PREPARACION FARMACEUTICA QUE CONTIENE UN ANTICUERPO CONTRA EL RECEPTOR PARA UN FACTOR DEL CRECIMIENTO EPIDERMICO (RECEPTOR EGF).

Preparación acuosa, que está constituida por un disolvente, que está constituido,

al menos en parte, por agua, un anticuerpo anti-EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico -epidermal growth factor receptor-), un tampón, un aminoácido, un tensioactivo y cloruro de sodio como agente para la isotonización

Preparación farmacéutica, que contiene un anticuerpo contra el receptor para un factor del crecimiento epidérmico (receptor EGF).

La presente invención se refiere a una preparación farmacéutica, que contiene un anticuerpo, el cual está dirigido contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), a su obtención y a su empleo.

En diversos estudios, realizados en vitro e in vivo, pudo observarse que actúa contra los tumores el bloqueo del EGER, realizado por medio de anticuerpos en diversos planos, por ejemplo por medio de la inhibición de la proliferación de las células cancerosas, por medio de la disminución de la angiogénesis inducida por los tumores, por medio de la inducción de la apoptosis de las células cancerosas y por medio del reforzamiento de los efectos tóxicos de la terapia por irradiación y de la quimioterapia tradicional.

El MAB c225 (INN: Cetuximab) es un anticuerpo, que ha sido probado en clínica, el cual se enlaza con el receptor EGF. El Cetuximab es un anticuerpo quimérico, cuyas regiones variables tienen origen murino y cuyas regiones constantes tienen origen humano. El Cetuximab ha sido descrito por primera vez en la publicación Naramura: et al., Cáncer Immunol Immunotherapy 1993, 37: 343- 349 así como en la publicación WO 96/40210 A1.

El MAB 425 es un anticuerpo originalmente murino, que está dirigido contra el EGFR sobreexpresado, en las células tumorales, de manera especial en las células de carcinoma A431. Sus formas humanizadas y quiméricas son conocidas, por ejemplo, por las publicaciones EP 0 531 472 Al; Kettleborough et al., Protein Engineering 1991, 4: 773-783; Bier et al., Cáncer Chemother Pharmacol 2001, 47: 519-524; Bier et al., Cancer Immunol Immunother 1998, 46: 167-173. El EMD 72000 (h425) es una forma del MAB 425 que se encuentra en las fases clínicas I/II, cuya zona constante está constituida por una cadena ? y por una cadena humana ?-1.

Los anticuerpos humanos anti-EGFR pueden ser preparados de conformidad con la tecnología de XenoMouse, tal como se describe en las publicaciones WO 91/10741 A1, WO 94/02602 A1, WO 96/33735 A1; El ABX-EGF (Abgenix, Crit Rev Oncol Hematol 2001, 38: 17-23; Cáncer Research 1999, 59: 1236-43) es un anticuerpo especial, que se encuentra en fase de experimentación clínica, preparado de conformidad con esta tecnología.

Otros anticuerpos, que están dirigidos contra el EGFR, están descritos, por ejemplo, en la publicación EP 0 586 002 B1 así como en la publicación J Nati Cáncer Inst 1993, 85: 27-33 (MAB 528).

Como ocurre con otros anticuerpos, los anticuerpos anti-EGFR son aplicados también para la aplicación terapéutica, en forma de solución parenteral. Un problema especial de las soluciones con estos anticuerpos reside en su tendencia a la agregación y a la formación de multímeros proteicos. En el caso de multímeros que pueden ser reducidos, esto no puede deberse a la formación intermolecular de puentes de disulfuro no intencionados por medio de una interacción entre las partes de la molécula en aproximación. De igual modo, entran en consideración las interacciones hidrófugas y la formación de multímeros no reducibles, que está relacionada con las mismas. Por otra parte se producen reacciones de desamidación, que conducen a continuación a reacciones de degradación proteica. Las reacciones de desnaturalización descritas se presentan especialmente con ocasión del almacenamiento a temperatura elevada en o con ocasión de una solicitación por cizallamiento, como ocurre, por ejemplo, durante el transporte.

Como consecuencia de la citada tendencia a la agregación, se producen precipitaciones del producto con ocasión del almacenamiento de las soluciones de anticuerpos de tal manera, que es cuestionable una extracción reproducible a partir del recipiente que contiene la solución. Por otra parte, sucede que con ocasión de la aplicación parenteral, la solución que contiene partículas puede conducir a embolias. Esto tiene como consecuencia que no se garantice, de manera siempre reproducible, la administración a los pacientes del anticuerpo anti-EGFR en la dosis necesaria en cada caso por medio de soluciones de anticuerpo y que la aplicación no pueda llevarse a cabo con la seguridad reque- rida.

Ciertamente, los agregados pueden ser retenidos por medio de una filtración como paso previo a la inyección. Sin embargo, este procedimiento abarca una etapa adicional y por consiguiente es complicado y es poco adecuado para la práctica clínica. Así mismo queda sin resolver el problema de la posibilidad de reproducir la dosis puesto que se separa de la solución una proporción desconocida de anticuerpos y la formación de partículas tras la filtración sigue planteando un riesgo de seguridad.

Un procedimiento, que puede ser aplicado para la estabilización de los anticuerpos monoclonales, consiste en el secado por liofilización de las soluciones, en las que están contenidos los anticuerpos así como los productos auxiliares. Sin embargo, la liofilización es muy costosa desde el punto de vista del tiempo y de la energía y, por consiguiente, es cara. Así mismo el liofilizado tiene que ser reconstituido como paso previo a la administración.

La publicación EP 0 073 371 describe preparaciones que pueden ser administradas por vía intravenosa con inmunoglobulinas, que presentan un valor del pH comprendido entre 3,5 y 5,0 para la estabilización. Estos valores bajos del pH conducen sin embargo a reacciones no deseadas de incompatibilidad en el punto de la inyección.

La publicación US 6,171,586 B1 divulga el empleo de un tampón de acetato con un pH comprendido entre 4,48 y 5,5, de un surfactante y de un poliol en una formulación acuosa de anticuerpos, excluyéndose el NaCl para la isotonización. Como consecuencia de la ausencia de isotonización pueden presentarse de igual modo reacciones de incompatibilidad en el punto de la inyección.

Como ejemplos de otras formulaciones con anticuerpos especiales pueden ser citadas, en este punto, las publicaciones. EP 0 280 358, EP 0 170 983 y US 5,945,098.

En este caso, la publicación EP 0 280 358 describe la adición de dextrano a una solución de anticuerpo para llevar a cabo la estabilización contra determinadas hormonas, habiéndose alcanzado una estabilidad durante más de nueve meses.

La publicación EP 0 170 983 describe la estabilización de un anticuerpo monoclonal termolábil por medio de un calentamiento junto con ovalbúmina hidrolizada, con lo cual era estable todavía el anticuerpo al cabo de un almacenamiento durante 7 días a 45ºC. Sin embargo, no es deseable la adición de proteínas de otras especies a las formulaciones que deben ser administradas, que están previstas para ser administradas por vía parenteral, como consecuencia de la problemática relacionada con las mismas, especialmente debido a su posible antigenicidad.

La publicación US 5,945,098 divulga el empleo de glicina, de polisorbato 80 y de polietilenglicol para llevar a cabo la estabilización de una formulación acuosa de inmunoglobulina G.

La publicación DE 10133394 Al divulga el empleo de un tampón de fosfato en el intervalo comprendido entre pH 6 y pH 8 y de un éster de polioxietilensorbitán de ácidos grasos para llevar a cabo la estabilización de una solución acuosa del anticuerpo Cetuximab. Aún cuando, de este modo, se reduce claramente la formación de agregados visibles, se perjudica claramente la estabilidad química, especialmente bajo condiciones de estrés. Por otra parte, la formulación no presenta estabilidad frente al estrés térmico (extremo), por ejemplo con ocasión del almacenamiento durante un período de tiempo prolongado a 40ºC.

La publicación DE10163459 divulga composiciones farmacéuticas, que representan liofilizados constituidos por una solución acuosa o por una solución de principio activo/tampón/sal. Esta solución contiene los siguientes componentes: a) anticuerpos contra los receptores del factor de crecimiento epidérmico (Cetuximab), b) un aminoácido básico, ácido o neutro, en concentraciones de 100 mmoles (véase el ejemplo 6), c) tensioactivos (ésteres de polioxietilen-sorbitán de ácidos grasos, monooleato de polioxietilen-sorbitán (0,01% en el ejemplo 4), monolaurato de polioxietilen-sorbitán, polímeros de polioxietileno-polioxipropileno), d) posiblemente agentes para la isotonización, tal como el cloruro de sodio, e) tampones y f) azúcares o aminoazúcares. La estabilidad al almacenamiento de los liofilizados fue acrecentada, permaneciendo invariablemente...

1. Preparación acuosa, que está constituida por un disolvente, que está constituido, al menos en parte, por agua, un anticuerpo anti-EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico -epidermal growth factor receptor-), un tampón, un aminoácido, un tensioactivo y cloruro de sodio como agente para la isotonización.

2. Preparación según la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo es el Cetuximab o el EMD 72000 o bien es uno de los análogos de anticuerpos murinos, humanizados o quiméricos, correspondientes a los mismos.

3. Preparación según la reivindicación 2, caracterizada porque el anticuerpo es Cetuximab o EMD 72000.

4. Preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el tampón está constituido por una o varias sales de los citratos, por una o varias sales de los acetatos, por una o varias sales de la histidina, por una o varias sales de los succinatos, por una o varias sales de los malatos, por una o varias sales de los fosfatos o por una o varias sales de los lactados y/o por sus respectivos ácido(s) o bien base(s) libre(s), o está constituido por una mezcla formada por una o por varias de las diversas sales y/o por su(s) ácido(s) o bien por su(s) base(s).

5. Preparación según la reivindicación 4, caracterizada porque el tampón está constituido por una o varias sales de los citratos y/o por su ácido libre, por una o varias sales de los acetato y/o por su ácido libre o está constituido por la L-histidina y/o por una sal de adición de ácido de la misma.

6. Preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el aminoácido es la L-arginina, la glicina o la L-metionina.

7. Preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el tensioactivo es un éster de polietileno-sorbitán de ácidos grasos o es un copolímero de polioxietileno-polioxipropileno.

8. Preparación según la reivindicación 7, caracterizada porque el tensioactivo, que está constituido por los ésteres de polioxietilensorbitán de ácidos grasos, es el monooleato de polioxietilen(20)-sorbitán o el monolaurato de polioxietilen(20)-sorbitán.

9. Preparación según la reivindicación 7, caracterizada porque el tensioactivo es Poloxamer 407.

10. Preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque como disolvente está contenida agua o una mezcla constituida por agua con alcoholes.

11. Preparación según la reivindicación 10, caracterizada porque como alcohol está contenido el etanol, el propanol, el propanodiol y/o el glicerol.

12. Preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque ésta presenta un valor del pH comprendido entre 5 y 7, de manera preferente presenta un valor comprendido entre pH 5,2 hasta pH 6,0.

13. Preparación según la reivindicación 12, caracterizada porque ésta presenta un valor del pH de aproximadamente 5,5.

14. Preparación acuosa, que contiene aproximadamente 5 mg/ml de Cetuximab o de EMD 72000, aproximadamente 10 mmol/l de tampón de citrato o de tampón de histidma, aproximadamente 100 mmol/l de glicina, de L-arginina o de L-metionina, aproximadamente 100 mmol/l de cloruro de sodio así como aproximadamente un 0,01% de monooleato de polioxietilen(20)-sorbitán con un valor del pH de 5,5.

15. Procedimiento para la obtención de una preparación farmacéutica según una o varias de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque se aporta una preparación acuosa, que contiene el anticuerpo anti-EGFR, a uno de los productos auxiliares citados.

16. Empleo de la preparación según una o varias de las reivindicaciones 1 a 14 para la obtención de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades tumorales.