Polipéptido de inmunoglobulina sustancialmente purificado o un fragmento que se une al antígeno del mismo,

que se une a una parte de B7-H3L que está expuesta en la superficie de una célula viva in vitro o in vivo, y puede interiorizarse en una célula cancerosa que expresa dicha parte expuesta de B7-H3L

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere al campo de la biología y la inmunoterapia. Más concretamente, se refiere 5 a una nueva enfermedad y al antígeno asociado al cáncer, RAAG10 (denominado de otro modo B7-H3L), y a una familia de anticuerpos monoclonales que se unen a RAAG10. La invención proporciona además el diagnóstico y/o tratamiento de varias enfermedades y cánceres humanos asociados a RAAG10 utilizando anticuerpos antifamilia RAAG10.

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ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Además de sus utilizaciones conocidos en el diagnóstico, los anticuerpos han demostrado ser útiles como agentes terapéuticos. Véase, por ejemplo, el documento WO 01/14577 que da a conocer anticuerpos contra B7-4, y Chapoval et al., Nature Immunlogy 2001; 2(3) 267-274 que da a conocer anticuerpos policlonales contra B7-H3 15 (forma 2Ig). Como otro ejemplo, la inmunoterapia, o la utilización de anticuerpos con fines terapéuticos se ha utilizado en los últimos años para tratar el cáncer. La inmunoterapia pasiva implica la utilización de anticuerpos monoclonales en tratamientos del cáncer. Véase, por ejemplo, Cancer: Principles and Practice of Oncology, 6ª edición (2001) Cap. 20 págs. 495-508. Estos anticuerpos pueden tener actividad terapéutica biológica inherente tanto por inhibición directa del crecimiento o la supervivencia de las células tumorales como por su capacidad para 20 recuperar la actividad natural de destrucción celular del sistema inmunitario del cuerpo. Estos agentes pueden ser administrados solos o junto con agentes de radiación o quimioterapéuticos. Rituximab y Trastuzumab, aprobados para el tratamiento del linfoma no hodgkiniano y el cáncer de mama, respectivamente, son dos ejemplos de dichos agentes terapéuticos. Alternativamente, los anticuerpos pueden utilizarse para preparar conjugados de anticuerpos en los que el anticuerpo se une a un agente tóxico y dirige el agente al tumor al unirse específicamente al 25 tumor. Gemtuzumab ozogamicina es un ejemplo de un conjugado de anticuerpos aprobado utilizado para el tratamiento de la leucemia. Los anticuerpos monoclonales que se unen a las células cancerosas y tienen potenciales utilizaciones para el diagnóstico y la terapia se han dado a conocer en las publicaciones. Véase, por ejemplo, las siguientes solicitudes de patente que dan a conocer, entre otras cosas, algunos pesos moleculares de proteínas diana: patente US nº 6.054.561 (200 kD c-erbB-2 (HER2), y otros antígenos desconocidos de 40 a 200 30 KD de tamaño) y la patente US nº 5.656.444 (50 kD y 55 kD, proteína oncofetal). Los ejemplos de anticuerpos en ensayos clínicos y/o aprobados para el tratamiento de tumores sólidos son: Trastuzumab (antígeno: 180 kD, HER2/neu), Edrecolomab (antígeno: 40-50 kD, Ep-CAM), glóbulos de la grasa de la leche contra la grasa humana (HMFG1) (antígeno> 200 kD, HMW Mucina), Cetuximab (antígenos: 150 kD y 170 kD, receptor de EGF), Alemtuzumab (antígeno: 21-28 kD, CD52), y Rituximab ( antígeno: 35 kD, CD20). 35

Las dianas de antígeno de trastuzumab (receptor HER-2), que se utiliza para tratar el cáncer de mama, y cetuximab (receptor de EGF), que se encuentra en ensayos clínicos para el tratamiento de varios tipos de cáncer, están presentes en algún nivel detectable en un gran número de tejidos humanos adultos normales, incluyendo la piel, colon, pulmón, ovario, hígado y páncreas. El margen de seguridad en la utilización de estas terapias es, posiblemente, proporcionado por la diferencia en el nivel de expresión o en el acceso o de la actividad de los 40 anticuerpos en estos sitios.

Otro tipo de inmunoterapia es la inmunoterapia activa, o vacunación, con un antígeno presente en un cáncer o cánceres específicos o un montaje de ADN que dirige la expresión del antígeno, que provoca entonces la respuesta inmunitaria en el sujeto, es decir, inducir al sujeto a producir anticuerpos activamente contra su propio 45 cáncer. La inmunización activa no se ha utilizado tan a menudo como la inmunoterapia pasiva o las nmunotoxinas.

Se han sugerido varios modelos de la enfermedad (incluyendo el cáncer). Las teorías comprenden desde la etiología por un episodio infeccioso/transformador concreto a la evolución de un tipo de tejido cada vez más "enfermizo" o “canceroide” que conduce en última instancia a uno con capacidad totalmente patógena o 50 maligna. Algunos sostienen que con el cáncer, por ejemplo, un único episodio de mutación es suficiente para producir cáncer, mientras que otros sostienen que las alteraciones posteriores son también necesarias. Otros han sugerido que el aumento de carga de mutación y el grado tumoral son necesarios tanto para el inicio como para la evolución de la neoplasia a través de un continua sucesión de episodios de mutación-selección a nivel celular. Algunas dianas del cáncer se encuentran solamente en los tejidos tumorales, mientras que otras están 55 presentes en tejidos normales y están aumentadas y/o sobreexpresadas en los tejidos tumorales. En tales situaciones, algunos investigadores han sugerido que la sobreexpresión está vinculada a la adquisición del cáncer, mientras que otros sugieren que la sobreexpresión no es más que un indicador de una tendencia a lo largo de una ruta a una enfermedad en aumento.

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Resultan necesarias nuevas dianas en la superficie de las células enfermas y/o cancerosas que se pueden utilizar para tratar dichas enfermedades y/o tipos de cáncer con anticuerpos y otros agentes que reconocen específicamente las dianas de la superficie celular. Resultan todavía más necesarios, sobre la base de los descubrimientos dados a conocer en la presente memoria, nuevos anticuerpos y otros agentes que reconocen específicamente las dianas en la superficie de las células que pueden modular, ya sea por disminución o aumento, 65 las actividades de RAAG10 que favorecen la enfermedad.

Como se describe con mayor detalle a continuación, se ha descubierto un nuevo antígeno, al que se hace referencia en la presente memoria como RAAG10 y a veces B7-H3L, identificado como la diana de antígeno de los nuevos anticuerpos proporcionados en la presente memoria. Se conocen polipéptidos similares. Véase, por ejemplo, Sun et al., J. Immunol. 2002, 168: 6294-6297, que describe la identificación de un homólogo B7-H3 de 5 ratón, y caracteriza el gen B7-H3 humano como se muestra para mediar la proliferación de linfocitos T y la producción de IFN-gamma.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

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La invención describe anticuerpos monoclonales que se unen a RAAG10 (B7-H3L), que se expresa en varios cánceres humanos. En un aspecto, la invención proporciona un polipéptido de inmunoglobulina sustancialmente purificado o un fragmento del mismo que se une al antígeno, que se une a un fragmento de B7-H3L que está expuesto en la superficie de una célula viva in vitro o in vivo, y puede interiorizarse para administrar un agente terapéutico o un marcador detectable en una célula cancerosa que expresa dicha fracción expuesta de 15 B7-H3L. La invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina o el fragmento que se une al antígeno de la invención, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una forma de realización, la célula cancerosa es una célula cancerosa de tumor de las glándulas 20 suprarrenales, de cáncer asociado al SIDA, de sarcoma alveolar de partes blandas, de tumor astrocítico, de cáncer de vejiga, de cáncer de huesos, de cáncer cerebral y médula espinal, de tumor cerebral metastásico, de cáncer de mama, de tumor del cuerpo carotídeo, de cáncer de cuello de útero, de condrosarcoma, de cordoma, de carcinoma renal de células cromófobas, de carcinoma de células claras, de cáncer de colon, de cáncer colorrectal, de histiocitoma fibroso cutáneo benigno, de tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, de ependimoma, de 25 tumor de Ewing, de condrosarcoma mixoide extraesquelético, de fibrogénesis imperfecta ossium, de displasia fibrosa del hueso, de vesícula biliar y de cáncer del conducto biliar, de enfermedad de gestación trofoblástica, de tumores de células germinales, de cáncer de cabeza y cuello, de insulinomas, de Sarcoma de Kaposi, de cáncer renal, de leucemia, de lipoma o tumor benigno lipomatoso, de liposarcoma o tumor maligno lipomatoso, de cáncer de hígado, de linfoma, de cáncer pulmonar, de meduloblastoma,... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido de inmunoglobulina sustancialmente purificado o un fragmento que se une al antígeno del mismo, que se une a una parte de B7-H3L que está expuesta en la superficie de una célula viva in vitro o in vivo, y puede interiorizarse en una célula cancerosa que expresa dicha parte expuesta de B7-H3L.

2. Polipéptido de inmunoglobulina purificado o fragmento que se une al antígeno según la reivindicación 5 1, en el que dicha célula cancerosa se selecciona de entre un tumor de las glándulas suprarrenales, un cáncer asociado al SIDA, un sarcoma alveolar de partes blandas, un tumor astrocítico, un cáncer de vejiga, un cáncer de huesos, un cáncer cerebral y médula espinal, un tumor cerebral metastásico, un cáncer de mama, un tumor del cuerpo carotídeo, un cáncer de cuello de útero, un condrosarcoma, un cordoma, un carcinoma renal de células cromófobas, un carcinoma de células claras, un cáncer de colon, un cáncer colorrectal, un histiocitoma fibroso 10 cutáneo benigno, un tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, un ependimoma, un tumor de Ewing, un condrosarcoma mixoide extraesquelético, una fibrogénesis imperfecta ossium, una displasia fibrosa del hueso, un cáncer del conducto biliar y de vesícula biliar, una enfermedad de gestación trofoblástica, un tumor de células germinales, un cáncer de cabeza y cuello, un insulinoma, un Sarcoma de Kaposi, un cáncer renal, una leucemia, un tumor benigno lipomatoso/lipoma, un tumor maligno lipomatoso/liposarcoma, un cáncer de hígado, un linfoma, un 15 cáncer pulmonar, un meduloblastoma, un melanoma, un meningioma, una neoplasia endocrina múltiple, un mieloma múltiple, un síndrome mielodisplásico, un neuroblastoma, un tumor neuroendocrino, un cáncer de ovario, un cáncer pancreático, un carcinoma papilar de tiroides, un tumor paratiroideo, un cáncer pediátrico, un tumor de la vaina del nervio periférico, un feocromocitoma, un tumor de la hipófisis, un cáncer de próstata, un melanoma uveal posterior, un trastorno hematológico raro, un cáncer renal metastásico, un tumor rabdoide, un rabdomiosarcoma, un 20 sarcoma, un cáncer de piel, un sarcoma de tejido blando, un cáncer epidermoide, un cáncer de estómago, un sarcoma sinovial, un cáncer testicular, un carcinoma tímico, un timoma, un cáncer metastásico del tiroides y un cáncer de útero.

3. Secuencia de ácido nucleico aislada que codifica el polipéptido de inmunoglobina o un fragmento que se une al antígeno del mismo expresado por una estirpe celular, en la que la estirpe celular es un hibridoma 25 seleccionado de entre ATCC nº PTA-4217, ATCC nº PTA-4218, ATCC nº PTA-4244 y ATCC nº PTA-4245.

4. Ácido nucleico según la reivindicación 3, en el que el ácido nucleico está unido funcionalmente a un activador.

5. Ácido nucleico según la reivindicación 4, en el que el ácido nucleico está contenido en un vector de expresión. 30

6. Estirpe celular transfectada, transformada o infectada con un vector que contiene un ácido nucleico según la reivindicación 3 ó 4.

7. Procedimiento para producir un polipéptido de inmunoglobulina sustancialmente purificado o un fragmento que se une al antígeno del mismo, que comprende:

(a) cultivar una estirpe celular transformada con el ácido nucleico según cualquiera de las 35 reivindicaciones 3 a 5 en condiciones en las que se expresa el polipéptido de inmunoglobulina o el fragmento que se une al antígeno; y

(b) recolectar el polipéptido de inmunoglobulina o el fragmento expresado.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, en el que la estirpe celular es un hibridoma.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que el hibridoma se selecciona de entre el grupo 40 constituido por ATCC nº PTA-4217, ATCC nº PTA-4218, ATCC nº PTA-4244 y ATCC nº PTA-4245.

10. Composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de la inmunoglobulina purificada o el fragmento que se une al antígeno según la reivindicación 1 ó 2, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo 45 monoclonal o de un fragmento que se une al antígeno del mismo que se une a una parte de B7-H3L que está expuesta en la superficie de una célula viva in vitro o in vivo; y puede interiorizarse dentro de una célula cancerosa que expresa dicha parte expuesta de B7-H3L; junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Composición farmacéutica según la reivindicación 11, en la que la composición comprende un resto terapéutico adicional. 50

13. Estirpe celular aislada seleccionada de entre ATCC nº PTA-4217, ATCC nº PTA-4218, ATCC nº PTA-4244 y ATCC nº PTA-4245 o su descendencia.

14. Procedimiento para suministrar un agente quimioterapéutico a una célula cancerosa in vitro que comprende administrar a dichas células una composición que comprende un anticuerpo anti-B7-H3L asociado al agente quimioterapéutico, en el que dicha célula cancerosa expresa B7-H3L, y una parte de dicho B7-H3L está expuesta sobre la superficie de dicha célula;

dicho anticuerpo anti-BH-3L se une a dicha parte de B7-H3L que está expuesta sobre la superficie de 5 dicha célula y puede interiorizarse en dicha célula cancerosa; y

dicha célula cancerosa es una célula cancerosa de un tumor de las glándulas suprarrenales, un cáncer asociado al SIDA, un sarcoma alveolar de partes blandas, un tumor astrocítico, un cáncer de vejiga, un cáncer de huesos, un cáncer cerebral y médula espinal, un tumor cerebral metastásico, un cáncer de mama, un tumor del cuerpo carotídeo, un cáncer de cuello de útero, un condrosarcoma, un cordoma, un carcinoma renal de células 10 cromófobas, un carcinoma de células claras, un cáncer de colon, un cáncer colorrectal, un histiocitoma fibroso cutáneo benigno, un tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, un ependimoma, un tumor de Ewing, un condrosarcoma mixoide extraesquelético, un fibrogénesis imperfecta ossium, una displasia fibrosa del hueso, un cáncer del conducto biliar y vesícula biliar, una enfermedad de gestación trofoblástica, un tumor de células germinales, un cáncer de cabeza y cuello, un insulinoma, un Sarcoma de Kaposi, un cáncer renal, un leucemia, un 15 tumor benigno lipomatoso/lipoma, un tumor maligno lipomatoso/liposarcoma, un cáncer de hígado, un linfoma, un cáncer pulmonar, un meduloblastoma, un melanoma, un meningioma, una neoplasia endocrina múltiple, un mieloma múltiple, un síndrome mielodisplásico, un neuroblastoma, un tumor neuroendocrino, un cáncer de ovario, un cáncer pancreático, un carcinoma papilar de tiroides, un tumor paratiroideo, un cáncer pediátrico, un tumor de la vaina del nervio periférico, un feocromocitoma, un tumor de la hipófisis, un cáncer de próstata, un melanoma uveal 20 posterior, unl trastorno hematológico raro, un cáncer renal metastásico, un tumor rabdoide, un rabdomiosarcoma, un sarcoma, un cáncer de piel, un sarcoma de tejido blando, un cáncer epidermoide, un cáncer de estómago, un sarcoma sinovial, un cáncer testicular, un carcinoma tímico o, un timoma, un cáncer metastásico del tiroides y un cáncer de útero.

15. Procedimiento según la reivindicación 14, en el que el anticuerpo anti-B7-H3L procede de un 25 hibridoma seleccionado de entre ATCC nº PTA-4217, ATCC nº PTA-4218, ATCC nº PTA-4244 y ATCC nº PTA-4245 o su descendencia.

16. Anticuerpo anti-B7-H3L asociado al agente quimioterapéutico, para inhibir el crecimiento de las células cancerosas en un sujeto, en el que

dicha célula cancerosa expresa B7-H3L, y una parte de dicho B7-H3L está expuesta sobre la superficie de 30 dicha célula;

dicho anticuerpo anti-BH-3L se une a dicha parte de B7-H3L que está expuesta sobre la superficie de dicha célula y puede interiorizarse en célula cancerosa; y

dicha célula cancerosa es una célula cancerosa de entre un tumor de las glándulas suprarrenales, un cáncer asociado al SIDA, un sarcoma alveolar de partes blandas, un tumor astrocítico, un cáncer de vejiga, un 35 cáncer óseo, un cáncer cerebral y de médula espinal, un tumor cerebral metastásico, un cáncer de mama, un tumor del cuerpo carotídeo, un cáncer de cuello uterino, un condrosarcoma, un cordoma, un carcinoma renal de células cromófobas, un carcinoma de células claras, un cáncer de colon, un cáncer colorrectal, un histiocitoma fibroso cutáneo benigno, un tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, un ependimoma, un tumor de Ewing, un condrosarcoma mixoide extraesquelético, un fibrogénesis imperfecta ossium, una displasia fibrosa del hueso, un 40 cáncer del conducto biliar y de vesícula biliar, una enfermedad de gestación trofoblástica, un tumor de células germinales, un cáncer de cabeza y cuello, un insulinoma, un Sarcoma de Kaposi, un cáncer renal, una leucemia, un tumor benigno lipomatoso/lipoma, un tumor maligno lipomatoso/liposarcoma, un cáncer de hígado, un linfoma, un cáncer pulmonar, un meduloblastoma, un melanoma, un meningioma, un neoplasia endocrina múltiple, un mieloma múltiple, un síndrome mielodisplásico, un neuroblastoma, un tumor neuroendocrino, un cáncer de ovario, un cáncer 45 pancreático, un carcinoma papilar de tiroides, un tumor paratiroideo, un cáncer pediátrico, un tumor de la vaina del nervio periférico, un feocromocitoma, un tumor de la hipófisis, un cáncer de próstata, un melanoma uveal posterior, un trastorno hematológico raro, un cáncer renal metastásico, un tumor rabdoide, un rabdomiosarcoma, un sarcoma, un cáncer de piel, un sarcoma de tejido blando, un cáncer epidermoide, un cáncer de estómago, un sarcoma sinovial, un cáncer testicular, un carcinoma tímico o, un timoma, un cáncer metastásico del tiroides y un cáncer de 50 útero.

17. Anticuerpo anti-B7-H3L según la reivindicación 16, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal expresado por la estirpe celular en el que la estirpe celular es un hibridoma seleccionado de entre ATCC nº PTA-4217, ATCC nº PTA-4218, ATCC nº PTA-4244 y ATCC nº PTA-4245 o su descendencia.

18. Procedimiento para detectar la presencia o ausencia de una célula cancerosa en un sujeto que 55 comprende poner en contacto las células del sujeto con un anticuerpo anti-B7-H3L in vitro y detectar un complejo de B7-H3L de las células y el anticuerpo, si existe, en el que

dicha célula cancerosa expresa B7-H3L, y una parte de B7-H3L que está expuesta sobre la superficie de dicha célula y puede interiorizarse en dicha célula;

dicho anticuerpo anti-BH-3L se une a dicha parte de B7-H3L que está expuesta sobre la superficie de dicha célula y puede interiorizarse en dicha célula cancerosa; y

dicha célula cancerosa es una célula cancerosa de tumor de las glándulas suprarrenales, un cáncer 5 asociado al SIDA, un sarcoma alveolar de partes blandas, un tumor astrocítico, un cáncer de vejiga, un cáncer óseo, un cáncer cerebral y médula espinal, un tumor cerebral metastásico, un cáncer de mama, un tumor del cuerpo carotídeo, un cáncer de cuello de útero, un condrosarcoma, un cordoma, un carcinoma renal de células cromófobas, un carcinoma de células claras, un cáncer de colon, un cáncer colorrectal, un histiocitoma fibroso cutáneo benigno, un tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, un ependimoma, un tumor de Ewing, un 10 condrosarcoma mixoide extraesquelético, un fibrogénesis imperfecta ossium, un displasia fibrosa del hueso, un cáncer del conducto biliar y de vesícula biliar, una enfermedad de gestación trofoblástica, un tumores de células germinales, un cáncer de cabeza y cuello, un insulinoma, un Sarcoma de Kaposi, un cáncer renal, un leucemia, un tumor benigno lipomatoso/lipoma, un tumor maligno lipomatoso/liposarcoma, un cáncer de hígado, un linfoma, un cáncer pulmonar, un meduloblastoma, un melanoma, un meningioma, un neoplasia endocrina múltiple, un mieloma 15 múltiple, un síndrome mielodisplásico, un neuroblastoma, un tumor neuroendocrino, un cáncer de ovario, un cáncer pancreático, un carcinoma papilar de tiroides, un tumor paratiroideo, un cáncer pediátrico, un tumor de la vaina del nervio periférico, un feocromocitoma, un tumor de la hipófisis, un cáncer de próstata, un melanoma uveal posterior, unl trastorno hematológico raro, un cáncer renal metastásico, un tumor rabdoide, un rabdomiosarcoma, un sarcoma, un cáncer de piel, un sarcoma de tejido blando, un cáncer epidermoide, un cáncer de estómago, un 20 sarcoma sinovial, un cáncer testicular, un carcinoma tímico o, un timoma, un cáncer metastásico del tiroides y un cáncer de útero.