Empleo de un fragmento de un anticuerpo F(ab'')2 anti-TNF-a neutralizante,

para la preparación de un medicamento para administración tópica para el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual se debe al rechazo de un trasplante córneo, en donde dicho medicamento está preparado para la directa aplicación sobre el ojo

Administración de fragmentos de anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere al empleo de fragmentos del anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a de neutralización para la preparación de un medicamento para administración tópica, para el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual se debe al rechazo de un trasplante de córnea. Los elementos del anticuerpo están de preferencia substancialmente libres de albúmina y de anticuerpos completos, así como también substancialmente libres de pirógenos, y pueden ser administrados con una cantidad efectiva de un soporte farmacéuticamente aceptable.

Las citocinas juegan un papel clave en muchos procesos biológicos tales como por ejemplo la inducción de la respuesta inmunológica, el reclutamiento de células inflamatorias, citotoxicidad, actividad antivírica, reparación de heridas, angiogénesis, apoptosis, fiebre y síntesis de proteínas en fase aguda. Las citocinas actúan en una red compleja en la cual pueden inducir la producción y secreción de otras citocinas, modular la expresión de los receptores de citocina, y son capaces de tener efectos sinérgicos o antagonistas sobre otras citocinas. Las citocinas proinflamatorias han sido también implicadas como inductoras del rechazo de un trasplante.

Los anticuerpos son proteínas de un tipo de globulinas conocidas como inmunoglobulinas (Igs) que están presentes en el suero de la sangre como una respuesta del sistema inmunológico a la invasión de algunas substancias u organismos extraños. Se caracterizan por combinarse específicamente con substancias que son extrañas al organismo, para neutralizar y precipitarlas con el propósito de eliminarlas de la circulación. Varias aplicaciones industriales han sido desarrolladas utilizando anticuerpos, como por ejemplo, en diagnósticos, monitorización, prevención y tratamiento de una gran variedad de dolencias.

En regiones en donde, debido a las condiciones climáticas, abundan los animales venenosos, los anticuerpos han sido objeto de un empleo especial para combatir el veneno en tratamientos de pacientes con picaduras o mordeduras de escorpiones, arañas y serpientes. Otro empleo que se está desarrollando es el tratamiento de enfermedades auto-inmunológicas como por ejemplo la artritis reumatoide, la diabetes mellitus inmunodependiente, el AIDS, anemias hemofílicas, fiebre reumática, esclerosis múltiple, tiroiditis y psoriasis, entre otras. En estos casos, los anticuerpos anti-citocina se aplican o bien directamente al paciente o mediante inmunosorción extracorpórea. De forma ideal, dicho tratamiento elimina las citocinas generadas por el organismo en respuesta a una enfermedad, para evitar la muerte o una reacción inmunológica aguda (ver la patente U.S. nº 5.888.511 y 4.940.670).

El concepto de una terapia anti-citocina para combatir una enfermedad humana se originó con el empleo de esteroides en modelos caninos y primates de sepsis. La sepsis, conocida también como el síndrome de la respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) es la respuesta sistémica del anfitrión a una infección de gran envergadura de la corriente sanguínea, por bacterias productoras de toxinas. Puede desarrollarse una severa sepsis en el choque séptico, lo cual tiene lugar cuando una infección de gran envergadura conduce a una baja tensión sanguínea, un bajo flujo de sangre y una disfunción de los órganos.

El choque séptico causa más de 100.000 muertes cada año en Latinoamérica. La patogénesis de la sepsis incluye típicamente la exposición a un elemento nocivo, clásicamente una endotoxina, seguida de una respuesta inflamatoria y anti-inflamatoria inmunológica del anfitrión. Los mecanismos asociados con las lesiones durante el proceso séptico se desencadenan mediante los antígenos bacterianos como por ejemplo los lipopolisacáridos (LPS), lo cual induce la superproducción de citocinas proinflamatorias como por ejemplo el TNF-a. Un choque séptico grave puede dar como resultado el fallo de órganos vitales tales como el cerebro, el corazón, los riñones y el hígado. Aunque la completa neutralización del TNF-a, dará a menudo origen a infecciones bacterianas, dosis bajas de anticuerpos anticitocinas pueden atenuar la respuesta antiinflamatoria temprana, lo cual es beneficioso para la prevención tanto de la sepsis como del choque séptico.

La infusión de enterotoxina (como por ejemplo, veneno) tanto en animales como en hombres, induce una liberación medible de citocinas, tales como el factor alfa de la necrosis tumoral (TNF-a) e interleucina-1 beta (IL-1ß). Niveles de TNF-a en sangre, en pacientes sépticos han sido correlacionados tanto con la gravedad de la enfermedad como de la mortalidad. La infusión de TNF-a reproduce taquicardia, hipotensión, leucocitosis, coagulopatía, mayor permeabilidad, edema pulmonar, y múltiples fallos de órganos asociados con la sepsis. La terapia con anti-TNF-a en forma de anticuerpos completos específicos al TNF-a ha protegido a animales de la muerte debido a la infusión de endotoxinas. La interleucina-1ß induce también los signos y síntomas de la sepsis, como por ejemplo, fiebre, anorexia, e hipotensión. El bloqueo de la IL-1ß empleando un antagonista soluble del receptor de la IL-1 (IL-lRa) ha atenuado la gravedad de la enfermedad y la mortalidad en modelos animales experimentales de choque y sepsis. Así, la neutralización o eliminación de citocinas como por ejemplo, la IL-1ß y TNF-a, puede impartir resistencia al choque endotóxico.

El tratamiento convencional de las mordeduras de serpientes y picaduras de escorpiones, incluye primordialmente el empleo de antivenenos, esteroides y antibióticos. Estos tratamientos deben efectuarse habitualmente dentro de las dos horas después de la mordedura. Posibles complicaciones de mordeduras y picaduras de insectos, incluyen la reacción alérgica, infección, enfermedad y reacción al veneno como por ejemplo la reacción tóxica o choque. Los efectos sobre los tejidos locales varían entre las especies de escorpión (y de araña o serpiente). Otros efectos pueden incluir la hipertensión o hipotensión, dolor respiratorio o pérdida de reflejos protectores de las vías respiratorias, edema pulmonar y varios efectos autonómicos. Muchas de estas complicaciones podrían ser evitadas o minimizadas mediante una inmediata neutralización de las citocinas.

En el pasado, han sido obtenidos "antivenenos" contra mordeduras de serpientes, a partir de caballos hiperinmunizados con veneno de serpiente y a continuación, administrados a individuos mordidos por serpientes venenosas. Aunque los anticuerpos del suero de caballo neutralizaron las toxinas del veneno de serpiente, otros anticuerpos de caballo permanecieron algunas veces en el individuo durante varias semanas. Una condición llamada "enfermedad del suero" apareció algunas veces como respuesta a la inyección del suero (el cual incluye anticuerpos completos), de una especie extraña en un paciente en necesidad de tratamiento. Las diferencias entre la secuencia primaria de aminoácidos de la inmunoglobulina de caballo y la inmunoglobulina humana ocasionaron que el individuo empezara a fabricar anticuerpos contra la inmunoglobulina de caballo, que le era extraña, y otras proteínas de suero presentes en la inyección. La enfermedad del suero empezó a manifestarse por si misma, 7-10 días después de la inyección inicial. En este momento, el individuo empezó a mostrar síntomas como fiebre, escalofríos y algunas veces, nefritis glomerular. Aunque los síntomas se resolvieron por sí mismos después de la eliminación del antígeno extraño de la sangre del individuo, la re-exposición al mismo antígeno dio como resultado síntomas acelerados y potencialmente más graves (es decir, cinéticas similares a una respuesta inmunológica secundaria). Más recientemente, la generación de anticuerpos se ha logrado empleando construcciones de ADN recombinante que expresan péptidos del veneno. Esta tecnología se ha empleado más extensamente contra el grupo de citocinas inflamatorias que incluye los TNF-a, IFN-?, IL-1 y IL-6.

La psoriasis vulgaris es una enfermedad inflamatoria inducida por las células T. La patogénesis de la psoriasis está ligada a la activación de varios tipos de leucocitos que controlan la inmunidad celular y al proceso inflamatorio dependiente de las células T, en la piel, que acelera el crecimiento de las células epidermales y vasculares en las lesiones de psoriasis. Los pasos críticos en la activación inmunológica incluyen la maduración...

1. Empleo de un fragmento de un anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a neutralizante, para la preparación de un medicamento para administración tópica para el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual se debe al rechazo de un trasplante córneo, en donde dicho medicamento está preparado para la directa aplicación sobre el ojo.

2. El empleo de la reivindicación 1, en donde dicho fragmento de anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a está libre de albúmina, de anticuerpos completos, y/o pirógenos.

3. El empleo de la reivindicación 1, en donde el medicamento comprende un soporte oftalmológicamente aceptable.

4. Fragmento del anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a neutralizante, para emplear en el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual es debida al rechazo de un transplante de córnea, en donde el fragmento del anticuerpo está comprendido en un medicamento de administración tópica, y en donde el medicamento está preparado para la directa aplicación sobre el ojo.

5. Fragmento del anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a neutralizante, de la reivindicación 4, para emplear en el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual es debida al rechazo de un transplante de córnea, en donde dicho fragmento del anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a está libre de albúmina, anticuerpos completos y/o pirógenos.

6. Fragmento del anticuerpo F(ab')₂ anti-TNF-a neutralizante, de la reivindicación 4, para emplear en el tratamiento de una reacción inmunológica inducida por el TNF-a, la cual es debida al rechazo de un transplante de córnea, en donde el medicamento comprende un soporte oftalmológicamente aceptable.