recombinant antibody fragments lead to improved targeting of tumoral angiogenesis. Cancer Res 1999; 59:347-352). Sin embargo, puede insertarse en la molécula de fibronectina durante el remodelado tisular activo asociado a la neoangiogénesis, acumulándose de este modo alrededor de la neovasculatura y en el estroma de los tumores malignos y en otros tejidos sometidos a remodelado y angiogénesis. Recientemente se han generado numerosos anticuerpos de alta calidad específicos del dominio ED-B de la fibronectina. En particular, se ha verificado que el fragmento de anticuerpo humano scFv(L19) de cadena sencilla Fv, que muestra una afinidad de unión picomolar por ED-B, se dirige selectivamente a la neovasculatura tumoral tanto en modelos de tumores experimentales (Viti F, Tarli L, Giovannoni L, Zardi L, Neri D. Increased binding affinity and valence of recombinant antibody fragments lead to improved targeting of tumoral angiogenesis. Cancer Res 1999; 59:347-352) como en pacientes con cáncer (Santimaria M, Moscatelli G, Viale GL, Giovannoni L, Neri G, Viti F, Leprini A, Borsi L, Castellani P, Zardi L, Neri D, Riva

P. Immunoscintigraphic detection of the ED-B domain of fibronectin, a marker of angiogenesis, in patients with cancer. Clin Cancer Res 2003; 9:571-579), preparando así el terreno para el suministro selectivo de agentes terapéuticos a la neovasculatura tumoral. En este contexto, la interleucina 2 (IL-2) ha sido caracterizada como una de las citocinas antitumorales más potentes. Exhibe un conjunto de efectos reguladores inmunológicos, que incluyen la estimulación de diversas células efectoras antitumorales (Rosenberg SA. Progress in the development of immunotherapy for the treatment of patients with cancer. J Intern Med 2001; 250:462-475). Sin embargo, pese a que ha sido autorizada para el tratamiento clínico del carcinoma metastásico de células renales, la administración sistémica de IL-2 no ha demostrado tener el éxito que se esperaba. La eficacia terapéutica de la IL-2 administrada de forma sistémica se ve mermada por sus serios efectos secundarios potencialmente amenazadores para la vida (por ejemplo hipotensión ortostática, síndrome de extravasación capilar y malestar profundo) que limitan la escalada de dosis e impiden la administración de una dosis curativa (Bubenik J, Den Otter W, Huland E. Local cytokine therapy of cancer: interleukin-2, interferons and related cytokines. Cancer Immunol Immunother 2000; 49:116-122; Baluna R, Rizo J, Gordon BE, Ghetie V, Vitetta ES. Evidence for a structural motif in toxins and interleukin-2 that may be responsible for binding to endothelial cells and initiating vascular leak syndrome. Proc Natl Acad Sci USA 1999; 96:3957-3962). Además, la rápida degradación o eliminación de la IL-2 administrada de forma sistémica reduce adicionalmente su eficacia. Por otra parte, la administración local de IL-2 ha tenido más éxito y ha logrado controlar los derrames malignos y obtener...

1. Una combinación que comprende al menos (i) una proteína de fusión y (ii) gemcitabina, en la que la proteína de fusión comprende una parte de anticuerpo que reconoce específicamente el dominio EDb de la fibronectina y una parte de interleucina-2, y en la que la combinación sirve para el uso en un procedimiento de tratamiento del cáncer.

2. Una combinación para el uso según la reivindicación 1, en la que la proteína de fusión presenta una parte de anticuerpo N-terminal y una parte de interleucina-2 C-terminal o en la que la proteína de fusión presenta una parte de interleucina-2 N-terminal y una parte de anticuerpo C-terminal.

3. Una combinación para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que la proteína de fusión presenta un conector de la proteína de fusión que conecta la parte de anticuerpo y la parte de interleucina-2.

4. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la parte de anticuerpo se une específicamente al dominio oncofetal EDb de la fibronectina con una afinidad sub-nanomolar.

5. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la parte de anticuerpo comprende las secuencias conforme a SEQ ID NO: 6 a 11.

6. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la parte de anticuerpo comprende al menos una cadena pesada V conforme a la SEQ ID NO: 01 y al menos una cadena ligera V conforme a la SEQ ID NO: 02.

7. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que la parte de anticuerpo comprende una cadena pesada V conforme a la SEQ ID NO: 01 y una cadena ligera V conforme a la SEQ ID NO: 02.

8. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que las cadenas pesada y ligera están conectadas a través de un conector de

anticuerpo.

9. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a

8, en la que la parte de interleucina-2 es interleucina-2 humana o una variante 5 funcional de la misma.

10. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que un conector de la proteína de fusión conecta la parte de anticuerpo y la parte de interleucina-2.

11. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la gemcitabina es clorhidrato de gemcitabina.

12. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a

15 11, en la que el cáncer se selecciona entre cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de ovario y cáncer de mama.

13. Una combinación para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que el cáncer es cáncer de páncreas.