Un método para identificar células de mamíferos de un carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) que expresan PDGFRa,

que comprende la etapa que consiste en determinar si el PDGFRa se expresa en una muestra biológica que comprende células de un tumor de NSCLC utilizando al menos un reactivo específico del PDGFRa

Identificación de tumores de cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) que expresan PDGRa.

Campo de la invención

La invención se refiere generalmente al cáncer, a anticuerpos y al uso de anticuerpos en la caracterización del cáncer.

Antecedentes de la invención

Muchos cánceres se caracterizan por alteraciones en las rutas de señalización celular que conducen a un control anómalo de los procesos celulares o a un crecimiento y proliferación de células incontrolado. Estas alteraciones a menudo están producidas por cambios en el estado de fosforilación y por tanto en la actividad de las proteínas de señalización particular. Entre estos cánceres se encuentra el carcinoma pulmonar de células no pequeñas (NSCLC). El NSCLC es la principal causa de muerte por cáncer en los Estados Unidos y representa aproximadamente el 87% de todos los cánceres de pulmón. Anualmente en los Estados Unidos existen alrededor de 151.000 nuevos casos de NSCLC y se estima que más de 120.000 pacientes mueren anualmente a causa de la enfermedad sólo en los Estados Unidos. Véase "Cáncer Facts and Figures 2003", American Cancer Society. El NSCLC, que comprende tres subtipos distintos, a menudo se detecta únicamente después de que ha producido metástasis y por lo tanto la tasa de mortalidad es del 75% en los dos años del diagnóstico.

El NSCLC, como la mayoría de los cánceres, implica defectos en las rutas de transducción de señal. Los receptores de tirosina quinasa (RTK) desempeñan una función esencial en estas rutas de señalización, transmitiendo señales moleculares extracelulares en el citoplasma y/o en el núcleo de una célula. Entre dichos RTK se encuentran los receptores de los factores del crecimiento polipeptídicos tales como el factor de crecimiento epidérmico (EGF), insulina, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), neurotrofinas (es decir, NGF) y el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF). La fosforilación de dichos RTK activa su función quinasa del dominio citoplásmico, que a su vez activa moléculas de señalización aguas abajo. Por tanto, los RTK son mediadores clave de la señalización celular así como en la oncogénesis resultante de la sobre-expresión y activación de dichos RTK y sus sustratos. Debido a su función esencial en la señalización normal y anómala, los RTK son objeto de creciente interés como posibles dianas farmacológicas para el tratamiento de determinados tipos de cáncer. Por ejemplo, Herceptin®, un inhibidor de HER2/neu, en la actualidad es una terapia aprobada para un determinado subconjunto de cánceres de mama. Iressa^TM (ZD1839) y Tarceva^TM (OSI-774), ambos inhibidores de molécula pequeña del EGFR, se han aprobado para el tratamiento de NSCLC.

El factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y sus receptores (PDGFR) son una familia de RTK que desempeñan una función esencial en la regulación del crecimiento y diferenciación celular normal. Los PDGFR están implicados en una diversidad de procesos patológicos, incluyendo aterosclerosis, neoplasia, reparación tisular e inflamación (véase, por ejemplo Ross et al., Cell 46: 155-169 (1986); Ross et al., Adv. Exp Med. Biol. 234: 9-21 (1988)). Los PDGFR, que consisten en dos isoformas (alfa (a) y beta (ß)), son proteínas tirosina quinasa de membrana que, después de unirse al PDGF, se vuelven activas y, mediante el reclutamiento de moléculas efectoras que contienen dominios SH2, inician cascadas de señalización solapantes o distintas que coordinan las respuestas celulares.

La expresión de un PDGFR constitutivamente activo conduce a la transformación celular (véase Gazit et al., Cell 39: 89-97 (1984)) y sugiere que, en células normales, la actividad del PDGFR deba estar estrechamente regulada para oponerse a la activación continua de sus efectores aguas abajo. Por ejemplo, se sabe que PDGFR beta, se sobre-expresa en un gran número de tumores y que el tratamiento del PDGF produce transformación y tumores malignos en una diversidad de sistemas experimentales (revisado en Heldin et al., Physiol. Rev. 79(4): 1283-1316 (1999)). Por lo tanto se ha propuesto que la activación por sobre-expresión o constitutiva de los receptores del PDGF desempeñan una función en el origen o tumorigénesis de determinadas células cancerígenas. Se ha indicado que el PDGFR se activa por una fusión con el factor de la transcripción TEL (véase Ide et al., PNAS 99(22): 14404-14409 (2002)) en un subconjunto de pacientes con leucemia mielomonocítica crónica (CML). La activación del PDGFR también se ha asociado con el crecimiento de determinados tumores sólidos, tales como glioblastoma (véase, por ejemplo, Vassbotn et al., J. Cell. Physiol. 158: 381-389 (1994)).

Por consiguiente, la inhibición del PDGFR y su ruta aguas abajo se ha convertido en un campo de creciente interés para el desarrollo de fármacos. Recientemente se han desarrollado inhibidores específicos del PDGFR, tales como el fármaco de molécula pequeña Gleevec® (STI-571; mesilato de Imatinib) y están presentes en los ensayos clínicos para el tratamiento de determinados cánceres, incluyendo cáncer de próstata y de ovario. También se ha demostrado que Gleevec® induce respuestas duraderas en pacientes con enfermedades mieloproliferativas crónicas asociadas con la activación del PDGFR (véase Apperley et al., N. Engl. J. Med 347(7): 481-7 (2002)). Sin embargo, aunque la expresión del PDGFR se ha vinculado con la progresión de algunos cánceres, tales como CML y glioblastoma, esta asociación no se ha hecho en muchos otros tipos de cánceres. De manera similar, aunque se han identificado determinados defectos de señalización subyacentes en la progresión del NSCLC (incluyendo la sobre-expresión del EGFR), los mecanismos moleculares precisos que conducen esta enfermedad no se comprenden completamente.

Un estudio informó acerca de la aparente expresión del PDGFR alfa (a) en casi el 100% de los tumores de cáncer de pulmón humano examinados e informó de la inhibición del crecimiento de una línea celular cancerígena de pulmón, A549, por Gleevec®, un efecto que se supuso que se mediaba a través de la inhibición del PDGFR (véase Zhang et al., Mol. Cancer 2(1): 1-10 (2003)). El informe, sin embargo, no fue concluyente ya que más tarde se demostró (por los presentes inventores) que el anticuerpo empleado en el estudio no era específico y reaccionaba de manera cruzada con una diversidad de proteínas distintas al PDGFRa; por tanto no está claro realmente qué proteína (o proteínas) se detectó/detectaron en el estudio de Zhang. Además, el PDGFRa no es detectable en la línea celular A549 empleada en este estudio lo que es coherente con la incapacidad de los presentes inventores de reproducir la inhibición del crecimiento de esta línea celular por Gleevec® lo que prueba adicionalmente que la observación ofrecida por Zhang era errónea o mediada por algún mecanismo distinto de la expresión e inhibición del PDGFRa. Laird et al. describen que SU 112 48 inhibe varios PDGFR incluyendo el PDGFRa y una diversidad de cánceres, incluyendo el NSCLC. Sin embargo; el PDGFRa no se relaciona con el NSCLC. (Proc. Am. Assoc. Cancer Research, Vol. 44, 2^a ed. Julio 2003, # 4716).

Dado que la nueva generación de compuestos terapéuticos dirigidos contra los RTK como el PDGFR y el EGFR son muy específicas, existe una continua e imperativa necesidad de identificar tumores particulares que, de hecho, se estimulan por RTK que se dirigen por estos fármacos, ya que dichos tumores responden más adecuadamente al inhibidor. Actualmente se acepta de manera generalizada que la mayoría de los tipos de cánceres, que se estimulan por diferentes vías de señalización, tienen distintos subconjuntos de tumores. Por ejemplo, se sabe que existen dos subconjuntos distintos de cánceres de mama, uno estimulado por la señalización de Her2/Neu y el otro por la señalización del EGFR, pero únicamente el primero es sensible al compuesto terapéutico Herceptin® dirigido contra Her2. Es probable que la mayoría de los tipos de cáncer, incluyendo aquellos en los que ya se ha identificado (y dirigido) un RTK como un estimulador de la enfermedad, tendrán, de hecho, subtipos múltiples que se estimulan por otros, RTK y rutas actualmente desconocidos. De hecho, los índices de respuesta modestos hasta ahora observados en ensayos clínicos de diversos compuestos terapéuticos dirigidos muy específicos (incluyendo aquellos contra EGFR y PDGFR) prueban que muchos cánceres que se tratan pueden, realmente, comprender subgrupos que se estimulan...

1. Un método para identificar células de mamíferos de un carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) que expresan PDGFRa, que comprende la etapa que consiste en determinar si el PDGFRa se expresa en una muestra biológica que comprende células de un tumor de NSCLC utilizando al menos un reactivo específico del PDGFRa.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente la etapa que consiste en poner en contacto la muestra biológica, que comprende las células tumorales de NSCLC, con un agente terapéutico inhibidor del PDGFRa.

3. Un método de identificación de células tumorales de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) de mamíferos susceptibles de responder a una composición que comprende al menos un agente terapéutico inhibidor de PDGFRa que comprende la etapa que consiste en determinar si el PDGFRa se expresa en una muestra biológica que comprende células tumorales de NSCLC.

4. El método de la reivindicación 2, en el que dicho agente terapéutico inhibidor de PDGFRa comprende un inhibidor de molécula pequeña de PDGFRa.

5. El método de la reivindicación 4, en el que dicho inhibidor de molécula pequeña de PDGFRa se selecciona del grupo constituido por mesilato de Imatinib (STI-571) o un análogo de mesilato de Imatinib (STI-571).

6. El método de la reivindicación 1, en el que la expresión del PDGFRa se detecta usando un anticuerpo específico contra el PDGFRa.

7. El método de la reivindicación 6, en el que dicho anticuerpo específico contra el PDFGRa es un anticuerpo específico del sitio de fosforilación.

8. El método de la reivindicación 1, en el que dicho método se implementa en un formato de ensayo de citometría de flujo (FC), immunohistoquímica (IHC), o immuno-fluorescencia (IF).

9. Un método para determinar si un compuesto inhibe la progresión de un tumor de NSCLC en un mamífero que pertenece a subconjunto de tumores de NSCLC en los que se expresa el PDGFRa, comprendiendo dicho método la etapa consistente en determinar si dicho compuesto inhibe la expresión y/o la actividad del PDGFRa en dicho tumor de NSCLC, examinando una muestra biológica que comprende células de dicho tumor de NSCLC de mamífero, en el que dicho compuesto se ha administrado a un mamífero.