PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCION DE SOYASAPOGENOL B Y NUEVOS MICROORGANISMOS.

Un método para la producción de soyasapogenol B, el cual comprende los pasos que consisten en el cultivo de microorganismos que pertenecen al género Neocosmospora y conversión de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona,

en el soyasapogenol B, en un medio que contiene un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, y a continuación recogida del soyasapogenol B a partir del cultivo resultante

Procedimiento para la obtención de soyasapogenol B y nuevos microorganismos.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a un método de producción del soyasapogenol B empleando un cultivo microbiano y una nueva cepa que pertenece al género Neocosmospora y una nueva cepa que pertenece al género Eupenicillium.

El soyasapogenol B es una de las agliconas de las saponinas contenidas en las legumbres, y ha sido la primera aislada a partir de granos de soja (semillas de Glycine max MERRILL) y su estructura ha sido determinada (Chem. Pharm. Bull. 24: 121-129, 1976, Chem. Pharm. Bull. 30; 2294-2297, 1982). Los glicósidos (por ejemplo, la soyasaponina) que tienen el soyasapogenol B como una aglicona, se ha informado que tienen varias actividades fisiológicas, tales como por ejemplo, un efecto de antioxidación, un efecto hepatoprotector, un efecto para aumentar los lípidos en suero, un efecto de supresión de la agregación de las plaquetas, y una actividad anticomplementaria, y su empleo potencial como fármacos preventivos y terapéuticos está indicado para enfermedades inmunológicas, tales como la nefritis, el reumatismo y el lupus eritematosus sistémico, enfermedades auto inmunológicas, y la trombosis (Kagaku a Seibutsu 21: 224-232, 1983; patente japonesa, publicación dejada abierta No. 37749/1986). Además, como para el soyasapogenol B, se ha informado de una actividad anticomplementaria, un efecto de supresión de la agregación de plaquetas, y un efecto de supresión del crecimiento de células derivadas del cáncer de colon humano, y cáncer de ovarios humano (patente japonesa, publicación dejada abierta No. 2343 96/1998).

El soyasapogenol B, puede obtenerse por ejemplo, hidrolizando químicamente las cadenas de azúcar de la soyasaponina I-V contenida en las semillas de soja. Sin embargo, éste no es un método efectivo de producción debido al considerable número de productos secundarios que se producen en las condiciones para la hidrólisis ácida o similar. Además, cuando un extracto crudo derivado de los granos de soja se emplea como material para la hidrólisis química, las agliconas distintas del soyasapogenol B se producen al mismo tiempo debido a que el extracto crudo contiene soyasaponinas A₁-A₆ ó similares, distintas de las soyasaponinas I-V, lo cual complica el proceso de purificación y ocasiona otros problemas.

Por otra parte, como métodos para la producción de soyasapogenol B empleando microorganismos, se conoce un método con el género Streptomyces (Chem. Pharm. Bull. 32: 1287-1293, 1984), y un método con el género Penicillium (patente japonesa, publicación dejada abierta No. 2343 96/1998). Sin embargo, estos métodos de producción de soyasapogenol B no son suficientes para la productividad y en la práctica. Además, se ha informado que el soyasapogenol B se produce como producto secundario cuando un oligosacárido en medio ácido que tiene ácido glucurónico como extremo terminal reductor, se produce después de hidrolizar un glucurónidosaponina empleando la enzima (glucoronidasa) producida mediante microorganismos que pertenecen al género Aspergillus o un cultivo conteniendo esta enzima (patente japonesa, publicación No 32714/1995). Sin embargo este método es primordialmente un método de producción de oligosacáridos de carácter ácido, y solamente se describe una confirmación cualitativa del soyasapogenol B.

Como se ha mencionado más arriba, el soyasapogenol B tiene varias actividades fisiológicas por lo que cabe esperar su empleo como producto farmacéutico o alimento sanitario, o como material para derivados de otra utilidad perfeccionada. De acuerdo con ello, existe la necesidad de desarrollar con más eficiencia y menos coste, los métodos de producción del soyasapogenol B.

Resumen de la invención

Un objetivo de la presente invención es el de proporcionar un método eficiente de producción de soyasapogenol B.

Otro objeto de la presente invención es el de proporcionar nuevos microorganismos que puedan convertir eficientemente un glicósido en el soyasapogenol B.

Los presentes inventores han descubierto recientemente unos microorganismos que hidrolizan selectivamente un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, tal como la saponina de granos de soja, y convierten eficientemente esta última en soyasapogenol B. Los presentes inventores han descubierto también que estos microorganismos son nuevas cepas que pertenecen al género Neocosmospora y al género Eupenicillium.

Un método para la producción de soyasapogenol B, de acuerdo con la presente invención, es un método que comprende los pasos de cultivo de microorganismos que pertenecen al género Neocosmospora y convierten un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, en soyasapogenol B, en un medio que contiene un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, y a continuación recogiendo el soyasapogenol B del cultivo resultante.

Un método para la producción de soyasapogenol B de acuerdo con la presente invención, es un método el cual comprende los pasos de cultivo de microorganismos que pertenecen al género Eupenicillium y convierten un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona en soyasapogenol B, en un medio que contiene un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, y a continuación recogiendo el soyasapogenol B del cultivo resultante.

Además, un método para la producción del soyasapogenol B de acuerdo con la presente invención, es un método el cual comprende los pasos de puesta en contacto de un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, con un cultivo que se obtiene cultivando microorganismos que pertenecen al género Neocosmospora y convierten un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, en soyasapogenol B, y a continuación, recogiendo el soyasapogenol B a partir del cultivo resultante.

Un método para la producción del soyasapogenol B de acuerdo con la presente invención, es un método que comprende los pasos de puesta en contacto de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, con un cultivo que se obtiene del cultivo de microorganismos que pertenecen al género Eupenicillium, y convierten un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, en soyasapogenol B, y a continuación recogiendo el soyasapogenol B a partir del cultivo resultante.

Nuevas cepas de acuerdo con la presente invención, son la Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta PF 1225 (FERM BP-7475) y mutantes de la misma.

Además, nuevas cepas de acuerdo con la presente invención, son el Eupenicillium brefeldianum PF 1226 (FERM BP-7476) y mutantes del mismo.

Un microorganismo que pertenece al género Neocosmospora puede ser la Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta, con más preferencia la Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta PF1225 (FERM BP-7475).

Un microorganismo que pertenece al género Eupenicillium puede ser el Eupenicillium brefeldianum, con más preferencia el Eupenicillium brefeldianum PF 1226 (FERM BP-7476).

Descripción detallada de la invención

1. Características micológicas de la cepa PF 1225

(1) Características de las colonias

Colonias creciendo en agar de harina de avena a 25ºC alcanzaron un diámetro de más de 85 mm en 14 días, con un color pardo grisáceo pálido, en forma de flocos y planos. Ascomatas de color naranja obscuro se produjeron en el centro de las colonias. Las caras reversas de las colonias fueron de un color pardo grisáceo.

Colonias creciendo en agar de extracto de levadura de Czapek, a 25ºC alcanzaron un diámetro de 80 mm en 14 días, y fueron de un color pardo pálido, en forma de flocos y con surcos radiales. Se produjeron ascomatas en un hypar aéreo. Las caras reversas de las colonias fueron de un color pardo amarillento.

A 37ºC el crecimiento disminuyó, y el ascoma no se produjo.

(2) características morfológicas

Los ascomatas fueron superficiales, ostiolados, globosos a ovoides, y de 300-450 x 250-350 µm. El peridio fue membranoso y consistió en una textura angulosa con células que medían 10-25 µm de diámetro. Los ascos fueron de 8 esporas, cilíndricos, de estipitatos cortos, uniseriados de 75-100 x 10-12 µm y evanescentes en la madurez. Las ascosporas...

1. Un método para la producción de soyasapogenol B, el cual comprende los pasos que consisten en el cultivo de microorganismos que pertenecen al género Neocosmospora y conversión de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, en el soyasapogenol B, en un medio que contiene un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, y a continuación recogida del soyasapogenol B a partir del cultivo resultante.

2. Un método para la producción de soyasapogenol B, el cual comprende los pasos que consisten en el cultivo de microorganismos que pertenecen al género Eupenicillium y conversión de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, en el soyasapogenol B, en un medio que contiene un glicósido que tiene soyasapogenol B como una aglicona, y a continuación recogida del soyasapogenol B a partir del cultivo resultante.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Neocosmospora es el Neocosmospora vasinfecta, var. vasinfecta.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Eupenicillium es el Eupenicillium brefeldianum.

5. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Neocosmospora es el Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta PF 1225 (FERM BP-7475).

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Eupenicillium, es el Eupenicillium brefeldianum PF 1226 (FERM BP-7476).

7. Un método para la producción del soyasapogenol B, el cual comprende los pasos de puesta en contacto de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, con un cultivo el cual se obtiene mediante el cultivo de microorganismos que pertenece al género Neocosmospora y convierte un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, en soyasapogenol B, y a continuación se recoge el soyasapogenol B a partir del cultivo resultante.

8. Un método para la producción del soyasapogenol B, el cual comprende los pasos de puesta en contacto de un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, con un cultivo el cual se obtiene mediante el cultivo de microorganismos que pertenecen al género Eupenicillium, y convierte un glicósido que tiene el soyasapogenol B como una aglicona, en soyasapogenol B, y a continuación se recoge el soyasapogenol B, a partir del cultivo resultante.

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el microorganismo, el cual pertenece al género Neocosmospora es el Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el microorganismo, el cual pertenece al género Eupenicillium es el Eupenicillium brefeldianum.

11. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Neocosmospora es el Neocosmospora vasinfecta var. vasinfecta PF 1225 (FERM BP-7475).

12. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el microorganismo el cual pertenece al género Eupenicillium es el Eupenicillium brefeldianum PF 1226 (FERM BP-7476).

13. Una cepa PF 1225 depositada en el National Institute of Bioscience and Human-Technology ("Instituto Nacional de Biociencia y Tecnología Humana"), el National Institute of Advanced Industrial Science and Technology ("Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Moderna"), con el número de registro FERM BP-7475, y mutantes de la misma.

14. Una cepa PF 1226 depositada en el National Institute of Bioscience and Human-Technology ("Instituto Nacional de Biociencia y Tecnología Humana"), el National Institute of Advanced Industrial Science and Technology ("Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Moderna"), con el número de registro FERM BP-7476, y mutantes de la misma.