Un agente profiláctico o terapéutico para el tratamiento o la prevención de la insuficiencia cardíaca 5 que comprende un nucleótido antisentido,

donde el nucleótido antisentido comprende nucleótidos complementarios a 12 o más nucleótidos contiguos en la secuencia de nucleótidos mostrada como el SEQ ID NO: 5, 19, 20 o 21

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a agentes profilácticos o terapéuticos para la insuficiencia 5 cardíaca y su utilización para el tratamiento de la

insuficiencia cardíaca.

TÉCNICA ANTERIOR

10 La insuficiencia cardiaca crónica es una enfermedad en la cual el corazón no puede mantener un gasto cardíaco adecuado a diversos órganos debido a la reducción de la contractilidad miocárdica, y las terapias convencionales para ello incluyen el uso de estimulantes cardíacos que aumentan la contractilidad miocárdica como los fármacos de digital y xantina. Sin embargo, se ha demostrado que estos fármacos alteran adversamente la prognosis vital como consecuencia de un mayor consumo de energía miocárdica durante la administración prolongada. Recientemente, las terapias con bloqueadores β o inhibidores de la ACE que han prevalecido reducen la sobrecarga del corazón causada por un exceso de activación del sistema nervioso simpático o del sistema renina-angiotensina en pacientes con insuficiencia cardíaca. Sin embargo, la prognosis vital a largo plazo de los pacientes con insuficiencia cardiaca sigue siendo mala y sería deseable desarrollar un fármaco para tratar la insuficiencia cardíaca basado en un nuevo mecanismo.

30 El documento WO 0035473 describe una amplia gama de anticuerpos, moléculas antisentido, inhibidores de la expresión génica e inhibidores de proteínas, todos los cuales se consideraron relacionados con OSF2, con lo el que estas proteínas son consideradas útiles para un grupo de enfermedades, seleccionadas entre enfermedades

cardíacas, renales e inflamatorias.

Los datos experimentales relativos a OSF2 mostrados en D1 son datos in vitro, mediante los cuales la expresión de OSF2 en los miocitos cardíacos tratados con estímulos hipotróficos o fibrosis aumentó en comparación con las células no tratadas.

Por lo tanto, la presente invención tiene por objeto proporcionar un agente profiláctico o terapéutico novedoso para la insuficiencia cardíaca o similar basado en un mecanismo diferente de los ya existentes. Más concretamente, la presente invención tiene por objeto proporcionar un fármaco para prevenir o tratar la insuficiencia cardíaca mediante la inhibición del empeoramiento de la enfermedad cardíaca inducida por el gen o proteína OSF-2, y su uso.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Sobre la hipótesis de que la expresión de varios genes o proteínas en el corazón varía con el progreso de la patología de la insuficiencia cardíaca y que estas variaciones están estrechamente relacionadas con la patología de la insuficiencia cardíaca, los autores de la presente invención realizaron búsquedas de los genes cuyo nivel de expresión varía con el progreso de la patología de la insuficiencia cardíaca mediante la utilización de modelos de insuficiencia cardíaca apropiados. Como resultado, los autores de la presente invención encontraron que la expresión del gen OSF-2 conocido como un gen expresado específicamente en osteoblastos aumenta con el progreso de la insuficiencia cardíaca. Estudios posteriores revelaron que dicho gen o proteína influye en el empeoramiento de la insuficiencia cardíaca, lo que condujo a los autores de la presente invención a completar la presente invención.

En el desarrollo de agentes terapéuticos para la insuficiencia cardíaca, se utilizan varios modelos patológicos, y especialmente en el escrutinio inicial, los modelos de rata son de uso frecuente debido a la comodidad de preparación de los modelos o su fácil análisis. En otras palabras, los modelos de rata se aceptan como modelos que reflejan patologías humanas a pesar de que individualmente tienen sus limitaciones.

Las ratas de modelo patológico conocido de insuficiencia cardíaca son las ratas aortoestenóticas, las ratas con derivación arteriovenosa, las ratas con ligadura de arterias coronarias, las ratas espontáneamente hipertensas (SHR), las ratas Dahl sensibles a la sal, etc. Las ratas Dahl son ratas de la cepa Sprague-Dawley separadas en ratas sensibles a la sal (Dahl-S) susceptibles a la hipertensión y ratas resistentes a la sal (Dahl-R) resistentes a la hipertensión en la tercera generación de cruzamiento mientras eran criadas con una dieta alta en sal al 8%. Kihara et al. de la Universidad de Kyoto demostraron que las ratas Dahl-S, criadas con una dieta alta en sal al 8% de 6 semanas de edad desarrollaron hipertrofia ventricular izquierda compensatoria, luego dilatación ventricular izquierda acompañada por insuficiencia de contracción, es decir, insuficiencia cardiaca descompensada, y finalmente murieron de congestión pulmonar (Am. J. Physiol., 267, H2471-2482 (1994)). Los autores de la presente invención seleccionaron ratas Dahl sensibles a la sal como modelos patológicos de insuficiencia cardiaca, ya que se pueden preparar sin ninguna técnica especial y pueden desarrollar una insuficiencia cardiaca a corto plazo y también pueden diferenciarse claramente entre la etapa de hipertrofia compensadora y la fase de insuficiencia cardiaca descompensada en cada individuo y muestran un proceso de inicio similar al de la insuficiencia cardíaca hipertensiva humana.

Los métodos conocidos para la detección de un gen con la expresión variada en condiciones patológicas incluyen las técnicas de sustracción, presentación diferencial, transferencia puntual y micromatrices. En la presente invención, la técnica de sustracción fue utilizada para acertar en la detección de genes cuya expresión varía en la transición de la fase de hipertrofia cardíaca a la fase de insuficiencia cardíaca. Incluyeron un gen OSF-2 de rata novedoso que demostró tener una alta homología con el gen OSF-2 de ratón que había sido referido como un factor específico de osteoblastos.

El gen OSF-2 fue aislado e identificado como un gen expresado específicamente en la línea celular de osteoblastos de ratón MC3T3-E1 (Biochem. J. 294, 271-278, 1993, JPA 1993/268982), y se informó que tenía actividad promotora de la adherencia en las células osteoblásticas

(J. Bone. Miner. Res. 14, 1239-1249, 1999). Se ha informado sobre un incremento en la expresión del gen OSF-2 en un análisis realizado mediante presentación diferencial en modelos de lesión de aorta abdominal en conejos (J. Hum. Genet. 43, 9-13, 1998). Informes recientes también mostraron que la expresión de 30 o más genes incluyendo OSF-2 variaba en la fase de hipertrofia cardiaca en experimentos con ratones (J. Mol. Cell. Cardio., 32, 805-815, 2000) y que la expresión de 200 o más genes incluyendo OSF-2 variaba en un modelo de infarto de miocardio de rata (Circ. Res., 86, 939-945, 2000).

Sin embargo, no se ha conocido hasta ahora que se induce una mayor expresión con el progreso de la patología de la insuficiencia cardiaca después de la hipertrofia cardiaca o el infarto de miocardio, y nada se ha sabido especialmente a cerca de si el gen OSF-2 o la proteína OSF-2 actúan como un factor que promueve o inhibe el progreso de la patología con el progreso de la patología de la insuficiencia cardíaca.

Los autores de la presente invención piensan que un agente terapéutico nuevo para la insuficiencia cardíaca se podría desarrollar mediante la determinación de la relación de la expresión de este gen en el corazón con la patología de la insuficiencia cardíaca, y completó la presente invención después de muchos estudios.

Inicialmente, se estudió la expresión del gen OSF-2 con el progreso de la patología de la insuficiencia cardíaca usando ratas aortoestenóticas, ratas con derivación arteriovenosa y ratas espontáneamente hipertensas (SHR) para confirmar que la variación en el gen OSF-2 no es específica de ratas Dahl del modelo de insuficiencia cardíaca. Como resultado, todos los modelos probados mostraron un aumento de expresión génica similar, lo que sugiere que dichas variaciones pueden ser un fenómeno universal en la patología de la insuficiencia cardíaca.

Luego, el gen OSF-2 se introdujo en el corazón de rata a fin de examinar la acción mostrada por el gen OSF2 en el corazón. Al principio, se aisló nuevamente un gen OSF-2 de rata completo, debido a que el gen OSF-2 de rata era hasta ahora desconocido. El gen fue insertado en un vector de expresión adecuado, y se introdujo en el corazón de rata. La ecocardiografía y las pruebas hemodinámicas mostraron que la patología de tipo miocardiopatía congestiva se indujo en ratas en las que se introdujo el gen OSF-2 como se demuestra mediante el adelgazamiento de la pared ventricular...

1. Un agente profiláctico o terapéutico para el tratamiento o la prevención de la insuficiencia cardíaca que comprende un nucleótido antisentido, donde el nucleótido antisentido comprende nucleótidos complementarios a 12 o más nucleótidos contiguos en la secuencia de nucleótidos mostrada como el SEQ ID NO: 5, 19, 20 o 21.

2. El agente profiláctico o terapéutico de la Reivindicación 1, donde el nucleótido antisentido comprende al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NO: 12-16.

3. El uso de un nucleótido antisentido para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca, donde el nucleótido antisentido comprende nucleótidos complementarios a 12 o más nucleótidos contiguos en la secuencia de nucleótidos mostrada como los SEQ ID NO: 5, 19, 20 o 21.

4. El uso de un nucleótido antisentido de la Reivindicación 3, donde el nucleótido antisentido comprende al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NO: 12-16.