ANTICUERPO ANTI-CD4 HUMANIZADO CON PROPIEDADES INMUNOSUPRESORAS.

Un anticuerpo anti-CD4 humanizado que es capaz de activar los linfocitos T reguladores CD4+ CD25+,

donde el anticuerpo anti-CD4 humanizado comprende una secuencia que comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo B-F5 monoclonal anti-CD4 de ratón, donde el anticuerpo B-F5 monoclonal anti-CD4 de ratón tiene regiones Vh y Vk codificadas por la SEC ID Nº 5 y la SEC ID Nº 6

Anticuerpo anti-CD4 humanizado con propiedades inmunosupresoras.

La invención se refiere a un anticuerpo anti-CD4 humanizado, y a su uso para inmunomodulación.

Las enfermedades autoinmunes así como el rechazo de injertos se producen por una respuesta inmune inapropiada a los antígenos tisulares: a los autoantígenos en el primer caso, y a los antígenos del aloinjerto en el segundo.

Las enfermedades autoinmunes incluyen, por ejemplo, artritis reumatoide, diabetes de tipo I, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, dermatitis atópica, etc.

Los tratamientos convencionales para estos trastornos inmunológicos implican fármacos inmunosupresores. Sin embargo, estos fármacos inducen una inmunosupresión general, dando lugar a la inhibición no sólo de las funciones nocivas del sistema inmune, sino también de las funciones útiles. Como consecuencia, inducen efectos secundarlos, tales como infecciones oportunistas.

Como una estrategia alternativa, se ha propuesto usar anticuerpos monoclonales (mAb) inmunosupresores contra moléculas de la superficie celular, con el fin de eliminar subgrupos específicos de linfocitos (anticuerpos destructores) o para inhibir la función de una molécula de superficie diana sin matar a la célula que la porta (anticuerpos no destructores).

En general, se reconoce que los linfocitos T CD4⁺ desempeñan un papel importante en el inicio y mantenimiento de la autoinmunidad. Por lo tanto, se ha propuesto el uso de mAb contra moléculas de superficie de los linfocitos T CD4⁺, y en particular mAb anti-CD4, como agentes inmunosupresores. Aunque numerosos estudios clínicos han confirmado el interés potencial de esta estrategia, también se plantearon varias cuestiones a abordar con el fin de hacer que los mAb anti-CD4 sean más adecuados para su uso en la práctica clínica rutinaria.

A modo de ejemplo, el anticuerpo B-F5 (IgG1 murina anti-CD4 humano) se ensayó en diferentes enfermedades autoinmunes:

- en pacientes con artritis reumatoide, varios estudios abiertos sugirieron un efecto clínico positivo de B-F5 a una dosis diaria de al menos 20 mg (Racadot et. al Clin Exp Rheumatol 10 (4): 375-74; 1992); Wendling et al., Clin Rheumatol, 11 (4): 542-7, 1992). Sin embargo, los resultados observados en un experimento controlado con placebo con una dosis diaria de 20 mg durante 10 días no mostraron una mejora significativa (Wendling et al. J Rheumatol; 25 (8): 1457-61, 1998).

- en psoriasis, se observó una mejora en las lesiones psoriásicas después de un tratamiento a una dosis de 0,2 mg/kg/día a 0,8 mg/kg/día durante 7 u 8 días (Morel et al. J Autoimmun., 5 (4): 165-77, 1992);

- en pacientes con esclerosis múltiple (MS), se observaron algunos efectos positivos después de un tratamiento de 10 días en pacientes con formas recurrentes-remitentes, alguna de las cuales estaban libres de recaídas al sexto mes después de la terapia. (Racadot et al., J. Autoimmun, 6 (6): 771-86, 1993); se observaron efectos similares por Rumbach et al. (Mult Sclar, 1 (4): 207-12,1996).

- en la enfermedad de Crohn grave, no se observó una mejora significativa en pacientes que recibieron B-F5 a una dosis de 0,5 mg/kg/día durante 7 días consecutivos o de 0,5 mg/kg/día el primer día (día 0) y 1 mg/kg/día los días 1-6 (Canva-Delcambre et al., Aliment Pharmacol Ther 10 (5): 721-7, 1996).

- en la prevención del rechazo de aloinjertos, se describió una modificación de los parámetros biológicos, que indicaba una acción de B-F5 in vivo a una dosis de 30 mg/día. Sin embargo, se notificó que la biodisponibilidad de B-F5 no era suficiente para permitir su uso para la profilaxis del rechazo de aloinjertos (Dantal et. al. Transplantation, 27; 62 (10): 1052-6, 1996).

Por lo anterior, parece ser que un primer aspecto a resolver es la necesidad de usar dosis altas de mAb para obtener una mejora clínica. Esto se puede producir, entre otras cosas, por la mala accesibilidad al mAb por los linfocitos en los tejidos diana. El uso de dosis mayores puede dar como resultado una acción excesiva sobre linfocitos sanguíneos, induciendo efectos secundarios indeseados.

Otra desventaja de la terapia con anticuerpos monoclonales en seres humanos es que estos anticuerpos se obtienen generalmente a partir de células de ratón y provocan respuestas anti-ratón en los destinatarios humanos. Esto no solamente da como resultado una menor eficacia del tratamiento e, incluso, de cualquier tratamiento futuro con anticuerpos monoclonales de ratón, sino también un riesgo incrementado de anafilaxis.

En principio, esta desventaja se puede evitar mediante el uso de anticuerpos humanizados, obtenidos injertando las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de un anticuerpo monoclonal de ratón, que determinan la especificidad de unión a antígeno, en las regiones marco (FR) de una molécula de inmunoglobulina humana. El objetivo de la humanización es obtener un anticuerpo recombinante que tenga las mismas propiedades de unión a antígeno que el anticuerpo monoclonal de ratón del que se han obtenido las secuencias CDR y mucho menos inmunogénico en seres humanos.

En algunos casos, la sustitución de las CDR del anticuerpo de ratón por las CDR humanas en regiones marco es suficiente para transferir las propiedades de unión a antígeno (que incluyen no solo la especificidad, sino también la afinidad por el antígeno). Sin embargo, en muchos anticuerpos, algunos restos FR son importantes para la unión a antígeno, porque se ponen en contacto directamente con el antígeno en el complejo anticuerpo-antígeno, o porque influyen en la confirmación de las CDR y, por lo tanto, en su comportamiento de unión a antígeno.

Por lo tanto, en la mayoría de los casos también es necesario sustituir uno o varios restos marco del anticuerpo de ratón por los restos FR humanos correspondientes. Ya que el número de restos sustituidos tiene que ser tan pequeño como sea posible para evitar reacciones anti-ratón, el problema es determinar qué resto o restos de aminoácidos son críticos para conservar las propiedades de unión a antígeno. Se han propuesto varios métodos para predecir los sitios mas apropiados para la sustitución. Aunque proporcionan principios generales que pueden ser de cierta ayuda en las primeras etapas de humanización, el resultado final varía de un anticuerpo a otro. Por tanto, para un anticuerpo dado, es muy difícil predecir qué sustituciones proporcionarán el resultado deseado.

Sin embargo, los inventores han intentado la humanización de B-F5 de ratón y han tenido éxito produciendo B-F5 humanizado (denominado en lo sucesivo en este documento hB-F5) que tiene las mismas propiedades de unión a CD4 que el B-F5 de ratón parental.

Además, han observado, sorprendentemente, que hB-F5 tiene un efecto inmunosupresor optimo in vivo a dosis bastante menores que las usadas previamente con B-F5 parental y que las usadas actualmente con otros anticuerpos monoclonales anti-CD4.

En realidad, los inventores han observado que hB-F5 proporcionaba una inmunosupresión eficaz, reflejada por un efecto clínico positivo en pacientes con artritis reumatoide, cuando se usó en un tratamiento de 10 días a una dosis tan baja como 1 mg/día y preferentemente a una dosis de 5 mg cada dos días.

Como consecuencia, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-CD4 humanizado que es capaz de activar linfocitos T reguladores CD4⁺ CD25⁺, donde el anticuerpo anti-CD4 humanizado comprende una secuencia que comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal de ratón anti-CD4 B-F5, donde el anticuerpo monoclonal de ratón anti-CD4 B-F5 tiene regiones V_h y V_k codificadas por la SEC ID Nº: 5 y la SEC ID Nº: 6. Además, la presente invención proporciona un fragmento de anticuerpo que comprende los dominios V de este anticuerpo anti-CD4 humanizado que es capaz de activar linfocitos T reguladores CD4⁺ CD25⁺, y un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica un dominio V de este anticuerpo. La presente invención también proporciona una composición terapéutica que comprende el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo, y proporciona el anticuerpo o fragmento de anticuerpo para uso como un medicamento.

La presente invención proporciona un anticuerpo humanizado (hB-F5) obtenido de MAb B-F5 de ratón, en el que dicho anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-CD4 humanizado que es capaz de activar los linfocitos T reguladores CD4⁺ CD25⁺, donde el anticuerpo anti-CD4 humanizado comprende una secuencia que comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo B-F5 monoclonal anti-CD4 de ratón, donde el anticuerpo B-F5 monoclonal anti-CD4 de ratón tiene regiones V_h y V_k codificadas por la SEC ID Nº 5 y la SEC ID Nº 6.

2. Un anticuerpo anti-CD4 humanizado de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho anticuerpo se obtiene a partir de un anticuerpo B-F5 monoclonal anti-CD4 de ratón que tiene regiones V_h y V_k codificadas por la SEC ID Nº: 5 y la SEC ID Nº 6.

3. Un fragmento de anticuerpo que comprende dominios V del anticuerpo anti-CD4 humanizado de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es capaz de activar los linfocitos T reguladores CD4⁺ CD25⁺.

4. Un polinucleótido que comprende un secuencia que codifica un dominio V de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2.

5. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 4.

6. Una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 5.

7. Una composición terapéutica que comprende el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, o el fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3.

8. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, o un fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso como un medicamento.

9. Un anticuerpo o un fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 8 para el tratamiento o prevención de rechazo de injertos, reacción del injerto contra hospedador o reacción del hospedador contra injerto.

10. Un anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 8 para el tratamiento o prevención de enfermedades autoinmunes.

11. Un anticuerpo o fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 10 en el que la enfermedad autoinmune es miocarditis, diabetes tipo I, psoriasis, lupus eritomatoso, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, colitis ulcerosa o dermatitis atópica.

12. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 o un fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 3, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de rechazo de injertos, reacción de injerto contra huésped o reacción de huésped contra injerto.

13. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 o un fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 3, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de enfermedades autoinmunes.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 13 en el que la enfermedad autoinmune es miocarditis, diabetes tipo I, psoriasis, lupus eritomatoso, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, colitis ulcerosa o dermatitis atópica.

15. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, o un fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, para activar in vitro linfocitos T reguladores CD4⁺ CD25⁺.