Secuencia genética recombinante que comprende un gen de la SLC humana,

un gen antigénico y un gen del fragmento de la IgG1-Fc, enlazándose el gen de la SLC en dirección 5'' con el gen antigénico, y enlazándose el gen del fragmento de la IgG1-Fc en dirección 3'' con el gen antigénico

Vacuna quimiocina antigénica recombinante.

Campo técnico

La presente invención se refiere a una nueva secuencia genética recombinante, a una proteína de fusión expresada a parir del gen, y a las vacunas producidas con el gen, así como a distintas vacunas genéticas producidas sustituyendo el gen antigénico de la secuencia recombinante, o a la utilización de productos de expresión tales como vacunas de péptidos de fusión.

Antecedentes de la invención

La quimiocina tejido linfático secundario (SLC) en seres humanos ha llamado mucho la atención desde su descubrimiento. La SLC regula la secreción de las citocinas, altera los estados de inmunodepresión del microentorno de tumores, y activa el desarrollo de los Th1. Por lo tanto, la SLC resulta útil en la inmunidad antitumoral. Además, la SLC tiene el efecto de atraer los linfocitos y las células dendríticas (DC). La inyección intratumoral provoca respuestas inmunitarias antitumorales locales y sistémicas. La SLC puede regular asimismo la inhibición de la angiogénesis de los tumores. Por lo tanto, la SLC es muy útil en la inmunoterapia contra el cáncer. Sin embargo, la utilización de la proteína SLC sola o un método transgénico no supuso unos resultados satisfactorios en la inmunidad antitumoral. Si-Yi Chen et al. ha propuesto que la reacción inmunitaria antitumoral se puede potenciar inmunizando ratones con DC sometidas a transfección con un vector retrovírico recombinante que contenga genes que codifiquen el fragmento IgG Fc y el antígeno tumoral. El mecanismo consiste en que la proteína de fusión secretada y expresada a partir de las DC la vuelven a capturar las DC mediante el receptor Fc (FcR), y a continuación el epítopo de la proteína de fusión se presenta a linfocitos T auxiliares (Th) mediante moléculas MHC de clase II y la presentación cruzada a linfocitos T citotóxicos (CTL) mediante moléculas MHC de clase I, mediante las que se provoca sistémicamente la inmunidad antitumoral humoral-y-celular. Serre K et al. han publicado que la capacidad de las DC para capturar antígenos mediante la endocitosis en la que interviene el FcR es 10.000 veces superior que mediante pinocitosis. Sin embargo, el aislamiento, amplificación y transfección génica de las DC aumentan la complejidad de la producción de la vacuna. En este caso, se han de preparar las DC individualmente, lo que dificulta el control de la calidad y la producción industrial.

Sumario de la invención

Para superar los inconvenientes de las técnicas anteriores, un objetivo de la presente invención es proporcionar una nueva secuencia genética recombinante.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una proteína de fusión expresada por la secuencia genética recombinante.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar a vacuna genética de la proteína de fusión codificada por la secuencia genética recombinante según la presente invención.

Además, el objetivo de la presente invención es proporcionar una vacuna genética del antígeno quimiotáctico tumoral recombinante.

Para alcanzar los objetivos de la presente invención, se adoptaron las siguientes soluciones técnicas:

En la secuencia genética recombinante según la presente invención, sitios de la endonucleasa de restricción EcoRI y se encuentran presentes genes de tres glicinas entre el gen de la SLC y el gen antigénico, y sitios de la endonucleasa de restricción EcoRV y se encuentran presentes genes de cinco glicinas entre el gen antigénico y el gen del fragmento de la IgG1-Fc.

La secuencia genética recombinante de la presente invención comprende la SEC ID N.º:1 y la SEC ID N.º: 12.

La presente invención se refiere asimismo a una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia genética recombinante según la presente invención. Dicha secuencia de aminoácidos comprende la SEC ID N.º: 2.

La presente invención se refiere asimismo a una secuencia de aminoácidos codificada por la SEC ID N.º: 12. Dicha secuencia de aminoácidos es la SEC ID N.º: 13.

La presente invención se refiere asimismo a una vacuna genética, que comprende la secuencia genética recombinante de la presente invención.

Además, la presente invención se refiere asimismo a una vacuna genética. Preferentemente, la vacuna genética comprende la SEC ID N.º: 1, la SEC ID N.º: 12 y las secuencias de aminoácidos correspondientes.

En otras palabras, la presente invención se refiere a una secuencia genética recombinante, que comprende un gen de la SLC humana, un gen antigénico y un gen del fragmento de la IgG1-Fc, en la que el gen de la SLC se enlaza en dirección 5' con el gen antigénico, y el gen del fragmento de la IgG1-Fc se enlaza en dirección 3' con el gen antigénico. Dicho gen antigénico comprende los marcadores Her2/neu, P53, PSA, PAP, PSM, MAGE1, MAGE2, MAGE3, BAGE, GAGE1, GAGE 2, CAG3, RAGE, NY-ESO-1, tirosinasa, CEA, idiotipo de la Ig, gp100, melan A, gp75, TRP-1, TRP-2, CDK4, CASP-8, ras, bcr/abl, MUC-1, y otros genes que codifican las proteínas relacionadas con los virus HCV, HIV y otros microorganismos patógenos. Los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRI y los genes de tres glicinas se encuentran presentes entre el gen de la SLC y el gen antigénico de la presente invención, y los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRV y los genes de cinco glicinas se encuentran presentes entre gen el antigénico y el gen del fragmento de la IgG1-Fc.

La presente invención se refiere asimismo a la utilización de la secuencia genética recombinante de la presente invención al preparar vacunas genéticas. Principalmente, una vacuna genética, que comprende la secuencia genética de la presente invención, en particular, la SEC ID N.º: 1, la SEC ID N.º: 12 y las secuencias de aminoácidos correspondientes de la SEC ID N.º: 2 y la SEC ID N.º: 13.

En otras palabras, la presente invención se refiere a una secuencia genética recombinante, que comprende un gen de la SLC humana, un gen antigénico y un gen del fragmento de la IgG1-Fc (véase la figura 13). El gen de la SLC se enlaza en dirección 5' con el gen antigénico, y se introducen los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRI y los genes de tres glicinas. El gen del fragmento de la IgG1-Fc se enlaza en dirección 3' con el gen antigénico, y se introducen los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRV y los genes de cinco glicinas.

Según la presente invención, la sustitución del gen antigénico en dichos genes mediante los sitios de la endonucleasa de restricción puede producir diversos genes de fusión antigénicos quimiotácticos. En particular, la presente invención se refiere a un gen recombinante que comprende la secuencia de ácido nucleico SEC ID N.º: 1. La secuencia de ácido nucleico SEC ID N.º: 1 es la secuencia artificialmente ligada de SLC-Her2/P53-Fc, en la que el gen de la SLC se dispone desde la posición 1 hasta la posición 402 del ácido nucleico; el gen ligador Her2 se dispone desde la posición 418 hasta la posición 711 del ácido nucleico. Los ácidos nucleicos que se encuentran desde la posición 418 hasta la posición 444 en el gen recombinante corresponden a los de la posición 1105 hasta la posición 1131 en el marco de lectura abierto (ORF) del gen Her2/neu. Los ácidos nucleicos desde la posición 445 hasta la posición 546 en el gen recombinante corresponden a aquellos desde la posición 244 hasta la posición 345 en el marco de lectura abierto (ORF) del gen Her2/neu, en el que se introduce una mutación desde G hasta C en la posición 250. Los ácidos nucleicos desde la posición 547 hasta la posición 711 en el gen recombinante corresponden a aquéllos desde la posición 1333 hasta la posición 1479 en el ORF del gen Her2/neu. En el gen recombinante, una parte del gen P53 se dispone desde la posición 712 hasta la posición 1113,...

1. Secuencia genética recombinante que comprende un gen de la SLC humana, un gen antigénico y un gen del fragmento de la IgG1-Fc, enlazándose el gen de la SLC en dirección 5' con el gen antigénico, y enlazándose el gen del fragmento de la IgG1-Fc en dirección 3' con el gen antigénico.

2. Secuencia genética recombinante según la reivindicación 1, en la que dicho gen antigénico comprende los marcadores Her2/neu, P53, PSA, PAP, PSM, MAGE1, MAGE2, MAGE3, BAGE, GAGE1, GAGE 2, CAG3, RAGE, NY-ESO-1, tirosinasa, CEA, el idiotipo de la Ig, gp100, melan A, gp75, TRP-1, TRP-2, CDK4, CASP-8, ras, bcr/abl, MUC-1, y genes que codifican las proteínas relacionadas con los virus de HCV, HIV y microorganismos patógenos.

3. Secuencia genética recombinante según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRI y los genes de tres glicinas se encuentran presentes entre el gen de la SLC y el gen antigénico, y los sitios de la endonucleasa de restricción EcoRV y los genes de cinco glicinas se encuentran presentes entre el gen antigénico y el gen del fragmento de la IgG1-Fc.

4. Secuencia genética recombinante según la reivindicación 1, en la que la secuencia es la SEC ID N.º: 1.

5. Secuencia genética recombinante según la reivindicación 1, en la que la secuencia es la SEC ID N.º: 12.

6. Secuencia de aminoácidos codificada por secuencia genética recombinante de la SEC ID N.º: 1.

7. Secuencia de aminoácidos según la reivindicación 6, en la que la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N.º: 2.

8. Secuencia de aminoácidos codificada por el gen recombinante de la SEC ID N.º: 12 según la reivindicación 5, en la que la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N.º: 13.

9. Vacuna genética que comprende la secuencia genética recombinante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

10. Vacuna genética según la reivindicación 9, en la que dicha secuencia genética se representa mediante la SEC ID N.º: 1, la SEC ID N.º:12 o la secuencia correspondiente de aminoácidos de la misma.