Un ácido nucleico aislado, el cual codifica un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos la cual es al menos 90% idéntica a SEQ ID NO:

14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38

Antecedentes de la invención

Las células nucleadas son muy sensibles a la hipoxia e incluso cortos períodos de isquemia en organismos multicelulares pueden tener drásticos efectos sobre la morfología celular, la transcripción de los genes y los procesos enzimáticos. Las mitocondrias, como lugares principales del metabolismo con oxígeno, son particularmente sensibles a cambios en las concentraciones de oxígeno y durante la hipoxia liberan especies reactivas con el oxígeno que modifican químicamente los constituyentes celulares tales como los lípidos y las proteínas. Clínicamente, estos efectos se manifiestan en el paciente como una respuesta inflamatoria. A pesar de las intensas investigaciones sobre las respuestas celulares a la hipoxia, poco se sabe con respecto al inicio de la inflamación aguda.

Las respuestas inflamatorias agudas pueden proceder de una amplia gama de enfermedades y sucesos que se producen de manera natural tales como la apoplejía y el infarto de miocardio. Los procedimientos médicos comunes también pueden conducir a una inflamación localizada y sistémica. La inflamación que se deja sin tratar puede dar lugar a una pérdida significativa de tejido y finalmente puede conducir a un fallo multisistémico y a la muerte. Interferir con la respuesta inflamatoria después de una lesión puede ser un método para reducir la pérdida de tejido.

Las enfermedades inflamatorias y las enfermedades inflamatorias agudas que proceden de lesiones en los tejidos no pueden, sin embargo, ser explicadas por sucesos celulares solitarios. La evidencia acumulada soporta que la respuesta innata del suero o la del sistema del complemento tienen un papel principal en la inflamación. Los estudios realizados hasta la fecha han mirado la lesión resultante de la isquemia y la reperfusión como un tipo de trastorno inflamatorio que depende del complemento. Por ejemplo, en el modelo de lesión por reperfusión del miocardio en ratas, el pretratamiento de las ratas con una forma soluble del receptor tipo 1 del complemento reduce drásticamente la lesión. Comprender cómo la activación del complemento contribuye a una respuesta inflamatoria es un área de investigación activa.

Las enfermedades o trastornos inflamatorios son potencialmente una amenaza para la vida, costosos y afectan a un gran número de gente cada año. Así, se necesitan tratamientos efectivos de las enfermedades o trastornos inflamatorios.

Sumario de la invención

En un aspecto, la presente invención proporciona un ácido nucleico aislado que codifica un péptido el cual consiste en una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

El ácido nucleico aislado puede codificar un péptido el cual consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38, y puede tener la secuencia de SEQ ID NO: 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35 ó 37.

El ácido nucleico aislado de la invención puede estar operablemente conectado a un promotor.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada seleccionada del grupo que consiste en:

a) Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos la cual es al menos 96% idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, o SEQ ID NO: 11;

b) Una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, o SEQ ID NO: 11;

c) Una molécula de ácido nucleico que se hibrida con el complemento de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 ó SEQ ID NO: 7 en condiciones rigurosas;

d) Una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 ó SEQ ID NO: 12.

La invención también proporciona un vector que comprende el ácido nucleico de la invención, así como una célula huésped aislada que comprende tal vector.

También se proporciona una composición que comprende un péptido el cual consiste en una secuencia de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38. El péptido puede consistir en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

En la composición de la invención, el péptido puede estar pegilado o marcado con un marcador detectable.

La invención también proporciona una composición de la invención o que comprende un péptido el cual tiene la secuencia de aminoácidos que de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38, para tratar una enfermedad o trastorno inflamatorio en un sujeto.

La enfermedad o trastorno inflamatorio puede ser una lesión por reperfusión, y el sujeto puede ser un mamífero, tal como un ser humano.

También se proporciona el uso de una composición de la invención en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad o trastorno inflamatorio en un sujeto.

La invención también proporciona un polipéptido asilado que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 ó SEQ ID NO: 12, así como una inmunoglobulina natural aislada la cual es producida por una célula que tiene el número de depósito ATCC PTA-3507.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes sobre la base de la siguiente “Descripción detallada” y de las “Reivindicaciones”.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra una secuencia de las cadenas pesadas de IgM del hibridoma 22A5 de células B-1. (A) Muestra la secuencia (SEQ ID NO: 1) de ácido nucleico de las cadenas pesadas de IgMCM-22 (o IgM 22A5) y (B) muestra la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 2) que corresponde a la secuencia de SEQ ID NO: 1 de las cadenas pesadas. Las regiones marco (FVWR) y las regiones que determinan la complementariedad (CDR) están indicadas por encima de los nucleótidos.

La figura 2 muestra una secuencia de las cadenas ligeras de IgM del hibridoma 22A5 de células B-1. (A) Muestra la secuencia (SEQ ID NO: 7) de ácido nucleico de las cadenas ligeras de IgMCM-22 (o IgM 22A5) y (B) muestra la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 8) que corresponde a la secuencia de SEQ ID NO: 7 de las cadenas ligeras. Las regiones marco (FVWR) y las regiones que determinan la complementariedad (CDR) están indicadas por encima de los nucleótidos.

La figura 3 es un gráfico de barras que muestra los cambios en la permeabilidad intestinal de ratones consanguíneos después de la isquemia intestinal y de la reperfusión o de ninguna lesión (falso, simulado). WT representa el linaje parental de ratones Cr2-/-. Cr2-/- fue reconstituido con IgG o IgM o disolución salina testigo combinadas. IgM o IgG (0,5 mg) combinadas se administraron intravenosamente aproximadamente 1 hora antes del tratamiento. Los valores son medias  error estándar, n es igual al número de ratones en los grupos experimentales.

La figura 4 demuestra la reconstitución de lesión I/R en ratones deficientes en anticuerpos (RAG-1) mediante IgM combinada A partir de un único clon de hibridoma de células B-1. Se inyectó intravenosamente IgM o disolución salina 30 minutos antes de la laparotomía inicial. Al final de la reperfusión, se obtiene sangre y se calcula el índice de permeabilidad como la relación de cuentas de 125I del intestino seco frente a las de la sangre. Los valores representan medias  error estándar, n es igual al número de ratones usados en los grupos experimentales. 1 = WT más disolución salina normal; 2 = RAG más disolución salina normal; 3 = RAG más hibridoma CM-22 IgM; 4 = Testigo WT simulado.

La figura 5 es un diagrama esquemático del papel propuesto para el complemento y los receptores del complemento en la selección positiva de linfocitos peritoneales B-1.

La figura 6A es un gráfico que muestra la selección ELISA de la biblioteca que muestra el fago M-13 para péptidos específicos de IgMCM-22. Símbolos: - clon P-1; X - clon P2;  - clon P7;  - clon P8.

La placa se revistió con una disolución de IgMCM-22 antes de la adición de concentraciones variables de clones de fago. Los resultados son representativos de al menos tres experimentos independientes.... [Seguir leyendo]

1. Un ácido nucleico aislado, el cual codifica un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos la cual es al menos 90% idéntica a SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

2. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 1, el cual codifica un péptido el cual consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

3. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 2, en la que el ácido nucleico es SEQ ID NO: 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 35 ó 37.

4. El ácido nucleico aislado según cualquier reivindicación precedente operablemente conectado a un promotor.

5. Una molécula de ácido nucleico aislada, seleccionada del grupo que consiste en:

a) Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos la cual es al menos 96% idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, o SEQ ID NO: 11;

b) Una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, o SEQ ID NO: 11;

c) Una molécula de ácido nucleico que se hibrida con el complemento de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 ó SEQ ID NO: 7 en condiciones rigurosas;

d) Una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 ó SEQ ID NO: 12.

6. Un vector, que comprende el ácido nucleico de cualquier reivindicación precedente.

7. Una célula huésped aislada, que comprende el vector según la reivindicación 6.

8. Una composición que comprende un péptido, el cual consiste en una secuencia de aminoácidos la cual es al menos 90% idéntica a SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

9. La composición según la reivindicación 8, en la que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38.

10. La composición según la reivindicación 8 ó 9, en la que el péptido está pegilado.

11. La composición según la reivindicación 8 ó 9, en la que el péptido está marcado con un marcador detectable.

12. La composición (a) que comprende un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36 ó 38, o (b) según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 para tratar una enfermedad

o trastorno inflamatorio en un sujeto.

13. La composición según la reivindicación 12, en la que la enfermedad o trastorno inflamatorio es una lesión por reperfusión.

14. La composición según la reivindicación 12 ó 13, en la que el sujeto es un mamífero.

15. La composición según la reivindicación 14, en la que el mamífero es un ser humano.

16. El uso de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 15, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad o trastorno inflamatorio en un sujeto.

17. Un polipéptido aislado, que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, o SEQ ID NO: 12.

18. Una inmunoglobulina natural aislada, la cual es producida por una célula que tiene el número de depósito ATCC PTA-3507.