ANTICUERPO PARA EL RECEPTOR DE TIROTROPINA Y USOS DEL MISMO.

Anticuerpo para el receptor de tirotropina y usos del mismo La presente invención se refiere a copartícipes de unión (tales como anticuerpos monoclonales o recombinantes) para el receptor de tirotropina (receptor de TSH o TSHR) y a usos de las mismas. La tirotropina u hormona estimulante del tiroides (TSH) es una hormona pituitaria que desempeña un papel clave en la regulación de la función del tiroides. Su liberación está estimulada por la hormona TRH formada en el hipotálamo y la TSH controla la formación y liberación de las importantes hormonas tiroideas tiroxina (T4) y triyodotironina (T3). Basándose en un mecanismo de realimentación, el contenido de hormona tiroidea del suero controla la liberación de TSH. La formación de T3 y T4 por las células tiroideas se estimula por la TSH mediante un procedimiento en que la TSH liberada por la pituitaria se une al receptor de TSH de la membrana celular tiroidea. En la enfermedad de Graves (un trastorno autoinmunitario común), se forman anticuerpos de receptor de TSH (TRAb) y estos autoanticuerpos se unen al receptor de TSH de tal modo que imitan las acciones de la TSH, estimulando la glándula tiroidea a producir altos niveles de hormonas tiroideas. Se describe que estos autoanticuerpos tienen actividad estimulante. En algunos pacientes, los autoanticuerpos se unen al receptor de TSH pero no estimulan la producción de hormona tiroidea, y se describe que tienen actividad bloqueante (J Sanders, Y Oda, S-A Roberts, M Maruyama, J Furmaniak, B Rees Smith; "Understanding the thyrotrophin receptor functionstructure relationship" Balliere's Clinical Endocrinology and Metabolism; Ed TF Davies 1997; 11(3): 451-479; pub Balliere Tindall, Londres). Las medidas de anticuerpos de receptor de TSH son importantes en el diagnóstico y gestión de la enfermedad de Graves y otros trastornos tiroideos. Actualmente, se usan tres tipos de ensayo para medir los anticuerpos de receptor de TSH: (a) ensayos de unión competitiva que miden la capacidad de los anticuerpos de receptor de TSH de inhibir la unión de TSH a preparaciones de receptor de TSH; (b) bioensayos que miden la capacidad de los anticuerpos de receptor de TSH de estimular células que expresan el receptor de TSH en cultivo; y (c) inmunoprecipitación de preparaciones de receptor de TSH con anticuerpos de receptor de TSH. La medida de los anticuerpos de receptor de TSH usando dichos ensayos se describe en las referencias: J Sanders, Y Oda, S-A Roberts, M Maruyama, J Furmaniak, B Rees Smith; "Understanding the thyrotrophin receptor function-structure relationship" Balliere's Clinical Endocrinology and Metabolism; Ed. TF Davies 1997; 11(3): 451- 479; pub Balliere Tindall, Londres. J Sanders, Y Oda, S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton, V McGrath, S Walters, D Jaskoski, J Furmaniak, B Rees Smith; "The interaction of TSH receptor autoantibodies with 125 I-labelled TSH receptor"; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1999; 84(10): 3797-3802. Se ha reconocido durante muchos años que los anticuerpos monoclonales humanos del receptor de TSH derivados de linfocitos de pacientes serían reactivos valiosos para comprender la patogénesis de la enfermedad de Graves y para desarrollar nuevos métodos de medida de anticuerpos de receptor de TSH, por ejemplo, como sustitutos de TSH en ensayos de unión competitiva. También, como los anticuerpos de receptor de TSH de suero de paciente son habitualmente potentes estimulantes tiroideos (agonistas de TSH), estimular los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH sería valioso para aplicaciones in vivo cuando el tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiera estimulación. Además, como algunos anticuerpos de receptor de TSH de suero de pacientes son potentes antagonistas de TSH (anticuerpos bloqueantes), los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH que son antagonistas de TSH serían valiosos para aplicaciones in vivo cuando la actividad del tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiera inactivación o volverse insensible a TSH, anticuerpos de receptor de TSH u otros estimulantes. Se ha reconocido también que una de las ventajas principales de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH frente a la TSH en dichas aplicaciones in vitro y/o in vivo sería la facilidad relativa con que pueden manipularse dichos anticuerpos. Por ejemplo, la manipulación de la región de unión a receptor de TSH de los anticuerpos monoclonales para cambiar sus características, tales como afinidad y características biológicas que incluyen su grado de actividades agonista o antagonista de TSH. También los anticuerpos monoclonales tendrán una semivida mucho más larga que la TSH in vivo, y esto puede tener ventajas considerables en ciertas aplicaciones in vivo. Además, la semivida de los anticuerpos puede manipularse fácilmente, por ejemplo, los fragmentos Fab de anticuerpo tienen una semivida mucho más corta que la IgG intacta. Estas propiedades generales de los anticuerpos de receptor de TSH se describen en publicaciones tales como B Rees Smith, S M McLachlan, J Furmaniak; Autoantibodies to the thyrotropin receptor; Endocrine Reviews 1988; 9: 106-121; B Rees Smith, K J Dorrington, D S 2   Munro; The thyroid stimulating properties of long-acting thyroid stimulator G-globulin subunits; Biochimica et Biophysica Acta 1969; 192: 277-285; K J Dorrington, D S Munro; The long acting thyroid stimulator; Clinical Pharmacology and Therapeutics 1966; 7: 788-806. Una ventaja adicional más de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH podría ser su uso para identificar y proporcionar nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH. Por ejemplo, mediante la generación de anticuerpos de las regiones de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH que se unen al receptor de TSH. Algunos de los anticuerpos antiidiotípicos producidos de este modo podrían tener potencial como nuevos ligandos para ensayos de anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. También pueden ser agentes eficaces in vivo para regular la acción de los anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Son bien conocidos otros métodos de identificación y provisión de nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo usando anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, mediante el cribado con anticuerpos de colecciones peptídicas aleatorias expuestas en fago como se describe en JC Scott y GP Smith; Searching for peptide ligands with an epitope library; Science 1990; 249(4967): 386-390 y MA Myers, JM Davies, JC Tong, J Whisstock, M Scealy, IR MacKay, MJ Rowley; Conformational epitopes on the diabetes autoantigen GAD65 identified by peptide phage display and molecular modelling; Journal of Immunology 2000; 165: 3830-3838. Puede llevarse también a cabo el cribado con anticuerpos de compuestos no peptídicos y colecciones de compuestos no peptídicos. Pueden ser también útiles nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH, identificados y proporcionados usando estos procedimientos, como nuevos ligandos en ensayos de anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Además, pueden ser agentes eficaces in vivo para regular la acción de los anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. A la vista del valor potencial de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH, se han realizado considerables esfuerzos durante muchos años por producir dichos anticuerpos (véanse, por ejemplo, B Rees Smith, SM McLachlan, J Furmaniak; Autoantibodies to the thyrotropin receptor; Endocrine Reviews 1988; 9: 106-121. Sin embargo, hasta la fecha estos esfuerzos han sido inútiles (véanse, por ejemplo, SM McLachlan, B Rapoport; Monoclonal, human autoantibodies to the TSH receptor--The Holy Grail and why are we looking for it; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1996; 81: 3152-3154 y JHW van der Heijden, TWA de Bruin, KAFM Gludemans, J de Kruif, JP Banga, T Logtenberg; Limitations of the semisynthetic library approach for obtaining human monoclonal autoantibodies to the thyrotropin receptor of Graves' disease; Clinical and Experimental Immunology 1999; 118: 205-212). Kohn et al. describen la caracterización de autoanticuerpos monoclonales estimulantes de tiroides e inhibidores de la unión a tirotropina a partir de un paciente con la enfermedad de Hashimoto cuyos hijos tenían enfermedad tiroidea intrauterina y neonatal en Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 1997, vol. 82, nº 12, páginas 3998-4009. Akamizu et al. describen la caracterización de anticuerpos monoclonales recombinantes anti-receptor de tirotropina (TSHRAb) derivados de linfocitos de pacientes con la enfermedad de Graves: Epitope and binding study of two stimulatory TSHRAb en... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano del receptor de TSH, o uno o más fragmentos del mismo, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 2. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 1, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 3. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 2, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 4. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 5. Anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 6. Anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 7. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que (i) la actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, es de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente porque (ii) la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula es de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 8. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 7, en el que (i) la actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, es de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente porque (ii) la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula es de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 9. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 7, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y 66   (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 10. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH que comprende un dominio VH de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO 1 y un dominio VH que comprende las regiones CDR1 de VH, CDRII de VH y CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente, y un dominio VL seleccionado del grupo consistente en un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO 6 y un dominio VL que comprende las regiones CDRI de VL, CDRII de VL y CDRIII de VL de secuencias aminoacídicas como se muestran en las SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8 y SEQ ID NO 9, respectivamente. 11. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 1. 12. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo que comprende las regiones CDRI de VH, CDRII de VH y CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente. 13. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 1 emparejado con un dominio VL de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 6, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos de dichos dominios VH y VL del receptor de TSH. 14. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende: un dominio VH de anticuerpo que comprende: un dominio VH que comprende las regiones CDRI de VH, CDRII de VH, CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente, y un dominio VL de anticuerpo que comprende: un dominio VL que comprende las regiones CDRI de VL, CDRII de VL, CDRIII de VL de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8 y SEQ ID NO 9, respectivamente. 15. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo capaz de unirse al receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un anticuerpo monoclonal humano o anticuerpo recombinante humano del receptor de TSH o un fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos de receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 16. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15 que comprende un sitio de unión para una región epitópica del receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un anticuerpo o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14. 17. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15 que comprende, o deriva de, un anticuerpo monoclonal humano o anticuerpo recombinante humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. 18. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 19. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según la reivindicación 18, en el que la acción inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH es de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 20. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, en el que la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humanos por célula es de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 21. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según la reivindicación 20, en el que la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humanos por célula es de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 67   por mg. 22. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente por (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 23. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente por (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 24. Un polinucleótido que comprende: (i) una secuencia polinucleotídica como se muestra en las SEQ ID NO 10 o SEQ ID NO 15, que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH o dominio VL de anticuerpo como se muestra en las SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 6 respectivamente; o (ii) una secuencia nucleotídica que codifica un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH o dominio VL de anticuerpo de un anticuerpo o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14; o (iii) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia de (i) en la secuencia de codones debido a la degeneración del código genético; o (iv) una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias de (i), (ii) o (iii) y que codifica un fragmento Fab, un fragmento Fd, un fragmento Fv, un fragmento dAB, fragmentos F(ab)2 o un fragmento scFV de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14. 25. Un sistema de vector biológicamente funcional que porta un polinucleótido según la reivindicación 24 y que es capaz de introducir el polinucleótido en el genoma de un organismo hospedador. 26. Una célula hospedadora transformada con un polinucleótido según la reivindicación 25. 27. Uno o más anticuerpos antiidiotípicos generados en una región de unión de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23. 28. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 para uso en terapia. 29. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. 30. Uso de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 4-14 y 20-23 en la fabricación de un medicamento para uso en la estimulación del tejido tiroideo o tejido que contiene un receptor de TSH. 31. Uso de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de cáncer de tiroides. 68   Figura 1. Inhibición de la unión de TSH marcada a tubos recubiertos con TSHR por IgG y Fab de hMAb TSHR1. La IgG de control era un autoanticuerpo monoclonal humano de GAD65 69   Figura 2. Actividades estimulantes del tiroides de IgG y Fab de hMAb TSHR1, TSH porcina (70 unidades/mg, pTSH), TSH humana recombinante (6,7 unidades/mg, hTSH) y un anticuerpo monoclonal de control (MAb, un autoanticuerpo monoclonal humano de peroxidasa de tiroides (2G4)). Basal= AMPc producido en presencia de solo disolución salina tamponada de Hanks exenta de NaCl.   Figura 3. Efecto del suero de donante de linfocitos sobre la inhibición de la unión de TSH a TSHR y sobre la estimulación del AMP cíclico en células CHO transfectadas con TSHR. En el caso del ensayo de inhibición de la unión, se diluyó el suero en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos. Para el ensayo de estimulación, se diluyó el suero en disolución salina tamponada de Hanks exenta de NaCl. Los sueros de donantes de sangre sanos (n= 3) dieron respuestas en el intervalo de 1,1-1,3 veces el nivel basal. 71   Figura 3a. Comparación de un ELISA de autoanticuerpos de TSHR según la presente invención con ensayos anteriores, en particular, un ELISA basado en TSH-biotina descrito por J. Bolton, J. Sanders, Y. Oda, C. Chapman, R. Cono, J. Fumaniak, B. Rees Smith Measurement of thyroid-stimulating hormone receptor autoantibodies by ELISA, Clinical Chemistry 1999, volumen 45, pág. 2285-2287 y el RIA original descrito por K. Southgate, F.M. Creagh, M. Teece, C. Kingswood, B. Rees Smith. A receptor assay for the measurement of TSH receptor antibodies in unextracted serum, 1984, Clinical Endocrinology, volumen 20, pág. 539-543. 72   Figura 3b. Comparación de un ELISA de autoanticuerpos de TSHR según la presente invención y un ELISA basado en TSH-biotina descrito por J. Bolton, J. Sanders, Y. Oda, C. Chapman, R. Cono, J. Fumaniak, B. Rees Smith Measurement of thyroid-stimulating hormone receptor autoantibodies by ELISA, Clinical Chemistry 1999, volumen 45, pág. 2285-2287. Se compararon los sueros de 72 pacientes con enfermedad de Graves. y= 1,1154x-13,032, r= 0,99 73   Figura 4. Secuencia nucleotídica de las regiones V, D y J de la cadena pesada de hMAb TSHR1 Figura 4a 74   Figura 4b   Figura 5. Secuencia aminoacídica de las regiones V, D y J de la cadena pesada de hMAb TSHR1 Figura 5a Figura 5b 76   Figura 6. Secuencia de ADN de la cadena ligera de hMAb TSHR1 Figura 6a Figura 6b 77   Figura 7. Secuencia de proteína de la cadena ligera de hMAb TSHR1 Figura 7a Figura 7b 78   Figura 8. Efectos de los sueros de dos pacientes (T1 y T2 con actividad antagonista de TSH) sobre la estimulación de la producción de AMP cíclico (en células CHO transfectadas con TSHR) por pTSH (0,5 ng/ml) e IgG (10 ng/ml) y Fab (5 ng/ml) de hMAb TSHR1 79   Figura 9. Secuencia nucleotídica de la cadena pesada de 9D33 Figura 9a   Figura 9b 81   Figura 10. Secuencia aminocídica de la cadena pesada de 9D33 Figura 10a Figura 10b 82   Figura 11. Secuencia nucleotídica de la cadena ligera de 9D33 Figura 11a Figura 11b 83   Figura 12. Secuencia aminoacídica de la cadena ligera de 9D33 Figura 12a Figura 12b 84