VACUNA HER-2/NEU A BASE DE MULTIPLES PEPTIDOS.

Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu,

en la que dicha vacuna comprende una mezcla, como mínimo, de tres péptidos diferentes que tienen una longitud de 9 a 30 aminoácidos y cada secuencia se encuentra en el dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, en la que, como mínimo, un péptido tiene la secuencia 378 a 394 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, como mínimo, otro tiene la secuencia 545 a 560 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu y, como mínimo, otro péptido tiene la secuencia 610 a 623 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu y en la que cada uno de los péptidos está conjugado a un transportador

La presente invención se refiere a una vacuna a base de múltiples péptidos contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu.

El antígeno tumoral HER-2/neu, producto génico del protooncogén erbB2/neu, es una proteína de 185 kDa que pertenece a la familia de los receptores del factor de crecimiento epidérmico. Comprende un dominio extracelular rico en cisteína (ECD) con diversos sitios de glicosilación, un dominio transmembrana hidrofóbico, y un dominio tirosina quinasa conservado intracelular. HER-2/neu se detecta débilmente en células epiteliales de tejidos normales pero se sobreexpresa en el 20 hasta el 30 % de cánceres primarios de mama, ovario, colon, pulmón y próstata, y se ha asociado con un mal pronóstico y un alto riesgo de recidiva del cáncer. La sobreexpresión parece ser estable y homogénea en tumores primarios, así como sus metástasis. Por lo tanto, HER-2/neu es una diana atractiva de la inmunoterapia del cáncer.

La inmunoterapia pasiva con anticuerpos monoclonales es un tratamiento contra enfermedades cancerosas que se lleva a cabo de forma rutinaria. Por lo tanto, la inducción de respuestas de anticuerpos antitumorales humorales mediante inmunización con péptidos activos se ha convertido en un concepto de tratamiento favorable. Actualmente, la terapia con Trastuzumab, también conocido como Herceptin®, un anticuerpo monoclonal (mAb) específico de Her-2/neu, es estándar para el tratamiento de cánceres de mama avanzados que sobreexpresan la oncoproteína Her-2/neu. La eficacia terapéutica de este mAb sugiere que dirigir anticuerpos hacia tumores diana tiene una actividad preventiva significativa. Sin embargo, la utilidad de la inmunoterapia pasiva está limitada por la distribución de tejido inadecuada y la necesidad de infusiones múltiples con costes asociados elevados.

Actualmente, existen diversas estrategias de vacuna dirigidas a HER-2/neu. Una estrategia de vacuna de este tipo requiere el desarrollo de un método para superar la tolerancia inmune a la propia proteína HER-2/neu.

El documento EP1236740 se refiere a una vacuna que comprende dos péptidos con una longitud de 13 y 16 aminoácidos y una secuencia, que se encuentran en el dominio extracelular de la proteína HER-2/neu. Los péptidos utilizados permiten una inmunización activa contra enfermedades cancerosas asociadas con el

oncogén HER-2/neu, pero inducen una inhibición menor del crecimiento de tumores que el Trastuzumab.

Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es dar a conocer una vacuna contra una enfermedad cancerosa que tiene asociada una sobreexpresión de la proteína HER-2/neu, que induce una fuerte inmunidad para establecer una memoria inmune y de este modo evitar los inconvenientes de los tratamientos contra el cáncer convencionales y ofrecer una alternativa convincente a otros métodos de vacunación conocidos. Un objetivo adicional de la presente invención es dar a conocer una vacuna, que se puede administrar al paciente por vía oral y nasal (mucosal) sin perder su fuerte propiedad inmunogénica.

La presente invención se basa en el descubrimiento de que el objetivo anterior se puede conseguir si la vacuna es una vacuna a base de múltiples péptidos – múltiples epítopos -contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, es decir, la vacuna comprende una combinación específica de péptidos que presentan diferentes secuencias de aminoácidos que se encuentran en el dominio extracelular de la proteína HER-2/neu.

Además, se ha encontrado que, a efectos de mejorar la respuesta inmune, la vacuna debería comprender opcionalmente un adyuvante de estimulación inmune o sistema de liberación, en el caso de que la vacuna se tuviera que administrar por vía oral o nasal sin perder su fuerte propiedad inmunogénica, la vacuna

Por lo tanto, la presente invención da a conocer una vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, en la que dicha vacuna comprende una mezcla, como mínimo, de tres péptidos diferentes que tienen una longitud de 9 a 30 aminoácidos y cada secuencia se encuentra en el dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, en la que, como mínimo, uno de los tres péptidos tiene la secuencia 378 a 394 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, como mínimo, otro tiene la secuencia 545 a 560 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu y, como mínimo, el otro péptido tiene la secuencia de 610 a 623 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, y en la que cada uno de los péptidos está conjugado a un transportador.

La vacuna de la presente invención induce una inmunidad fuerte y establece una memoria inmune contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu. De este modo, la vacuna aporta profilaxis contra estas enfermedades cancerosas. Adicionalmente, la vacuna de la presente invención se puede utilizar para tratar una enfermedad cancerosa que ya existe o para acompañar tratamientos contra el cáncer convencionales. La aplicación de la vacuna de la presente invención puede evitar completa o parcialmente los inconvenientes considerables descritos anteriormente de las inmunoterapias contra el cáncer convencionales/pasivas.

En particular, el péptido que tiene la secuencia de 378 a 394 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu es ID SEQ

1: PESFDGDPASNTAPLQP.

El péptido que tiene la secuencia de 545 a 560 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu es ID SEQ 2: RVLQGLPREYVNARHC.

El péptido que tiene la secuencia de 610 a 623 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu es ID SEQ 3: YMPIWKFPDEEGAC.

Los péptidos de la presente invención también se pueden unir a otros péptidos o polipéptidos o a otros grupos químicos, tales como grupos glicosilo, lípidos, fosfatos, grupos acetilo, o similares, tales como, por ejemplo, poliglicol, polietilenglicol, ácido poli-láctico (PLA), ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA), dendrímeros de lisina. Estas sustancias no tienen una influencia negativa sobre la actividad biológica de los péptidos.

Es preferente que el péptido ID SEQ 1 se una adicionalmente a cualquier enlazador conocido en la técnica, pero preferentemente a un enlazador de glicina y/o a un residuo de cisteína C-terminal, más preferentemente al enlazador GGGGGC.

Por lo tanto, la vacuna preferente de la presente invención comprende una mezcla del péptido ID SEQ 1 unido a un enlazador de glicina y/o a un residuo de cisteína C-terminal, en particular al enlazador GGGGGC, y el péptido ID SEQ 2, así como el péptido ID SEQ 3.

Además, es preferente que cada uno de los péptidos de la presente invención esté conjugado a un transportador, en particular para la inmunización sistémica.

Los péptidos utilizados se pueden conjugar mediante cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, mediante ingeniería genética o por medios químicos, los cuales incluyen la unión de un transportador y un grupo funcional por reacción química. Mediante ingeniería genética, la conjugación del transportador, que puede ser una molécula proteica, al péptido se puede realizar insertando una secuencia de ADN o ARN que codifica la secuencia total del conjugado en el sistema de expresión que expresa el conjugado total.

De forma adicional, los péptidos se pueden unir al transportador por medio de otro enlazador. De este modo, el enlazador actúa como espaciador que confiere flexibilidad, o en caso de que se desee, rigidez al péptido conjugado. La naturaleza química del espaciador puede variar, dependiendo de la reactividad de los grupos funcionales del transportador y del péptido, respectivamente, y dependiendo de la necesidad con respecto a flexibilidad o rigidez. Como ejemplo, se pueden mencionar secuencias espaciadoras, tales como los residuos de cisteína en el extremo C-terminal o glicina, tal como (G)x.

Cada uno de los péptidos de la presente invención se puede conjugar al transportador de forma simple o múltiple, en diferentes combinaciones como monooligómeros, dioligómeros o trioligómeros. Dichas conjugaciones se describen, por ejemplo, en la publicación de Th. H. Turpen, S.J. Reinl, Y. Charoenvit, S.L. Hoffmann, V. Fallarme en Bio/Technology, 1995, Vol. 13, páginas 53 a 57, mediante ejemplos de la conjugación de epítopos a transportadores macromoleculares,...

1. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, en la que dicha vacuna comprende una mezcla, como mínimo, de tres péptidos diferentes que tienen una longitud de 9 a 30 aminoácidos y cada secuencia se encuentra en el dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, en la que, como mínimo, un péptido tiene la secuencia 378 a 394 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu, como mínimo, otro tiene la secuencia 545 a 560 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu y, como mínimo, otro péptido tiene la secuencia 610 a 623 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu y en la que cada uno de los péptidos está conjugado a un transportador.

2. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según la reivindicación 1, en la que, como mínimo, un péptido que tiene la secuencia 378 a 394 del dominio extracelular de la proteína HER-2/neu está acoplado a un enlazador de glicina adicional y/o a un residuo de cisteína C-terminal.

3. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que cada péptido está conjugado a un transportador de forma simple o múltiple.

4. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según la reivindicación 3, en la que el transportador es inmunogénico.

5. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según las reivindicaciones 3 ó 4, en la que el transportador se selecciona del grupo que comprende hemocianina de lapa (KLH), toxoide tetánico (TT), la subunidad B de la toxina del cólera (CT, CTB), toxina termolábil (LT) o mutantes o la subunidad B (LTB) de E. coli, fantasmas bacterianos, liposomas, quitosomas, virosomas o células dendríticas.

6. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la vacuna comprende un adyuvante.

7. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la vacuna comprende un adyuvante mucosal.

8. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según la reivindicación 7, en la que el

adyuvante mucosal es la subunidad B de la toxina del cólera (CTB), una bacteria ácido láctica o un mutante de la misma.

9. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según las reivindicaciones 7 u 8, en la que el adyuvante mucosal se utiliza como transportador.

10. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el transportador mucosal es una bacteria ácido láctica probiótica con una capacidad promotora de IL-12/ activadora de Th1 para su aplicación oral/mucosal.

11. Vacuna contra enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la vacuna además comprende interleuquina 12 o un agonista de IL-12 o una sustancia que promueve la producción de IL-12.

12. Utilización de la vacuna, según las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento para su administración a un mamífero, a efectos de mantener su respuesta biológica en el tratamiento de las enfermedades cancerosas asociadas con el oncogén HER-2/neu, en la que el patrón de administración de la medicación comprende las etapas de:

a. administración de dicha vacuna 4 veces en intervalos de 14 a 21 días y

b. administración/coadministración posterior de interleuquina 12 o un agonista de IL-12 o una sustancia que promueve la producción de IL-12 en un tratamiento de cinco días, en la que IL-12 se administra en dos concentraciones diferentes.