El uso de un segmento de HGF deficiente en glicosilación que tiene una deficiencia de todas las cadenas de azúcar de los sitios de glicosilación de una cadena a de HGF y se selecciona entre las siguientes proteínas (a) y (b):

(a) una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de las posiciones 32 a 494 de la SEC ID N.º 1,

(b) una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de las posiciones 32 a 494 de la SEC ID N.º 1,

en el que hay de 1 a 30 aminoácidos eliminados, sustituidos, añadidos o insertados en dicha secuencia de aminoácidos, en el que la proteína anteriormente mencionada tiene un dominio de horquilla N-terminal y los cuatro dominios Kringle posteriores, tiene una actividad antagonista frente a la acción del HGF mediante un receptor c-Met/HGF y tiene una actividad inhibidora de la neovascularización, para la producción de una composición farmacéutica para tratar una enfermedad debida a la neovascularización

Uso de un segmento de cadena a de HGF deficiente en glicosilación.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere al uso de un producto modificado de un segmento de HGF (factor de crecimiento de los hepatocitos) para la producción de una composición farmacéutica destinada a tratar enfermedades provocadas por una neovascularización excesiva. Más específicamente, la presente invención se refiere al uso de un segmento de HGF modificado por una deficiencia de glicosilación.

Para la terapia frente a los cánceres, se llevan a cabo la terapia quirúrgica, la quimioterapia, la radioterapia o una terapia multidisciplinar de combinación de las anteriores, y similares. Sin embargo, todavía no se han establecido procedimientos destacables frente al cáncer. Aunque es posible extirpar mediante terapia quirúrgica un tumor primario, a menudo, se produce la formación de pequeños cánceres metastásicos invisibles, en el caso de cánceres que muestran una tendencia a la metástasis, tales como los cánceres de páncreas y de pulmón, incluso aunque el tamaño del tumor primario sea pequeño, dificultándose la extirpación quirúrgica del mismo. En la quimioterapia y la radioterapia en las que se usa un agente anticancerígeno, resulta difícil prevenir la recurrencia de un cáncer resistente y la metástasis de las células cancerosas supervivientes, aunque es posible disminuir temporalmente el tamaño del tumor primario. Con un agente anticancerígeno y la radioterapia, la muerte de células normales además de las células cancerosas está acompañada por graves efectos secundarios que dan como resultado la disminución de la calidad de vida y del poder inmunológico de un paciente. De este modo, actualmente, no existe ningún procedimiento para prevenir eficazmente la metástasis cancerosa, y hay un gran deseo por desarrollar fármacos eficaces para su prevención.

Se han realizado muchas investigaciones en el pasado relativas a los mecanismos de la metástasis cancerosa. Muchos cánceres se desarrollan en el tejido epitelial, y las células cancerosas son liberadas desde un tumor primario, rompen una membrana base que divide el tejido epitelial, invaden los tejidos circundantes, entran en la sangre y en los vasos linfáticos y son transportadas a tejidos distales por el flujo sanguíneo y linfático, volviendo a manifestar la invasión de los tejidos de los vasos sanguíneos y linfáticos, y el crecimiento en los mismos asociado con la neovascularización.

Para suprimir la metástasis cancerosa, se considera ventajoso inhibir cualquiera de estos procesos, y como agentes supresores de la metástasis cancerosa se incluyen, por ejemplo, las sustancias inhibidoras de la adhesión de las células cancerosas con las células endoteliales vasculares en la zona de metástasis (véase la literatura no de patente 1), los inhibidores de la neovascularización (véase la literatura no de patente 2), las sustancias inhibidoras de la invasión de células cancerosas (véase la literatura de patentes 2, literatura no de patentes 3), y similares.

Últimamente, la terapia de latencia tumoral está siendo un foco de atención en relación con la terapia contra el cáncer. La terapia de latencia tumoral produce un estado latente de las células cancerosas usando un inhibidor de la neovascularización. El inhibidor de la neovascularización no mata directamente las células cancerosas, sino que inhibe la neovascularización hasta bloquear una vía de alimentación de oxígeno y de nutrición necesaria para el crecimiento de las células cancerosas, lo que resulta en la inducción de la apóptosis y en la generación de un estado latente de las células cancerosas. Como inhibidores de la neovascularización, se conocen la angiostatina (véase la literatura no de patente 2), la endostatina (véase la literatura no de patente 4), y similares.

La neovascularización se produce por la proliferación de los vasos capilares de los vasos sanguíneos pre-existentes. La neovascularización es indispensable para muchos procesos fisiológicos, tales como la embriogénesis, la cicatrización de heridas, la regeneración tisular y orgánica, mientras que la neovascularización anómala tiene lugar en condiciones patógenas, tales como el crecimiento tumoral y en las zonas de los tumores metastáticos. Se sabe que el inicio de la neovascularización tumoral está inducido por el factor de crecimiento de las células endoteliales vasculares (VEGF), el factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF), el HGF (factor de crecimiento de los hepatocitos), y similares.

Además de tal acción en la neovascularización, el HGF tiene una actividad mitogénica, actividad motogénica y actividad morfogénica, y funciona originariamente como un factor de regeneración que mantiene el poder de cicatrización natural de un cuerpo vivo. Se sabe que diversas actividades biológicas del HGF se expresan mediante la unión del HGF con un receptor c-Met/HGF sobre una célula diana. Se sabe que el receptor c-Met/HGF suele ser expresado en exceso en muchas células cancerosas (véanse las literaturas de no patente 5 a 7), y que el HGF induce la invasión y la metástasis de células tumorales (véase la literatura no de patente 8). Las células cancerosas invaden y generan metástasis utilizando las acciones del HGF de un cuerpo vivo a través de interacciones mutuas con las células intersticiales que rodean a las células cancerosas (véanse las literaturas de no patente 8, 9). Por lo tanto, se supone que si se inhibe la unión del HGF con un receptor c-Met/HGF sobre células tumorales, es posible inhibir la invasión y la metástasis de las células tumorales.

La NK4 es una proteína compuesta por un dominio de horquilla N-terminal y cuatro dominios Kringle de una cadena a de HGF. NK4 se une a un receptor c-Met/HGF y actúa como antagonista frente al HGF (véanse las literaturas de no patente 10, 11). Se sabe que NK4 inhibe la invasión y la metástasis de un tumor mediante una actividad antagonista del HGF. Además, se sabe que NK4 inhibe la neovascularización inducida no sólo por el HGF, sino también por el VEGF y el bFGF, mediante un mecanismo distinto de la actividad antagonista del HGF (véase la literatura no de patente 12). De este modo, NK4 es una molécula bifuncional que tiene simultáneamente una actividad antagonista del HGF y una actividad inhibidora de la neovascularización, y se espera poder utilizar NK4 como un nuevo agente anticancerígeno.

Además, también se puede esperar la utilización de NK4, en base a su actividad inhibidora de la neovascularización, como un agente para prevenir o tratar diversas enfermedades atribuidas a una proliferación anómala de los vasos sanguíneos, por ejemplo, la artritis reumatoide, la retinopatía diabética, la retinopatía del prematuro, la degeneración macular senil, la formación excesiva de cicatriz en la cicatrización de heridas, y similares. Como se describe anteriormente, la neovascularización es indispensable para mantener el metabolismo de los tejidos en un estado normal y para mantener la homeostasis funcional de un cuerpo vivo. Sin embargo, se sabe que la neovascularización anómala está relacionada con diversas enfermedades, incluyendo las enfermedades inflamatorias. Por ejemplo, se ha publicado que la metástasis y la recurrencia de tumores sólidos y enfermedades, tales como la diabetes proliferativa, la psoriasis vulgaris, la artritis reumatoide, la retinopatía diabética, la degeneración macular senil, la formación excesiva de cicatriz en la cicatrización de heridas, son atribuibles a una proliferación anómala de los vasos sanguíneos, particularmente, de los vasos capilares periféricos (véanse las literaturas de no patente 13 y 14). La NK4, que tiene una actividad inhibidora de la neovascularización, es un prometedor agente para prevenir o tratar tales enfermedades.

Además, cabe esperar la aplicación de NK4 como fármaco para la prevención de infecciones y el tratamiento de la listeriosis y la malaria. Se conoce el uso de un receptor c- Met/HGF como base para la infección humana con Listeria monocytogenes (véase la literatura no de patente 15). Además, se sabe que la activación de un receptor c-Met/HGF por el HGF es esencial para el mecanismo inicial de la infección humana con el parásito de la malaria (véase la literatura no de patente 16). Por lo tanto, se cree que NK4, un antagonista frente al HGF, manifiesta un efecto de prevención y tratamiento de estas enfermedades infecciosas.

Es necesario producir en masa una proteína NK4 usando...

1. El uso de un segmento de HGF deficiente en glicosilación que tiene una deficiencia de todas las cadenas de azúcar de los sitios de glicosilación de una cadena a de HGF y se selecciona entre las siguientes proteínas (a) y (b):

2. El uso según la reivindicación 1, en la que el/los aminoácido(s) está(n) sustituido(s) para prevenir la glicosilación en todos los sitios de glicosilación de la proteína.

3. El uso según la reivindicación 2, en la que la(s) sustitución(es) del/de los aminoácido(s) es/son al menos una de las siguientes (a) a (d):

4. El uso según la reivindicación 2, en la que la(s) sustitución(es) del/de los aminoácido(s) es/son al menos una de las siguientes (a) a (c):

5. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que los aminoácidos situados en 162 a 166 de una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 1 están eliminados.

6. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que los aminoácidos situados en 479 a 494 de una secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 1 están eliminados.