Procedimiento de obtención de la vacuna anti-Edwardsiella tarda (EdT) para la prevención de la enfermedad edwardsielosis del rodaballo,

cultivado en agua de mar producida por el microorganismo Edwardsiella tarda. El procedimiento se caracteriza por incluir en la vacuna las células bacterianas inactivadas con formol de una cepa de Edwardsiella tarda aislada en Galicia, cepa depositada como CECT 7215

Procedimiento de obtención de la vacuna anti-Edwardsiella tarda (EdT) para la prevención de la enfermedad edwardsielosis del rodaballo.

La edwardsielosis, producida por Edwardsiella tarda fue diagnosticada por primera vez en rodaballo cultivado en el año 1994. Sin embargo, desde esa fecha hasta el año 2006 no se han vuelto a describir brotes de esta enfermedad en instalaciones dedicadas al cultivo de esta especie. En estos dos últimos años (2005-2006) este patógeno se aisla a partir de rodaballos enfermos en diferentes áreas geográficas de Europa y hoy en día se considera un patógeno emergente en la acuicultura marina (Castro y col., 2006: Journal of Fish Diseases, 29: 541-547). Las cepas de Edwardsiella tarda aisladas de rodaballo son muy homogéneas tanto fenotípica como antigénicamente, no pudiendo establecerse biotipos ni serotipos. Sin embargo, mediante métodos moleculares se ha detectado la existencia de dos líneas clonales diferentes dentro de éstos aislados (Castro y col., 2006: op. cited. Aunque la quimioterapia puede ser efectiva en el control de esta enfermedad, se necesitan desarrollar vacunas efectivas que nos permitan prevenir y controlar las mortalidades producidas por este patógeno (Castro y col., 2006: Congreso Microbiología del medio Acuático, Valencia).

Preparación

A partir de preinóculos en fase logarítmica de crecimiento se inoculan matraces de dos litros conteniendo un litro de medio de cultivo caldo triptona de soja (TSB: Tryptone Soy Broth: triptona 17 gr/L; peptona de soja 3 gr/L; glucosa 2,5 gr/L; fosfato bipotásico 2,5 gr/L; cloruro sódico 10 gr/L; pH 7,3 pm 0,2).

La incubación se realiza a 25ºC durante 48 horas. Cuando el cultivo alcanza una densidad óptica de 1 (A₅₅₀: Absorbancia₅₅₀)(aproximadamente 10¹⁰ células/mL), se le añade formol a una concentración final de 0,35% para matar las bacterias, y se mantiene durante tres horas más en agitación, al cabo de las cuales se transfiere a 4ºC.

El control de esterilidad se lleva a cabo sembrando la preparación vacunal en placas de TSA y en tubos de tioglicolato, incubando durante 72 horas a 25 y 37ºC, respectivamente.

El control de especificidad se realiza mediante aglutinación en portaobjetos, utilizando como antígeno las células enteras empleadas en la fabricación de la vacuna.

La vacuna debe ser conservada a 4ºC hasta su utilización.

Modo de administración

Esta vacuna debe administrarse por inyección intraperitoneal. Para ello, se inoculan los peces con 0,1-0,2 mL/pez (dependiendo del peso del pez) de preparación vacunal sin diluir.

La cepa de Edwardsiella tarda empleada en esta vacuna es RM 288.1, depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo como CECT 7215 aislada a partir del riñón de rodaballo enfermo en Galicia.

La eficacia de esta vacuna fue evaluada en rodaballo tanto a escala de laboratorio como a escala de campo. La potencia, expresada como Porcentaje de Supervivencia Relativa (RSP) ha sido superior al 80% al cabo de tres meses.

1. Cepa RM288.1 de Edwardsiella tarda, aislada de una epizootia ocurrida en Galicia (España), depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con el número de accesión CECT 7215.

2. Procedimiento de obtención de la vacuna anti-Edwardsiella tarda (EdT) caracterizado por el crecimiento de las células bacterianas de la cepa RM288.1, CECT 7215, en cultivos líquidos de medio caldo triptona soja (TSB), por su inactivación con formol a una concentración final del 0,35% durante 4 horas a temperatura ambiente y porque la concentración final de células bacterianas en la bacterina es de 10¹⁰ células/mL.

3. Vacuna anti-Edwardsiella tarda (EdT) obtenida por el procedimiento de la reivindicación 2, para la prevención de la enfermedad edwardsielosis en rodaballo cultivado en agua de mar, y para administrar por inyección intraperitoneal sin diluir.