La línea celular de la rata algodonera depositada en la American Type Culture Collection con el número de acceso ATCC PTA-3930

Esta invención se refiere a una nueva línea celular y a sus usos, que incluye un nuevo procedimiento para la producción del virus que causa la enfermedad porcina conocida como síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS).

En términos más generales, la descripción se refiere a la propagación de organismos o patógenos tales como virus, por ejemplo, virus virulentos o atenuados, usando células de pulmón de la rata algodonera o las células o la línea celular según la invención (por ejemplo, células depositadas para la producción de organismos o patógenos tales como virus, por ejemplo, virus virulentos o atenuados, tales como organismos o patógenos, por ejemplo, virus, que normalmente no tienen a roedores o ratas o la rata algodonera o las células de pulmón de la rata algodonera como hospedador natural, o virus de ARN, por ejemplo, virus de ARN de cadena sencilla positiva, como los virus del orden Nidovirales, por ejemplo, arterivirus o virus de la familia Arteriviridae, por ejemplo, el virus que eleva la lactato deshidrogenasa (LDV), el virus de la arteritis equina (EAV), el virus de la fiebre hemorrágica de simio (SHFV) y el virus del PRRS (cuyo vector normalmente son artrópodos); virus de la familia Coronaviridae, por ejemplo, coronavirus tales como el virus de la bronquitis infecciosa, coronavirus canino, coronavirus felino, coronavirus humano 229E, virus de la diarrea epidémica porcina, virus de la gastroenteritis transmisible, virus de la gastroenteritis transmisible porcina, virus respiratorio porcino, coronavirus bovino, coronavirus humano OC43, virus de la hepatitis murina, virus de la encefalomielitis hemaglutilante porcina, coronavirus de rata, virus de la sialodacrioadenitis, virus de la bronquitis infecciosa aviar, coronavirus de pavo, coronavirus de conejo (también virus cuyos vectores normalmente son artrópodos), y Torovirus como torovirus equino, torovirus porcino, torovirus humano, y torovirus bovino.

Los virus propagados de manera ventajosa usando células de pulmón de la rata algodonera o las células o la línea celular según la descripción incluyen el virus de la parainfluenza canina (CPI), por ejemplo, CPI de tipo 2 (CPI-2), adenovirus, como adenovirus canino (CAV), por ejemplo, adenovirus canino de tipo 2 (CAV-2), adenovirus porcino (PAV), por ejemplo, adenovirus porcino de tipo 3 y tipo 5 (PAV-3), herpesvirus bovino, por ejemplo, herpesvirus bovino de tipo 1 (responsable de la rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR)), herpesvirus equino (EHV), por ejemplo, de tipo 1 (EHV-1) o de tipo 4 (EHV-4), rotavirus bovino (BRV), virus de la parainfluenza bovina de tipo 3 (PI3), coronavirus entérico y respiratorio bovino (BCV), y el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV).

De manera más ventajosa el virus es el virus del PRRS.

Y en formas de realización muy ventajosas, las células o la línea celular de pulmón de la rata algodonera es aquella que ha sido depositada en el ATCC como PTA-3930 o una célula o línea celular de pulmón de la rata algodonera que tiene todas las características identificativas de ATCC PTA-3930 o una célula o línea celular de pulmón de la rata algodonera producida cultivando células de pulmón de la rata algodonera hasta al menos 10, por ejemplo, hasta al menos 21 ó 76 ó 100 pasos tales como 10 o más o 21 o más o 76 o más pasos, por ejemplo, al menos 10 ó 21 ó 76 pasos y de manera ventajosa hasta (e incluyendo) 100 pasos, y estableciendo una línea celular de tal manera que las células de pulmón de la rata algodonera sean esencialmente células epiteliales y que las características morfológicas se mantengan a lo largo de los pasos.

Por consiguiente la descripción se refiere a dichas células o línea celular, así como todos sus usos.

Los virus propagados usando células de pulmón de la rata algodonera o células o la línea celular según la invención son útiles para la preparación de composiciones inmunógenas y vacunas contra enfermedades causadas por los virus, tales como el PRRSV. Asimismo, los organismos u otros patógenos propagados usando las células de pulmón de la rata algodonera o células o la línea celular según la invención son útiles para la preparación de composiciones inmunógenas y vacunas contra dichos otros patógenos u organismos.

Esta descripción también se refiere al uso del virus crecidos mediante el paso por células según la invención, por ejemplo, para proporcionar composiciones inmunógenas y vacunas atenuadas, inactivadas y subunitarias; y así, la descripción se refiere a dichas composiciones inmunógenas y vacunas atenuadas, inactivadas y subunitarias.

ANTECEDENTES

El síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS) fue descrito por primera vez en Carolina del Norte (EE.UU.) en 1987. Esta enfermedad porcina se definió en ese momento como "enfermedad porcina misteriosa" o MSD, y posteriormente fue conocida como "síndrome de infertilidad y respiratorio porcino" o SIRS. Apareció después en Europa central en 1990. Al principio, en Europa, la enfermedad se denominó "síndrome abortivo y respiratorio epidémico porcino" o PEARS, y finalmente, "síndrome reproductivo y respiratorio porcino" o PRRS que se convirtió en la denominación aceptada mundialmente.

El virus del PRRS es un virus de ARN con envuelta de cadena sencilla, aislado por primera vez en Holanda, y denominado virus de Lelystad. Se ha clasificado como un miembro de la familia Arteriviridae. Los virus de la familia Arteriviridae están dentro del orden Nidovirales. Otros virus del orden Nidovirales son los virus de la familia Coronaviridae, tales como los coronavirus y los torovirus.

El PRRS ha sido descrito en el documento WO92/21375. Un organismo aislado depositado en la Collection Nationale de Culture de Micro-organismes (CNCM) del Instituto Pasteur, París, Francia, bajo el número de acceso I-1102. También se aisló un tipo de Norteamérica (documento WO93/03760) y el virus fue depositado en la American Type Culture Collection (ATCC), bajo el número de acceso VR-2332.

En cerdas, la enfermedad del PRRS se caracteriza por trastornos reproductivos y síntomas respiratorios. Las células diana de los virus del PRRS son los macrófagos.

Uno de los problemas que ha impedido la obtención de productos inmunológicos contra el virus del PRRS es una disponibilidad limitada de sustratos estables para la replicación del virus.

El virus del PRRS sólo se podía amplificar en cultivos de macrófagos alveolares porcinos (PAM) (Wensvoort G., y col. en The Vet. Quart. 13:121-130, 1991). La necesidad de usar cerdos libres de enfermedad de cierta edad para la obtención de estos macrófagos implicaba varios inconvenientes. Además, la susceptibilidad a la infección vírica no estaba garantizada en los PAM recuperados, debido a que los sustratos celulares procedentes de diferentes animales son siempre variables. Esto planteaba un inconveniente mayor en la producción de lotes de antígenos de calidad constante y homogénea, y cada lote debía ser evaluado con el fin de determinar su susceptibilidad.

Se han realizado investigaciones para otros sustratos celulares. Así, en la patente de EE.UU. Nº 5.476.778, se sometieron a ensayo 15 líneas celulares obtenidas de diversas especies (por ejemplo, bovinas, caninas, felinas, humanas, porcinas, de simios) y de diversos tejidos (por ejemplo, riñón, pulmón, testículo) para el cultivo del virus del PRRS. Sólo un tipo (células MA-104) de las 15 líneas celulares permite el crecimiento del virus del PRRS.

Las líneas celulares de riñón de mono (por ejemplo, VERO, MA-104, MARC-145, véanse respectivamente la patente de EE.UU. Nº 5.476.778 y el documento WO98/00165) se usan para el cultivo y la atenuación del virus del PRRS. Pero los títulos del virus del PRRS en estas células son bajos y por tanto el coste de producción es elevado. Papp y col. 1997 (J General Virology 78: 2.933-2.943) describen un modelo animal para la infección por herpesvirus bovino de tipo 1 (BHV-1). Papp y col. indican que BHV-1 se puede replicar en células de pulmón de la rata algodonera (CRL) in vitro. El documento EP 0 676 467 describe cepas europeas del virus del PRRS, que están atenuadas. El documento EP 0 676 467 describe vacunas para la protección de los cerdos frente al PRRS. El documento EP 0 676 467 describe anticuerpos monoclonales que son reactivos con el PRRS y anticuerpos monoclonales que son no reactivos con las cepas atenuadas.

Aunque ahora hay disponibles comercialmente vacunas... [Seguir leyendo]

1. La línea celular de la rata algodonera depositada en la American Type Culture Collection con el número de acceso ATCC PTA-3930.

2. Un procedimiento para producir un virus que comprende la propagación del virus en células de pulmón de la rata algodonera, en la que el virus es el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) y en el que las células de pulmón de la rata algodonera son las células de la línea celular de la rata algodonera ATCC PTA3930.

3. El procedimiento según la reivindicación 2 en el que dicho procedimiento comprende adicionalmente la etapa de cosecha de los virus resultantes.

4. El procedimiento según la reivindicación 2 ó 3 en el que el virus PRRS está adaptado para crecer en las células de la rata algodonera por co-cultivo con células de riñón de mono.

5. El uso de células de pulmón de la rata algodonera para la propagación del virus de PRRS en el que las células de pulmón de la rata algodonera son las células de la línea celular de la rata algodonera ATCC PTA3930.

6. Un cultivo que comprende el PRRSV y células de pulmón de la rata algodonera en el que las células de pulmón de la rata algodonera son las células de la línea celular de la rata algodonera ATCC PTA-3930.

7. El cultivo según la reivindicación 6 en el que dicho cultivo está inactivado.

8. Un kit que comprende el PRRSV y células de pulmón de la rata algodonera en el que las células de pulmón de la rata algodonera son las células de la línea celular de la rata algodonera ATCC PTA-3930.

9. El kit según la reivindicación 8 en el que dichas células y el virus se encuentran en contenedores separados.

10. El kit según la reivindicación 8 ó 9 en el que los contenedores están separados en el mismo envase.

11. El procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, el uso según la reivindicación 5, el cultivo según la reivindicación 6 ó 7, o el kit según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 en el que dicho PRRSV es un virus atenuado.