GENES REGULADOS Y USOS DE LOS MISMOS.

Una molécula de anticuerpo que tiene especificidad por una proteína o un fragmento de la misma con actividad mitogénica,

codificada por una molécula de nucleótidos que tiene al menos 80% de homología con la secuencia de nucleótidos citada entre nt. 283 y nt. 1356 de la Figura 1, o un fragmento de dicha molécula, donde dicho fragmento codifica una proteína con actividad mitogénica

Genes regulados y usos de los mismos.

La presente invención se refiere a las secuencias de nucleótidos de los genes regulados por Fos, a las proteínas codificadas por las secuencias, a usos de las secuencias y proteínas codificadas, y a animales transgénicos que comprenden una o más de las secuencias. La presente invención también se refiere a moléculas de anticuerpos que tienen afinidad por las proteínas codificadas y a usos de las moléculas de nucleótidos antisentido.

El factor de transcripción AP-1 está implicado en una serie de procesos celulares, incluyendo la proliferación celular, diferenciación y función neuronal (véase Angel y Karin, 1991).

Se considera que AP-1 ejerce su efecto por unión a una secuencia de reconocimiento de ADN, conocida como el elemento de AP-1, encontrada en las regiones promotora y potenciadora de los genes. El elemento de AP-1 tiene la secuencia de consenso en TGA G/C TCA.

Se ha encontrado una serie de genes que contienen elementos de AP-1 en sus regiones reguladoras, incluyendo c-Jun (Angel y col., 1988), MCP-1 (Rolling y col., 1988), estromalisina (Kerr y col., 1988), colagenasa de tipo I (Schonthal y col., 1988) e interleuquina II (Farrar y col., 1989).

AP-1 está compuesta de complejos diméricos formados entre las proteínas Jun (c Jun, Jun-B y Jun D) y Fos (c-Fos, Fos B, Fra-1 y Fra2). Se ha encontrado que el componente Fos de AP-1 es el componente limitante de la actividad de AP-1 en células cicladoras (véase Kovary y Bravo, 1991).

c-Fos es un protooncogén nuclear que se ha implicado en una serie de sucesos celulares importantes, incluyendo la proliferación celular (Holt y col., 1986; Riabowol y col., 1988), diferenciación (Distel y col., 1987; Lord y col., 1993) y tumorigénesis (Curren y col., 1983; Miller y col., 1984; Ruther y col., 1989).

c-Fos codifica una proteína de 62 kDa que forma heterodímeros con c-Jun, formando un factor de transcripción AP-1 que se une al ADN en un elemento de AP-1 y estimula la transcripción.

Los productos génicos de Fos también pueden reprimir la expresión génica. Sassone y col. (1988) mostraron que c-Fos inhibe su propio promotor y Gius y col. (1990) y Hay y col. (1989) mostraron que c-Fos inhibe los genes de respuesta temprana Egr-1 y c-myc.

También se ha mostrado que los factores AP-1 inhiben la expresión del MHC de clase I y genes PEPCK (véase Gurney y col., 1992 y Howcroft y col., 1993).

Por lo tanto, se puede observar que los genes regulados por Fos son extremadamente importantes para la expresión correcta de los genes que conducen a cambios en el fenotipo celular. La importancia de los genes Fos se demostró claramente generando ratones deficientes en c-Fos (véase Hu y col., 1994). Los ratones deficientes en c-Fos eran viables, pero presentaban una variedad de defectos del desarrollo específicos del tejido, incluyendo osteoporosis, gametogénesis retardada y linfofenia y anomalías del comportamiento.

Los ratones deficientes en c-Fos se usaron para generar líneas celulares de fibroblastos, y se encontró que la expresión de dos genes era anormalmente baja. Los dos genes eran el de la estromalisina y la colagenasa de tipo I. Previamente se identificó que ambos genes tenían sitios AP-1 en sus secuencias reguladoras (véase Kerr y col., 1988, y Schonthal y col., 1988).

La estromalisina y colagenasa de tipo I se han implicado en el desarrollo tisular embrionario (Brenner y col., 1989), remodelación de tejido dañado (Hasty y col., 1990; Woessner y Gunja, 1991) y en el avance tumoral y de metástasis (Liotta y Stetler, 1990).

Superti-Furga y col., (1991), mostraron que la actividad de c-Fos se puede controlar hormonalmente mediante fusión de la proteína c-Fos de ratón al dominio de unión del ligando del receptor humano de estrógeno. Se encontró que la proteína de fusión estimulaba la transcripción dependiente de AP-1 de una forma estrictamente dependiente de la hormona. Usando la proteína de fusión, se encontró un gen regulado por AP-1, Fit-1. Se encontró que Fit-1 codificaba una proteína secretada o unida a membrana dependiendo del patrón de ayuste.

El documento WO95/24473 describe un polinucleótido que codifica el VEGF-2 (factor 2 de crecimiento endotelial vascular) humano. No existe ninguna correlación de la secuencia o similitud con la secuencia de la presente invención.

La presente invención se refiere a secuencias de nucleótidos que codifican dos nuevos genes regulados por Fos.

La presente invención proporciona una molécula de nucleótidos que codifica una proteína codificada por un gen regulado por Fos o uno de sus fragmentos, en el que dicha proteína o su fragmento es codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Figura 1 ó 2, o uno de sus fragmentos, incluyendo variantes alélicas y variantes de especie de las secuencias de nucleótidos.

La expresión "molécula de nucleótidos" usada en esta memoria, se refiere a nucleótidos de cualquier longitud, sean ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos. La expresión abarca tanto moléculas de doble como de una cadena. También incluye tipos conocidos de modificaciones, por ejemplo, marcadores que son conocidos en la técnica, metilación, "grupos terminales", sustitución de uno o más de los nucleótidos naturales por un análogo, modificaciones internucleótidos tales como, por ejemplo, aquellas con enlaces no cargados (p. ej., fosfonatos de metilo, fosfotriésteres, fosfamidatos, carbamatos, etc.) y con enlaces cargados (p. ej., fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), las que contienen restos colgantes, tales como proteínas (incluyendo nucleasas, toxinas, anticuerpos, péptidos señal, poli-L-lisina, etc.), las que contienen intercaladores (p. e., acridina, psoralén, etc.), las que contienen queladores (p. ej., metales, metales radiactivos, boro, metales oxidantes, etc.), las que contienen alquilantes y las que contienen enlaces modificados (p. ej., ácidos nucleicos anómeros alfa, etc.).

La molécula de nucleótidos de la presente invención puede codificar la proteína de un gen regulado por Fos o uno de sus fragmentos.

El término "fragmento" usado en relación con las proteínas se refiere a fragmentos que tienen suficiente longitud para ser únicos para la proteína actualmente reivindicada (p. ej., 10, 15, 20 ó 25 aminoácidos consecutivos de longitud). Preferiblemente, los fragmentos de proteína son capaces de provocar al menos parte de una actividad de la proteína completa. Los fragmentos particularmente preferidos comprenden una región conservada de un gen que se ha encontrado que es homólogo con una serie de otros genes. Se considera que dichas regiones conservadas tienen una función específica.

Las secuencias de nucleótidos mostradas en las Figuras 1 y 2, como la mayoría de las secuencias de nucleótidos naturales, tendrán una serie de formas distintas, tales como variantes alélicas y variantes de especie. Dichas variantes y cualesquiera otras formas naturales de las secuencias de nucleótidos de la presente invención también se considera que forman parte de la presente invención. Dichas variantes deben tener una homología de secuencia de al menos 60%, preferiblemente 80%, y más preferiblemente 90%, con las secuencias mostradas en la figura 1 ó 2 o sus fragmentos.

La presente invención también se refiere a la molécula de nucleótidos de la presente invención, en la que se altera la proteína o uno de sus fragmentos codificada por la secuencia mostrada en la Figura 1 ó 2 o uno de sus fragmentos.

Las proteínas alteradas preferidas o sus fragmentos, son aquellas que todavía retienen su actividad y preferiblemente tienen una homología de al menos 80%, más preferiblemente 90% y más preferiblemente 95% con la proteína o uno de sus fragmentos, codificada por la secuencia mostrada en la Figura 1 ó 2, o uno de sus fragmentos. Preferiblemente dichas proteínas alteradas o sus fragmentos difieren sólo en 1 a 10 aminoácidos. Se prefiere además que los cambios de aminoácidos sean conservativos.

Los cambios conservativos son los que sustituyen un aminoácido por otro de la familia de aminoácidos que está relacionada por sus cadenas laterales. Por ejemplo, es razonable esperar que una sustitución aislada de una leucina por una isoleucina o valina, un aspartato por un glutamato, una treonina por una serina, o una sustitución conservativa similar de un aminoácido por un aminoácido estructuralmente relacionado, no tendrán un efecto importante en la actividad biológica de la proteína.