Molécula de ácido nucleico aislada que codifica para una proteína Fcε

Rα que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico de la cadena alfa del receptor Fc épsilon equino, a proteínas codificadas por tales moléculas de ácido nucleico, a anticuerpos producidos contra tales proteínas y a inhibidores de tales proteínas. La presente invención también se refiere a métodos para detectar IgE usando tales proteínas y anticuerpos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El diagnóstico de una enfermedad y la determinación de la eficacia del tratamiento son herramientas importantes en medicina. La producción de anticuerpos IgE en un animal puede ser indicativa de enfermedad incluyendo, por ejemplo, alergia, enfermedad atópica, síndrome de hiper IgE, infecciones parasitarias internas y neoplasia de células B. Además, la detección de la producción de IgE en un animal tras un tratamiento es indicativa de la eficacia del tratamiento, tal como cuando se usan tratamientos destinados a alterar la producción de IgE.

La estimulación inmunológica puede estar mediada por anticuerpos IgE cuando la IgE se compleja con receptores Fc épsilon. Los receptores Fc épsilon se encuentran en la superficie de ciertos tipos de células, tales como mastocitos. Los mastocitos almacenan mediadores biológicos incluyendo histamina, prostaglandinas y proteasas. La liberación de estos mediadores biológicos se desencadena cuando los anticuerpos IgE se complejan con los receptores Fc épsilon en la superficie de una célula. Se producen síntomas clínicos de la liberación de los mediadores biológicos en el tejido de un animal.

El descubrimiento de la presente invención incluye una proteína de cadena alfa del receptor Fc épsilon equino (FcR) novedosa y el uso de una proteína de este tipo para detectar la presencia de IgE en una composición que contiene la supuesta IgE; para identificar inhibidores de respuestas biológicas mediadas por una proteína FcR equina; y como compuesto terapéutico para prevenir o tratar síntomas clínicos que

resultan de las respuestas biológicas mediadas por FcR equino.

Investigadores anteriores han dado a conocer la secuencia de ácido nucleico para: la cadena alfa de FcR humano (Kochan et al., Nucleic Acids Res. 16: 3584,1988; Shimizu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 1907-1911, 1988; y Pang et al., J. Immunol. 151: 6166-6174, 1993); la cadena beta de FcR humano (Kuster et al., J. Biol. Chem. 267: 12782-12787, 1992); la cadena gamma de FcR humano (Kuster et al., J. Biol. Chem. 265: 6448-6452, 1990); y la cadena alfa de FcR canino (número de registro de GenBankTM D16413). Aunque ya en 1988 se conocían las subunidades de FcR humano, nunca se han usado para identificar un FcR equino. De manera similar, aunque se conoce la cadena de FcR canino desde 1993, nunca se ha usado para identificar un FcR equino. Además, la determinación de las secuencias del receptor Fc épsilon humano y canino no indica, sugiere o prevé la clonación de un gen de FcR novedoso de una especie diferente, en particular, de una especie equina. Investigadores anteriores han encontrado un bajo grado de similitud entre FcR de rata, ratón y humano (Ravtech et al., Ann. Rev. Immunol. vol. 9, págs. 457-492, 1991). Por tanto, dado este bajo grado de similitud de secuencias, parecería sólo “obvio tratar” de obtener una proteína y molécula de ácido nucleico de FcR equino.

La publicación de solicitud de patente internacional WO 89/05352 pretende dar a conocer una secuencia de ADNc que codifica para la subunidad  del receptor de superficie de IgE de mastocitos humanos. Esta solicitud se refiere además a publicaciones anteriores dentro de esta área (Metzger et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:419; Ishizaka et al., 1977, J. Immunol. 199:1589; Isersky et al., 1978, J. Immunol. 121:549;

Froese, 1984, Prog. Allergy 34:142; Lewis y Austen, 1981, Nature 293:103).

Por tanto, se necesitan en la técnica los productos y procedimientos de la presente invención que proporcionarán la detección específica de IgE, en particular de IgE equina, y el tratamiento de la enfermedad mediada por el receptor Fc épsilon.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un producto y a un procedimiento novedosos para detectar IgE y a una composición terapéutica para proteger animales de respuestas biológicas mediadas por el receptor Fc épsilon. Según la presente invención se proporcionan proteínas FcR equinas y mimotopos de las mismas; moléculas de ácido nucleico de FcR equino, incluyendo las que codifican para tales proteínas; anticuerpos producidos contra tales proteínas FcR equinas (es decir, anticuerpos antiFcR equino); y otros compuestos que inhiben la capacidad de la proteína FcR equina para formar un complejo con IgE (es decir, compuestos inhibitorios o inhibidores).

La presente invención también se refiere a métodos para obtener tales proteínas, mimotopos, moléculas de ácido nucleico, anticuerpos y compuestos inhibitorios. La presente invención también se refiere a composiciones terapéuticas que comprenden tales proteínas, mimotopos, moléculas de ácido nucleico, anticuerpos y/o compuestos inhibitorios, así como al uso de tales composiciones terapéuticas con respecto a las respuestas biológicas mediadas por el receptor Fc épsilon.

Una realización de la presente invención es una molécula de ácido nucleico aislada que codifica para una proteína FcR equina. La proteína FcR equina preferiblemente incluye: proteínas que comprenden las secuencias de aminoácidos SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 12; y proteínas codificadas por variantes alélicas de las moléculas de ácido nucleico que codifican para una proteína que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácidos. Las moléculas de ácido nucleico de

FcR equino particularmente preferidas incluyen: moléculas de ácido nucleico que comprenden las secuencias de ácido nucleico SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 11 y moléculas de ácido nucleico que comprenden variantes alélicas de las moléculas de ácido nucleico que comprenden las secuencias de ácido nucleico SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 11.

La presente invención también incluye una proteína FcR equina aislada. Una proteína FcR equina preferida está codificada por una molécula de ácido nucleico que hibrida en condiciones de hibridación rigurosas con una secuencia de ácido nucleico incluyendo SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 8. Las proteínas FcR equina particularmente preferidas incluyen al menos una de las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 12.

La presente invención también se refiere a moléculas recombinantes, virus recombinantes y células recombinantes que incluyen moléculas de ácido nucleico de FcR equino de la presente invención. También se refiere a métodos para producir tales moléculas de ácido nucleico, moléculas recombinantes, virus recombinantes y células recombinantes.

La presente invención también incluye métodos de detección y kits que detectan IgE. Una realización de la presente invención es un método para detectar IgE que comprende: (a) poner en contacto una molécula de FcR equino aislada con una composición que contiene la supuesta IgE en condiciones adecuadas para la formación de un complejo de molécula de FcR:IgE; y (b) determinar la presencia de IgE detectando el complejo de molécula de FcR:IgE, indicando la presencia del complejo de molécula de FcR:IgE la presencia de IgE. Una molécula de FcR equino preferida es una en la que un grupo de hidrato de carbono de la molécula de FcR equino está conjugado con biotina.

La presente invención también incluye un kit para realizar los métodos de la presente invención. Una realización es un kit para detectar IgE que comprende una proteína FcR equina y un medio para detectar IgE.

También se incluye un método para identificar un compuesto que interfiere con la formación de un complejo entre la proteína FcR equina y la IgE, comprendiendo el método: (a) poner en contacto una proteína FcR...

1. Molécula de ácido nucleico aislada que codifica para una proteína FcR que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ

ID NO:12.

2. Molécula de ácido nucleico aislada seleccionada del grupo que consiste en una molécula de ácido nucleico que comprende a) una secuencia de ácido nucleico al menos el 90% idéntica a una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:11, y que codifica para una proteína

FcR;y

b) una secuencia de ácido nucleico al menos el 90% idéntica a una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 y SEQ ID NO:8, que hibrida en condiciones rigurosas con una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína FcR.

3. Molécula de ácido nucleico aislada que codifica para una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12.

4. Molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8 y SEQ ID NO:11.

5. Proteína FcR aislada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12.

6. Método para producir una proteína FcR, comprendiendo dicho método poner en cultivo una célula transformada con una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12.

7. Método para detectar IgE que comprende:

i) poner en contacto una proteína aislada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12 con una composición que contiene la supuesta IgE en condiciones adecuadas para la formación de un complejo de proteína:IgE ;y

ii) determinar la presencia de IgE detectando dicho

complejo de proteína:IgE, indicando la presencia de dicho

complejo de proteína:IgE la presencia de IgE.

8. Kit para detectar IgE que comprende una proteína FcR que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12, y un medio para detectar IgE.

9. Método para identificar un compuesto que interfiere con la formación de un complejo entre una proteína FcR que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90%

idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12, e IgE, comprendiendo dicho método:

(a) poner en contacto dicha proteína con un supuesto compuesto inhibidor en condiciones en las que, en ausencia de dicho compuesto, dicha proteína forma un complejo con IgE; y

(b) determinar si dicho supuesto compuesto inhibidor inhibe dicha formación de complejo.

10. Kit de prueba para identificar un compuesto que puede interferir con la formación de un complejo entre una proteína e IgE, comprendiendo dicho kit de prueba una

proteína FcR aislada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12 que puede complejarse con la IgE y un medio para determinar la magnitud de la interferencia de la formación de dicho complejo en presencia de un supuesto compuesto inhibidor.

11. Composición terapéutica que, cuando se administra a un animal, reduce las respuestas biológicas mediadas por el receptor Fc épsilon, comprendiendo dicha composición

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terapéutica un compuesto terapéutico seleccionado del grupo que consiste en: una proteína FcR aislada que comprende una secuencia de aminoácidos al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ 5 ID NO:7 o SEQ ID NO:12;

una secuencia de ácido nucleico al menos el 90%

idéntica a una secuencia de ácido nucleico seleccionada del

grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6

y SEQ ID NO:11, y que codifica para una proteína FcR;

10 una secuencia de ácido nucleico al menos el 90% idéntica a una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5 y SEQ ID NO:8, que hibrida en condiciones rigurosas con una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína

15 FcR; y un anticuerpo aislado que se une específicamente a una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica a SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:7 o SEQ ID NO:12.