CÉLULAS MADRE POSTNATALES Y USOS DE LAS MISMAS.

La presente invención se desarrolló con el apoyo del Departamento de Salud y Servicios Humanos. El Gobierno de los Estados Unidos tiene ciertos derechos en la invención. Campo de la invención La invención se refiere en líneas generales a células madre dentales postnatales y a sus usos. Más específicamente, la invención se refiere, en un aspecto, al uso de células madre postnatales de pulpa dentaria decidua, y, en otro aspectoa una célula madre aislada multipotente de pulpa dentaria decidua postnatal humana, en particular, para la preparación de un medicamento. Antecedentes de la invención Las células madre postnatales (que significa aquellas presentes después del nacimiento) son células no especializadas que pueden renovarse a sí mismas de forma extensiva y desarrollarse a células más maduras que tienen funciones especializadas. Las células madre pueden inducirse en ciertas condiciones fisiológicas o experimentales para que se conviertan en células con funciones especiales, tales como las células de latido del músculo cardiaco, o las células productoras de insulina del páncreas. El proceso por el cual una célula madre se convierte en una célula con funciones especiales se conoce como diferenciación. La diferenciación puede inducirse a través del uso de múltiples señales que pueden incluir agentes químicos secretados por otras células, el contacto físico con células adyacentes, y ciertas moléculas en el microentorno. Por tanto, las células madre pueden tratarse con señales específicas para que se conviertan en tipos específicos de células que tienen funciones útiles. Estas células recién diferenciadas después pueden usarse para generar un remplazo para células que se pierden a través del envejecimiento y el desgaste normal, lesión, o enfermedad. Por ejemplo, las células madre se muestran prometedoras para el tratamiento de enfermedades tales como la enfermedad de Parkinson, la diabetes, y cardiopatía. Las células madre tienen múltiples aplicaciones en medicina y odontología. Por consiguiente, se necesitan nuevas fuentes de células madre, y procedimientos para su uso. Sumario de la invención ES 2 366 085 T3 La presente invención proporciona procedimientos y materiales que abordan las necesidades mencionadas anteriormente. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada, un procedimiento para implantar una célula inductora de hueso dentro de un organismo, un procedimiento para implantar una célula neural dentro de un organismo, un procedimiento para implantar un adipocito dentro de un organismo, y un procedimiento para generar dentina. De acuerdo con la presente invención, se proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada; en la que la célula madre se obtiene de un diente deciduo exfoliado ; la célula madre puede diferenciarse en una célula neural, un adipocito, o un odontoblasto; la célula madre tiene una velocidad de proliferación y un número de divisiones de la población mayor que las células madre estromáticas de la médula ósea (BMSSC) y las células madre de la pulpa dentaria (DPSC); la célula madre expresa STRO-1, CD146, ALP, fosfoglucoproteína extracelular de matriz LF155, factor de crecimiento de fibroblastos básico, endostatina, o una de sus combinaciones, y la célula madre puede proliferar hasta más de 140 diviaiones de la población. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada como se define anteriormente. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua puede diferenciarse en una célula neural, un adipocito, o un odontoblasto. Puede obtenerse una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua a partir de un diente deciduo no exfoliado. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la invención se obtiene de un diente deciduo exfoliado (SHED). Puede almacenarse una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua para su posterior uso. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua puede cultivarse en medio de cultivo tisular. Preferiblemente, el medio de cultivo tisular incluye suero. Más preferiblemente, el medio de cultivo tisular no incluye suero. El medio de cultivo tisular puede incluir uno o más factores de crecimiento. Preferiblemente, el factor de crecimiento es el factor de crecimiento de fibroblastos básico, el factor de crecimiento epidérmico, o ambos. El medio de cultivo tisular puede incluir un suplemento neuronal. Preferiblemente, el suplemento neuronal es suplemento B27. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua como se define anteriormente para preparar un medicamento para generar hueso dentro de un organismo. Generalmente, esto implica implantar una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua en un organismo. Preferiblemente, el organismo es un mamífero. Más preferiblemente, el organismo es un ser humano. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua puede obtenerse de un ser humano e implantarse en un ser humano diferente. Preferiblemente, la célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria 2 ES 2 366 085 T3 decidua se obtiene de, y se implanta en el mismo ser humano. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua puede expandirse ex vivo antes de implantarse en el organismo. Preferiblemente, la célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua se induce antes de implantarse en el organismo. Preferiblemente, la célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua se induce con BMP-4 o inducción por mineralización. Puede implantarse en un organismo una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua que no esté en combinación con un vehículo. Puede implantarse en un organismo una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua que esté en combinación con un vehículo. Preferiblemente, el vehículo contiene hidroxiapatita. Más preferiblemente, el vehículo contiene fosfato tricálcico. Más preferiblemente, el vehículo contiene hidroxiapatita y fosfato tricálcico. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua puede inducir que una célula receptora se diferencie en células formadoras de hueso. El medicamento puede usarse para promover la formación de hueso en un sitio de traumatismo dentro de un organismo. El traumatismo puede producirse por una lesión física. Preferiblemente, la lesión física es una lesión física accidental. Más preferiblemente, la lesión física es el resultado de un procedimiento médico o dental. Lo más preferiblemente, la lesión física es el resultado de cirugía. El traumatismo puede deberse a una enfermedad degenerativa. Preferiblemente, la enfermedad degenerativa es osteoporosis. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua para la preparación de un medicamento para producir tejido neural en un organismo. Esto implica implantar el medicamento en un organismo. Preferiblemente el organismo es un mamífero. Más preferiblemente el organismo es un ser humano. La célula madre dental puede implantarse en tejido presente dentro del organismo. Preferiblemente, el tejido es tejido neural. La célula madre dental puede expandirse ex vivo antes de implantarse en el organismo. Preferiblemente la célula madre dental se induce a neuronal antes de implantarse en el organismo. Puede implantarse en un organismo una célula madre dental que no esté en combinación con un vehículo. Puede implantarse en un organismo una célula madre dental que esté en combinación con un vehículo. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua para la preparación de un medicamento para producir tejido adiposo dentro un organismo. Esto implica implantar el medicamento en un organismo. Preferiblemente el organismo es un mamífero. Más preferiblemente el organismo es un ser humano. La célula madre dental puede expandirse ex vivo antes de implantarse en el organismo. Preferiblemente la célula madre dental se induce a adipogénesis antes de implantarse en el organismo. Puede implantarse en un organismo una célula madre dental que no esté en combinación con un vehículo. Puede implantarse en un organismo una célula madre dental que esté en combinación con un vehículo. La invención proporciona una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua para la preparación de un medicamento para generar dentina implantando una célula madre dental dentro de un organismo. Alternativamente, el medicamento puede usarse para generar... [Seguir leyendo]

1. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada; en la que: la célula madre es de un diente deciduo exfoliado humano; la célula madre puede diferenciarse en una célula neural, un adipocito, y un odontoblasto; la célula madre tiene una tasa de proliferación mayor y una cantidad mayor de divisiones de población que las células madre estromáticas de médula ósea adulta (BMSSC) y las células madre de pulpa dentaria (DPSC); la célula madre expresa STRO-1, CD146, ALP, glucoproteína extracelular de matriz LF155, factor de crecimiento de fibroblastos básico, endostatina, o una combinación de los mismos; y la célula madre puede proliferar hasta más de 140 divisiones de la población. 2. La célula madre de la reivindicación 1, en la que la célula madre puede expresar CBFA1, ALP, MEPE, BSP, DSPP, o cualquier combinación de los mismos después de inducción de la mineralización. 3. La célula madre de la reivindicación 1, en la que la célula madre puede expresar CBFA1, Osterix, Osteocalcina, o cualquier combinación de los mismos después de inducción con BMP-4. 4. La célula madre de la reivindicación 1, en la que la célula madre puede expresar nestina, tubulina ßIII, ácido glutámico descarboxilasa, núcleos neuronales, proteína ácida fibrilar de la glía, neurofilamento M, nucleótido­ 2',3' cíclico-3'-fosfodiesterasa, o cualquier combinación de los mismos después de inducción neural. 5. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento para generar hueso, producir tejido neural humano o producir tejido adiposo humano en un organismo. 6. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento para generar dentina en un organismo. 7. La célula madre de la reivindicación 6, en la que el procedimiento comprende (a) poner en contacto la dentina pre-existente con la célula madre, y (b) incubar la dentina pre-existente y la célula madre. 8. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para generar hueso en un organismo implantando el medicamento que contiene al menos una de las células madre en el organismo. 9. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 8, en la que la célula madre se implanta después de inducción de la mineralización o inducción con BMP-4. 10. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 8, en la que la célula madre induce a una célula receptora a producir hueso. 11. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 10, en la que la célula receptora es un osteoblasto o un osteocito. 12. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 8, en la que la célula madre se implanta para reducir o mejorar un traumatismo dentro del organismo. 13. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 12, en la que el traumatismo es una enfermedad degenerativa ósea, preferiblemente osteoporosis. 14. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 12, en la que el traumatismo es una lesión física, preferiblemente debida al remplazo de una articulación, el remplazo de una cadera, o un conducto radicular. 15. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para producir tejido neural humano en un organismo implantando el medicamento que contiene al menos una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua en el organismo. 16. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 15, en la que la célula madre dental se implanta después de inducción neural. 17. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 15, en la que la célula madre dental se implanta en tejido neural contenido dentro del organismo. 18. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 15, en la que la célula madre dental se implanta para reducir o mejorar un traumatismo neural dentro del organismo. 19. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 18, en la que el traumatismo neural es una enfermedad degenerativa neural, preferiblemente enfermedad de Alzheimer o 18 enfermedad de Parkinson. ES 2 366 085 T3 20. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 18, en la que el traumatismo neural es una lesión física. 21. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para producir tejido adiposo humano implantando el medicamento que contiene al menos una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua en un organismo. 22. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 21, en la quee la célula madre dental se implanta después de inducción de adipocitos. 23. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para generar dentina implantando el medicamento que contiene una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua en un organismo. 24. Una célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para generar dentina por un procedimiento que comprende (a) poner en contacto la dentina pre-existente con una célula madre dental, y (b) incubar la dentina pre-existente y la célula madre dental. 25. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 24, en la que la dentina pre-existente se pone en contacto con la célula madre dental in vivo o in vitro. 26. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 24, en la que la dentina pre-existente está contenida dentro de un diente. 27. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 24, en la que la dentina pre-existente es dentina humana pre-existente. 28. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 24, que comprende adicionalmente poner en contacto la dentina pre-existente con una formulación para producir dentina tratada. 29. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 28, que comprende adicionalmente lavar la dentina tratada con un fluido, preferiblemente agua, un disolvente biológico, o un tampón biológico. 30. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 28, en la que la formulación es una solución ácida, preferiblemente ácido acético, ácido fosfórico, ácido fórmico, ácido sulfúrico, ácido clorhídrico, ácido fluorhídrico, ácido yodhídrico, ácido nítrico, o ácido bromhídrico. 31. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 30, en la que la solución ácida tiene una concentración entre el 0,01% y el 100% de ácido, preferiblemente entre el 1% y el 10% de ácido, más preferiblemente entre el 1% y el 5% de ácido, más preferiblemente entre el 0,5% y el 2% de ácido. 32. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 28, en la que la formulación es una solución básica, preferiblemente hidróxido sódico, hidróxido potásico, o hidróxido de amonio. 33. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 32, en la que la solución básica tiene una concentración entre el 0,01% y el 100% de base, preferiblemente entre el 1% y el 10% de base, más preferiblemente entre el 1% y el 5% de base, más preferiblemente entre el 0,5% y el 2% de base. 34. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 24, en la que la dentina se genera en respuesta a un traumatismo en el diente. 35. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de la reivindicación 34, en la que el traumatismo es un conducto radicular. 36. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8, 15, 21 o 23, en la que el organismo es un mamífero, preferiblemente un ser humano. 37. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8, 15, 21, 23 o 24, en la que la célula madre se expande ex vivo. 38. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8, 15, 21, 23 o 24, en la que la célula madre se implanta en combinación con un vehículo. 39. La célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua de acuerdo con la reivindicación 38, 19 en la que el vehículo comprende hidroxiapatita, fosfato tricálcico, o hidroxiapatita y fosfato tricálcico. 40. La célula madre de la reivindicación 1, en la que la célula se transfecta con un segmento de ácido nucleico. 41. Uso de pulpa dentaria decidua postnatal humana para obtener una célula madre multipotente postnatal humana decidua aislada de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho uso es ex vivo. 5 42. El uso de la reivindicación 41 que comprende las etapas de: separar la pulpa de la corona remanente de un diente deciduo humano, formar una suspensión de células individuales a partir de la pulpa, cultivar la suspensión de células individuales en un medio líquido en cultivo tisular; y aislar las colonias adherentes del cultivo tisular; ES 2 366 085 T3 10 produciendo de este modo la célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada. 43. El uso de la reivindicación 41 o 42, que comprende adicionalmente congelar la célula madre multipotente postnatal humana de pulpa dentaria decidua aislada. 44. El uso de la reivindicación 42, en la que el medio comprende suero. 45. El uso de la reivindicación 42, en la que el medio es un medio sin suero que contiene bFGF, opcionalmente 15 contiene EGF, y opcionalmente contiene suplemento B27. 46. El uso de la reivindicación 42, en la que la formación de una suspensión de células individuales a partir de la pulpa comprende digerir la pulpa con colagenasa tipo I y dispasa. 47. El uso de la reivindicación 42, en la que el diente deciduo humano es un incisivo. 48. El uso de la reivindicación 47, en la que el diente deciduo humano es de niños de 7 a 8 años de edad. ES 2 366 085 T3 21 ES 2 366 085 T3 22 ES 2 366 085 T3 23 ES 2 366 085 T3 24 ES 2 366 085 T3 ES 2 366 085 T3 26 ES 2 366 085 T3 27 ES 2 366 085 T3 28 ES 2 366 085 T3 29 ES 2 366 085 T3 ES 2 366 085 T3 31