ANTICUERPOS Y FRAGMENTOS DE LOS MISMOS QUE SE UNEN A LA IL-1 BETA.

Anticuerpo que se une a la IL-1ß o fragmento del mismo que se une a la IL-1ß y comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº:

11 y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15

Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1ß.

Ámbito de la invención

La invención se refiere a los anticuerpos que se unen a la IL-1ß, incluyendo a fragmentos de los mismos, y a los ácidos nucleicos que codifican tales anticuerpos, así como a vectores, células y composiciones que comprenden los anticuerpos o ácidos nucleicos, y a los usos de los mismos.

Antecedentes de la invención

La familia de las citoquinas de las interleuquinas-1 (IL-1) ha venido estando implicada en estados de enfermedad tales como la artritis reumatoidea (RA), la osteoartritris, la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerosa (UC), el shock séptico, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), el asma, la enfermedad de injerto versus huésped, la aterosclerosis, la leucemia de células T del adulto, el mieloma múltiple, la esclerosis múltiple, la crisis fulminante y la enfermedad de Alzheimer. Los miembros de la familia de las IL-1 incluyen a la IL-1a, la IL-1ß y la IL-1Ra. A pesar de que están emparentadas por su capacidad para fijarse a los receptores de IL-1 (IL-1RA1 e IL-1R2), cada una de estas citoquinas es expresada por un gen distinto y tiene una distinta secuencia de aminoácidos primarios. Además pueden distinguirse unas de otras las actividades fisiológicas de estas citoquinas.

Se han investigado compuestos que trastornan la señalización de los receptores de IL-1 como agentes terapéuticos para tratar las enfermedades mediadas por IL-1. Estos compuestos incluyen a la IL-1Ra recombinante (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) y el péptido "trampa" de receptores de IL-1 (Regeneron Inc., Tarrytown, NY). También han sido investigados anticuerpos monoclonales derivados de animales que se unen a las citoquinas IL-1. Sin embargo, su valor clínico puede ser limitado debido a su inmunogenicidad. Por ejemplo, ha llegado a ser sabido que sujetos humanos a los que se les administran anticuerpos monoclonales de ratón producen anticuerpos anti-ratón humanos (HAMA). Se ha descrito que los HAMA reducen la eficacia de la terapia con anticuerpos monoclonales y producen reacciones adversas entre las que se incluyen las lesiones renales. Otros anticuerpos para IL-1ß pueden quedar limitados por su afinidad de fijación y/o su potencia. En consecuencia, se necesitan compuestos adicionales que trastornen la señalización de los receptores de IL-1. La invención aporta tales compuestos, así como métodos para preparar y usar tales compuestos.

Breve sumario

La invención aporta un anticuerpo que se une a la IL-1ß o un fragmento del mismo que se une a la IL-1ß y comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11 y una región de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15. También se aporta aquí un ácido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento del anticuerpo, así como un vector que comprende el ácido nucleico, una célula que comprende el ácido nucleico o el vector, y una composición que comprende el anticuerpo, el ácido nucleico o el vector.

En el contexto se describe un método que es para tratar o prevenir una enfermedad en un mamífero y comprende el paso de administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención a un mamífero que tenga necesidad de ello, con lo cual se trata o previene una enfermedad en el mamífero.

En el contexto de la presente invención se describe un método de preparación de un polipéptido madurado por afinidad que se une a la IL-1ß, comprendiendo dicho método los pasos de: (a) prever un primer ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que se une a la IL-1ß y comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los ID SEC NÚMS.: 1-26 y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que se diferencia de la primera secuencia de ácido nucleico en al menos un nucleótido, (b) llevar a cabo una mezcla de ácidos nucleicos para así contar con dos o más ácidos nucleicos mutados, (c) seleccionar un ácido nucleico que codifique un polipéptido que (I) se una a la IL-1ß con una afinidad mayor que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (II) tenga una selectividad para la IL-1ß con preferencia sobre la IL-1a que sea mayor que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (III) tenga una constante de disociación de la unión en equilibrio (K_D) para IL-1ß que sea más baja que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, o (IV) inhiba la expresión inducida por IL-1ß de IL-6 sérica en un animal en mayor grado que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (d) expresar el ácido nucleico mutado seleccionado, con lo cual se produce un polipéptido madurado por afinidad que se une a la IL-1ß.

La invención aporta nuevos anticuerpos que se unen a la IL-1ß o fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1ß, los cuales se unen a la IL-1ß humana con una constante de disociación de menos de 3 pM, como alternativa de aproximadamente 2 pM o menos, y preferiblemente de poco más o menos 1 pM o menos. Tales anticuerpos de alta afinidad se contemplan como útiles para varios métodos para tratar o prevenir enfermedades o estados relacionados con la IL-1. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la IL-1ß o los fragmentos que se unen a la IL-1ß pueden unirse a un epítope de IL-1ß de forma tal que el anticuerpo o fragmento unido no impida considerablemente que la IL-1ß se fije al receptor tipo I de IL-1. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la IL-1ß o los fragmentos que se unen a la IL-1ß pueden unirse a en sustancia el mismo epítope como uno o varios de los anticuerpos indicados como ejemplos que aquí se describen, tales como el anticuerpo denominado AB7, que comprende una región variable de cadena pesada. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la IL-1ß o los fragmentos que se unen a la IL-1ß pueden competir con la unión de un anticuerpo que tenga la región variable de cadena liviana de la ID SEC Nº: 11 y la región variable de cadena pesada de la ID SEC Nº: 15. Adicionalmente, la presente invención incluye a los anticuerpos que se unen a la IL-1ß o los fragmentos que se unen a la IL-1ß y pueden unirse a un epítope contenido en la secuencia ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (ID SEC Nº: 36). Los ejemplos de anticuerpos que se unen a la IL-1ß incluyen al anticuerpo que aquí se ha denominado AB7.

La invención también aporta anticuerpos que se unen a la IL-1 o fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1ß y tienen una constante de disociación de menos de 3 pM, y como alternativa de aproximadamente 1 pM o menos, y comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una de las secuencias de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15. El anticuerpo que se une a la IL-1ß o el fragmento que se une a la IL-1ß puede también comprender una región variable de cadena liviana que comprenda la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11.

En el contexto de la presente invención se describen anticuerpos que se unen a la IL-1ß o fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1ß, los cuales se unen a la IL-1ß con una constante de disociación de entre aproximadamente 6 pM y aproximadamente 50 pM, como alternativa de entre aproximadamente 13 pM y aproximadamente 25 pM, y como alternativa de aproximadamente 19 pM, donde el anticuerpo o fragmento tiene una IC₅₀ de menos de 0,5 nM (500 pM), como alternativa de entre aproximadamente 5 pM y aproximadamente 200 pM, como alternativa de entre aproximadamente 10 pM y aproximadamente 100 pM, y como alternativa de aproximadamente 30 pM, para inhibir la liberación estimulada por IL-1ß de IL-6 desde fibroblastos humanos. La expresión IC₅₀ para inhibir la liberación estimulada por IL-1ß de IL-6 desde fibroblastos humanos se refiere a la concentración requerida para inhibir el 50% de la liberación de IL-6 por estimulación de los fibroblastos humanos con IL-1ß. Los ejemplos de anticuerpos incluyen al anticuerpo al que aquí se denomina AB1.

En el contexto de la presente invención se describen anticuerpos que se unen a la IL-1 o fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1ß y tienen una constante de disociación de entre aproximadamente 6 y aproximadamente 50 pM y comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una de las secuencias de aminoácidos de las ID SEC NÚMS. 2 4, 5 o 6, como alternativa una de las secuencias de aminoácidos de las ID SEC NÚMS.: 4 o 5, y como alternativa las secuencias de aminoácidos de la ID SEC Nº: 4. Se contempla que en algunas...

1. Anticuerpo que se une a la IL-1ß o fragmento del mismo que se une a la IL-1ß y comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11 y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15.

2. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una cadena liviana lambda.

3. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región de IgG2.

4. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un Fab, un F(ab')₂, un Fv o un fragmento de anticuerpo de cadena única, o una variante o un derivado de cualquiera de estos anticuerpos o fragmentos.

5. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo multiespecífico, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un minicuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo recombinante quelante, un tricuerpo, un bicuerpo, un intracuerpo, un nanocuerpo, un pequeño producto inmunofarmacéutico modular (SMIP), una proteína de fusión de inmunoglobulina de dominio de unión, un anticuerpo camelizado, un anticuerpo con contenido de V_HH o una variante o un derivado de cualquiera de estos anticuerpos o fragmentos.

6. Ácido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

7. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de un anticuerpo, donde la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15.

8. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena liviana de un anticuerpo, donde la región variable de cadena liviana comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11.

9. Vector que comprende el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 6-8.

10. Célula que comprende el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 6-8 o el vector de la reivindicación 9, donde dicha célula es una célula troncal embriónica no humana o un óvulo fertilizado humano.

11. La célula de la reivindicación 10, donde la célula es una célula troncal embriónica no humana o un óvulo fertilizado no humano.

12. Animal transgénico que comprende la célula de la reivindicación 10 u 11, no siendo dicho animal un animal humano.

13. Hibridoma que produce el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

14. Composición que comprende (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 6-8 o el vector de la reivindicación 9, y (b) un soporte adecuado.

15. La composición de la reivindicación 14, donde el soporte es un soporte farmacéuticamente aceptable.

16. La composición de la reivindicación 15, donde la composición está en una forma adecuada para administración intraarticular, subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal), intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial, intralesional, oral o por inhalación.

17. La composición de la reivindicación 15, donde la composición comprende un lioprotector, un agente superficiactivo, una carga, un aglutinante y/o un agente voluminizante.

18. La composición de la reivindicación 15, donde la composición es una composición farmacéutica de liberación controlada o de liberación sostenida.