PEPTIDOS DE QUIMIOCINAS, VARIANTES, DERIVADOS Y ANALOGOS, SU UTILIZACION EN METODOS PARA INHIBIR O AUMENTAR UNA RESPUESTA INFLAMATORIA.

Un péptido aislado y purificado que comprende no más de 30 residuos de aminoácidos y que comprende una variante peptídica del péptido de quimiocina MCP-1,

donde la variante peptídica comprende cualquiera de las SEQ ID Nos. 1, 7 a 11, 13 y 14, o una versión de secuencia D inversa cíclica (CRD) de dicha variante peptídica, o donde dicha variante peptídica es Cys-Leu-Asp-Pro-Lys-Gln-Lys-Trp-Ile-Gln, y donde el péptido inhibe la actividad de al menos una quimiocina nativa

Péptidos de quimiocinas, variantes, derivados y análogos, su utilización en métodos para inhibir o aumentar una repuesta inflamatoria.

El reclutamiento de macrófagos/monocitos cumple un papel en la morbilidad y mortalidad de un amplio espectro de enfermedades, que incluyen enfermedades autoinmunes, enfermedades granulomatosas, enfermedades alérgicas, enfermedades infecciosas, osteoporosis y enfermedad arterial coronaria. Por ejemplo, en la aterosclerosis durante la formación temprana de la lesión lipídica, los monocitos circulantes se adhieren al endotelio activado que recubre la placa incipiente. En condiciones apropiadas, los monocitos migran posteriormente a la íntima en desarrollo. En la íntima, los macrófagos acumulan lipoproteínas y excretan un exceso de proteasas respecto de los inhibidores de proteasas. Si las lipoproteínas se oxidan, estas son tóxicas para los macrófagos, lo que produce la muerte de macrófagos y un incremento de la reserva de lípidos extracelulares, necróticos e inestables. Un exceso de proteasas produce pérdida de matriz extracelular y desestabilización de la placa fibrosa. La inestabilidad de la placa es la causa aguda del infarto de miocardio.

Se han identificado muchas moléculas que son necesarias para el reclutamiento de monocitos y otros tipos de células inflamatorias. Estas moléculas representan blancos para la inhibición del reclutamiento de monocitos. Una clase de tales moléculas es la de las moléculas de adhesión, por ejemplo receptores para monocitos. Otra clase de moléculas incluyen mediadores inflamatorios, tales como TNF-a y moléculas relacionadas, las interleuquinas, por ejemplo IL-1ß y las quimiocinas, por ejemplo la proteína de quimioatracción de monocitos-1 (MCP-1).

Como resultado, los agentes que modulan la actividad de las quimiocinas probablemente son útiles para prevenir y tratar una amplia gama de enfermedades. Por ejemplo, Rollins et al. (Patente Estadounidense No. 5.459.128) describen en general análogos de MCP-1 que inhiben la actividad quimioatrayente de monocitos de la MCP-1 endógena. Se describen análogos que son efectivos para inhibir la MCP-1 endógena como análogos que están modificados en la tirosina 28, arginina 24, aspartato 3 y/o en aminoácidos entre los residuos 2-8 de MCP-1. En particular, Rollins et al. afirman que la "inhibición exitosa de la actividad se encuentra donde MCP-1 está modificada en una o más de las siguientes maneras: a) la tirosina 28 está sustituida por aspartato, b) la arginina 24 está sustituida por fenilalanina, c) el aspartato 3 está sustituido por alanina y/o d) la secuencia de aminoácidos 2-8 está suprimida" (col. 1, líneas 49-54). La supresión de los aminoácidos 2-8 de MCP-1 ("MCP-1(?2-8)") produce un polipéptido que es inactivo, es decir MCP-1(?2-8) no es quimioatrayente (col. 5, líneas 22-23). El único inhibidor efectivo de MCP-1 descrito en Rollins et al. es MCP-1(?2-8).

Estudios recientes sugieren que MCP-1(?2-8) exhibe un efecto negativo dominante, es decir, forma heterodímeros con MCP-1 de tipo salvaje que no pueden producir un efecto biológico (Zhang et al., J. Biol. Chem., 269 15918 (1994); Zhang et al., Mat. Cell. Biol., 15, 4851 (1995)). En consecuencia, MCP-1(?2-8) no exhibe propiedades de un antagonista de receptor clásico. Más aún, es poco probable que MCP-1(?2-8) sea muy útil para la inhibición de la actividad de MCP-1 in vivo, ya que MCP-1(?2-8) es un polipéptido grande con propiedades farmacodinámicas no deseables. Además, no se sabe si MCP-1(?2-8) es activa como inhibidor negativo dominante de otras quimiocinas asociadas con la inflamación.

En consecuencia, es necesario identificar agentes que inhiban o aumenten el reclutamiento de macrófagos y/o monocitos inducidos por quimiocina y que tengan propiedades farmacodinámicas deseables. Más aún, es necesario identificar agentes que inhiban o aumenten las actividades inducidas por quimiocinas de otros tipos celulares, tales como linfocitos. Además, se necesita identificar agentes que sean inhibidores pan-selectivos de quimiocinas.

La Patente Estadounidense 5.079.228 describe péptidos cuya secuencia de aminoácidos deriva de la parte N-terminal y C-terminal del factor activador de neutrófilos nativo (NAF o IL-8). Estos péptidos son antagonistas de la NAF nativa. Uno de tales fragmentos es NAF (44-72). Otros de tales fragmentos es el tripéptido WVQ.

Síntesis de la invención

La invención proporciona una variante peptídica de quimiocina aislada y purificada. Un agente terapéutico de la invención inhibe la actividad de al menos una quimiocina.

El alcance de la invención está definido por las reivindicaciones adjuntas.

Una realización preferida de la invención es un péptido 3 de quimiocina CC purificado, por ejemplo un péptido derivado de MCP-1 que corresponda a aproximadamente el tramo que va desde el resto 46 a aproximadamente el resto 67 de MCP-1 madura ("péptido 3[MCP-1]"), una variante, un análogo o uno de sus derivados. Se contempla que el péptido 3 de quimiocina, una variante, un análogo o uno de sus derivados es un antagonista de receptores de quimiocinas, si bien estos agente terapéuticos pueden ejercer su efecto por un mecanismo diferente, por ejemplo por inhibición de la vía de ácido araquidónico (por ejemplo, inhibición de síntesis o estabilidad de leucotrienos, tromboxanos o prostaglandinas) o por elevación de los niveles de TGF-beta o por más de un mecanismo.

Un péptido 3 preferido de la invención es un compuesto de fórmula (I):

[[(X²)(X³)-C-(X)-(X⁷)-P]_a-[(X⁴)-(Z-)-(X⁵)-W-(X¹)-(X⁶)_b]_c

donde X² es E, Q, D, N, L, P, I o M, donde X³ es I, V, M, A, P, norleucina o L, donde X es A, L, V, M, P, norleucina o I, donde X⁴ es K, S, R, R, Q, N o T, donde Z es Q, K, E, N, R, I, V, M, A, P, norleucina o L, donde X⁷ es D o P, donde X⁵ es K, E, R, S, Q, D, T, H o N, donde X¹ es V, L, M, P, A, norleucina o I, donde X⁶ es Q, N, K o R, donde a es 0-6, donde b es 0-6, y donde c es 1-6, con la salvedad de que a y b no pueden ser O. Las letras de las fórmulas (I)-(II) que no son X, Y o Z representan residuos peptidilo como se muestra en la Figura 13. Un péptido 3 más preferido de la invención es un compuesto de fórmula (I):

[[(X²)-(X³)-C-(X)-D-P]_a[(X⁴)-(Z)-(X⁵)-W-(X⁷)-(X⁶)_b]_c

donde X² es E, Q o M, donde X³ es I, V o L, donde X es A, L o I, donde X⁴ es K, S o T, donde Z es Q, K, E o L, donde X⁵ es K, E, R, S o T, donde X¹ es V o I, donde X⁶ es Q o R, donde a es 0-6, donde b es 0-6, y donde c es 1-6, con la salvedad de que a y b no pueden ser ambos 0.

Inclusive otro péptido 3 preferido de la invención es un compuesto de fórmula (II):

[[(X⁴)-(Z)-(X⁵)]_a-[W-(X¹)-(X⁶)_b]_c

donde X⁴ es K, S o T, donde Z es Q, K, E o L, donde X⁵ es K, E, R, S o T, donde X¹ es V o I, donde X⁶ es Q o R, donde a es 0-6, donde b es 0-6, y donde c es 1-6, con la salvedad de que a y b no pueden ser ambos 0.

Otro péptido 3 preferido de la invención es un compuesto de fórmula (II);

[[(X⁴)-(Z)-(X⁵)]_a-[W-(X¹)-(X⁶)_b]_c

donde X⁴ es K, S, R, R, Q, N o T, donde Z es Q, K, E, N, R, I, V, M, A, P, norleucina o L, donde X⁵ es K, E, R, S, Q, D, T, H o N, donde X¹ es V, L, M, P, A, norleucina o I, donde X⁶ es Q, N, K o R, donde a es 0-6, donde b es 0-6, y donde c es 1-6, con la salvedad de que a y b no pueden ser ambos 0.

Un péptido 3 más preferido de la invención es un compuesto de fórmula (X):

(X⁸)-(X)-D-(X²)-(X⁴)-(Z)-(X⁵)-W-(X¹)-Q-(X⁷)

donde X es A, L, V o I, donde X² es P, G o L, donde X⁴ es K, T, R o N,

donde Z es Q, K, A o L, donde X⁵ es K,...

1. Un péptido aislado y purificado que comprende no más de 30 residuos de aminoácidos y que comprende una variante peptídica del péptido de quimiocina MCP-1, donde la variante peptídica comprende cualquiera de las SEQ ID Nos. 1, 7 a 11, 13 y 14, o una versión de secuencia D inversa cíclica (CRD) de dicha variante peptídica, o donde dicha variante peptídica es Cys-Leu-Asp-Pro-Lys-Gln-Lys-Trp-Ile-Gln, y donde el péptido inhibe la actividad de al menos una quimiocina nativa.

2. Un péptido definido de acuerdo con la reivindicación 1 para usar como medicamento.

3. Un péptido definido de acuerdo con la reivindicación 1 para usar como medicamento para el tratamiento de una indicación asociada con actividad inducida por quimiocinas.

4. Un péptido definido de acuerdo con la reivindicación 1 para usar en la inhibición de la actividad de más de una quimiocina.

5. Un péptido definido de acuerdo con la reivindicación 1 para usar como medicamento para modular la actividad inducida por quimiocinas de células hematopoyéticas en un sitio fisiológico preseleccionado, y donde dicho péptido está unido a un resto localizador de sitio.

6. Una composición farmacéutica que comprende un péptido definido de acuerdo con la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.