Procedimiento mejorado para la obtención de ácido betulínico cristalino,

de alta pureza, a partir de un extracto netanólico de corteza de plátano y/o cáscara de plátano, mediante la concentración por evaporación del extracto, y cristalización en un alcohol, caracterizado por el hecho de que,

a) la corteza o cáscara de plátano molida, se extrae de una vez, con una cantidad de 2 a 5 veces de metanol, durante un transcurso de tiempo de 0,5 a 5,0 horas, mediante calentamiento hasta la ebullición, se filtra el extracto obtenido, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 40 y 60ºC, se concentra, por evaporación hasta un 30 a un 70% de su volumen, y se cristaliza a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre -10 y +10ºC.

b) se realizan, una después de otra, las siguientes etapas, para el lavado y el aislamiento del residuo del extracto metanólico.

(i) Calentamiento del residuo, en un diluyente no polar;

(ii) Separación del residuo, del diluyente;

(iii) Calentamiento del residuo en etanol, aclarado de la fase etanólica mediante la adición de carbón activo y separación del carbón activo, de la fase etanólica, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 60 y 95ºC; y

(iv) Cristalización y separación del ácido betulínico, de la fase etanólica

Procedimiento de producción mejorado para la obtención de ácido betulínico.

La presente invención, se refiere a un procedimiento mejorado para la obtención de ácido betulínico cristalino, de alta pureza, a partir de un extracto netanólico de corteza de plátano molida.

Antecedentes y trasfondo de la invención

El ácido betulínico, es el ácido 3ß-hidroxi-lup-20(29)-en-28-óico de la fórmula

Se conoce el hecho de que, el ácido betulínico, presenta una acción frente al crecimiento de las células del melanoma (por ejemplo, Pisha et al., Nature Medicine 1, 1995, páginas 1046 y siguientes), así como frente a otras células cancerosa (por ejemplo, Sunder et al., patente estadounidense US 6.048.847). Adicionalmente, además, sus amidas, deben poderse aplicar contra el HIV (por ejemplo, Evers et al., J. Med. Chem. 29, 1996, página 1056 y siguientes; o Soler et al., J. Med. Chem. 39, 1996, páginas 1069 y siguientes). Así, por lo tanto, existe una gran necedad en cuanto al hecho de poder disponer del ácido betulínico.

Además de su fabricación sintética (por ejemplo, L. Ruzicka et al., Helv. Chim. Acta 21, 1938, páginas 1076 y siguientes), el ácido botulínico, puede obtenerse a partir de diversas plantas, de una forma particular, de árboles, como por ejemplo, a partir de la corteza del Picramnia pentandra (como por ejemplo, Herz et al., Pytochemistry 11, 1972, páginas 3061 y siguientes), a partir de la corteza del Arbutus menziesii (Robinson et al., Phytochemistry 9, 1970, páginas 907 y siguientes), y a partir de la corteza del Ziziphus mauritiana (como por ejemplo, Pisha et al., Nature Medicine 1, 1995, páginas 1046 y siguientes).

A partir de estos materiales de partida, el ácido betulínico, solamente puede aislarse de una forma muy difícil. Comparativamente, parece tener mayores perspectivas su obtención a partir de la corteza y / o cáscara del plátano (Platanus ecerifolia). En la patente alemana DE 197 13 768, se sugiere un procedimiento para la obtención del ácido betulínico, según el cual, se procede a extraer una materia en polvo obtenida a partir de la cáscara del plátano, con un disolvente polar medio, como por ejemplo, el diclorometano, el cloroformo o el éter dietílico.

Este procedimiento, no es no obstante apropiado para una obtención a escala industrial, correspondiente a grandes cantidades de ácido betulínico, ya que deben aplicarse grandes volúmenes de disolventes de polaridad media, con objeto de extraer el ácido betulínico (aplicaciones de 7 litros de diclorometano sobre 150 g de cáscara de plátano en polvo).

Bruckner et al., J. Chem. Soc., 1948, páginas 948-951, describen un procedimiento para la obtención del ácido betulínico, a partir de cáscara de plátano, a cuyo efecto, las cortezas o cáscaras molidas, se extraen con metanol, el extracto obtenido, se concentra por evaporación y, el concentrado, se recristaliza varias veces, en metanol, en presencia de carbón. El ácido betulínico de esta forma obtenido, presenta, no obstante, todavía, una gran cantidad de impurezas.

La presente invención, tiene por lo tanto la finalidad un procedimiento mejorado para la obtención, a gran escala técnica, de ácido betulínico cristalino, de alta pureza, a partir de cáscaras y/o corteza de plátano, el cual evite los inconvenientes de los procedimientos conocidos.

Descripción detallada de la invención

De una forma sorprendente, se ha encontrado ahora el hecho de que, el ácido betulínico, cristalino, de alta pureza, puede extraerse a partir de un extracto metanólico de corteza de plátano y/o cáscara de plátano, mediante la concentración por evaporación del extracto, y cristalización en un alcohol, caracterizado por el hecho de que, el residuo de la cristalización, se lava con un diluyente no polar.

El concepto ácido betulínico, tal y como se ha utilizado anteriormente, o se utilizará a continuación, en este documento, abarca tanto al ácido betulínico, tal cual, como a sus hidratos y solvatos, de una forma preferible, el ácido betulínico, el cual se encuentra solvatado con 1 a 2 equivalentes de un alcohol, de una forma especial, un equivalente de etanol.

Un objeto adicional de la invención, es el ácido betulínico cristalino de alta pureza, el cual se encuentra solvatado con equivalente de etanol.

Como plátanos especialmente apropiados, se han evidenciado los plátanos occidentales (Platanus occidentalis).

Como alcoholes para la recristalización, se utiliza el etanol.

Como diluyentes no polares, son apropiados, por regla general, los hidrocarburos alifáticos, cicloalifáticos o aromáticos, o mezclas de éstos, de una forma preferible, los hidrocarburos alifáticos con 5 a 8 átomos de carbono, de una forma especial, pentano, hexano ó heptano, de una forma muy especialmente preferible, n-hexano, hidrocarburos cicloalifáticos con 5 a 8 átomos de carbono, de una forma especial, ciclopentano, ciclohexano, metilciclohexano, o hidrocarburos aromáticos con 6 a 9 átomos de carbono, de una forma especial, tolueno ó xileno.

Siempre y cuando, a efectos de simplicidad, se facilite la relación de dos materias, precedentemente o a continuación, en forma de una cantidad de x hasta y veces, en donde, x e y, significan respectivamente el límite inferior y el límite superior de las cantidades facilitadas, este dato se referirá a x hasta y partes en peso de una de las materias, referido a una (1) parte en peso de la otra materia.

(A) En concordancia con la presente invención, se realizan, una después de otra, las siguientes etapas, para el lavado y el aislamiento del residuo del extracto metanólico.

(i) Calentamiento del residuo, en un diluyente no polar;

(ii) Separación del residuo, del diluyente;

(iii) Calentamiento del residuo en etanol, aclarado de la fase etanólica mediante la adición de carbón activo y separación del carbón activo, de la fase etanólica, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 60 y 95ºC; y

(iv) Cristalización y separación del ácido betulínico, de la fase etanólica;

(B) En concordancia con la presente invención, la corteza o cáscara de plátano molida, se extrae de una vez, con una cantidad de 2 a 5 veces de metanol, durante un transcurso de tiempo de 0,5 a 5,0 horas, mediante calentamiento hasta la ebullición, se filtra el extracto obtenido, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 40 y 60ºC, se concentra, por evaporación hasta un 30 a un 70% de su volumen, y se cristaliza a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre -10 y +10ºC. Son formas preferidas de la invención, las siguientes:

(C) Procedimiento, según el cual, se procede a incorporar el residuo del extracto metanólico en una cantidad de 2 a 8 veces de un hidrocarburo alifático, de una forma preferible, ciclohexano, metilciclohexano ó n-hexano, de una forma particular, n-hexano, y se calienta la mezcla hasta la ebullición.

(D) Procedimiento, según el cual, en la etapa (ii), se procede a separar el resido, mediante centrifugación o mediante filtrado por succión, del diluyente.

(E) Procedimiento, según el cual, en la etapa (iii), se procede a incorporar el residuo en una cantidad de 20 a 100 veces, de una forma preferida, en una cantidad de 30 a 80 veces, de una forma particular, de 40 a 60 veces, de etanol, y se calienta hasta la ebullición.

(F) Procedimiento, según el cual, en la etapa (iv), la fase etanólica, se enfría a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes que van de -10 hasta +10ºC, enfriándose, de una forma preferible, a un valor comprendido dentro de unos márgenes que van de 0 a +5ºC, se separa el ácido betulínico precipitado mediante centrifugación o mediante filtrado por succión, y se seca.

(G) Procedimiento, según el cual, el ácido betulínico obtenido, se encuentra a disposición como monoetanolato.

Se prefiere especialmente, el ácido betulínico cristalino, de alta pureza, el cual se encuentra solvatado con un equivalente de etanol, de una forma especial, el etanolato del ácido betulínico, de...

1. Procedimiento mejorado para la obtención de ácido betulínico cristalino, de alta pureza, a partir de un extracto netanólico de corteza de plátano y/o cáscara de plátano, mediante la concentración por evaporación del extracto, y cristalización en un alcohol, caracterizado por el hecho de que,

a) la corteza o cáscara de plátano molida, se extrae de una vez, con una cantidad de 2 a 5 veces de metanol, durante un transcurso de tiempo de 0,5 a 5,0 horas, mediante calentamiento hasta la ebullición, se filtra el extracto obtenido, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 40 y 60ºC, se concentra, por evaporación hasta un 30 a un 70% de su volumen, y se cristaliza a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre -10 y +10ºC.

b) se realizan, una después de otra, las siguientes etapas, para el lavado y el aislamiento del residuo del extracto metanólico.

(i) Calentamiento del residuo, en un diluyente no polar;

(ii) Separación del residuo, del diluyente;

(iii) Calentamiento del residuo en etanol, aclarado de la fase etanólica mediante la adición de carbón activo y separación del carbón activo, de la fase etanólica, a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes situados entre 60 y 95ºC; y

(iv) Cristalización y separación del ácido betulínico, de la fase etanólica.

2. Procedimiento, según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que, se procede a incorporar el residuo del extracto metanólico en una cantidad de 2 a 8 veces de un hidrocarburo alifático, de una forma preferible, n-hexano, y se calienta la mezcla hasta la ebullición.

3. Procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado por el hecho de que, en la etapa (ii), se procede a separar el resido, mediante centrifugación o mediante filtrado por succión, del diluyente.

4. Procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por el hecho de que, en la etapa (iii), se procede a incorporar el residuo en una cantidad de 20 a 100 veces, de etanol, y se calienta hasta la ebullición.

5. Procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por el hecho de que, en la etapa (iv), la fase etanólica, se enfría a una temperatura correspondiente a un valor comprendido dentro de unos márgenes que van de -10 hasta +10ºC, enfriándose, de una forma preferible, a un valor comprendido dentro de unos márgenes que van de 0 a +5ºC, se separa el ácido betulínico precipitado mediante centrifugación o mediante filtrado por succión, y se seca.

6. Procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por el hecho de que, el ácido betulínico obtenido, se encuentra a disposición como monoetanolato.

7. Ácido betulínico cristalino, de alta pureza, caracterizado por el hecho de que, éste, se solvata con un equivalente de etanol.

8. Ácido betulínico cristalino, de alta pureza, según la reivindicación 7, de la fórmula