METODO PARA LA PREPARACION DE MOLECULAS DE ACIDO NUCLEICO.
Un método para la fabricación de una molécula de ácido nucleico que comprende las etapas de a) proporcionar un primer oligonucleótido al menos parcialmente bicatenario que tiene una modificación que permite al oligonucleótido acoplarse a una superficie,
en el que el oligonucleótido comprende un sitio de reconocimiento de una primera enzima de restricción de tipo IIS que corta fuera de su sitio de reconocimiento, y dicho oligonucleótido comprende un saliente monocatenario, b) proporcionar un segundo oligonucleótido al menos parcialmente bicatenario, en el que el oligonucleótido comprende un sitio de reconocimiento o una parte del mismo o una secuencia que es complementaria del mismo de una segunda enzima de restricción de tipo IIS que corta fuera de su sitio de reconocimiento, y dicho segundo oligonucleótido comprende un saliente monocatenario, c) ligar el primer y segundo oligonucleótidos mediante sus salientes, generando un primer producto de ligamiento, d) inmovilizar el primer producto de ligamiento en la superficie mediante la modificación, e) cortar el producto de ligamiento inmovilizado con la primera enzima de restricción de tipo IIS, liberando así un oligonucleótido alargado que tiene un saliente, f) combinar el oligonucleótido alargado con un oligonucleótido adicional al menos parcialmente bicatenario que tiene una modificación que permite al oligonucleótido acoplarse a una superficie, en el que el oligonucleótido adicional comprende un sitio de reconocimiento de una enzima de restricción de tipo IIS adicional que corta fuera de su sitio de reconocimiento, y dicho oligonucleótido comprende un saliente monocatenario, y ligar el segundo oligonucleótido alargado y el oligonucleótido adicional al menos parcialmente bicatenario mediante sus salientes, formando un producto de ligamiento adicional, g) inmovilizar el producto de ligamiento adicional en una superficie mediante la modificación, h) cortar el producto de ligamiento adicional con la enzima de restricción de tipo IIS adicional, liberando un oligonucleótido alargado que tiene un saliente, y i) opcionalmente, repetir las etapas f) a h).
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: SLONING BIOTECHNOLOGY GMBH.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: ZEPPELINSTRASSE 4,82178 PUCHHEIM.
Inventor/es: SCHATZ, OCTAVIAN, O'CONNELL,TIMOTHY, SCHWER,HEINZ, WALDMANN,THOMAS.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 18 de Octubre de 2002.
Fecha Concesión Europea: 9 de Julio de 2008.
Clasificación PCT:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/66 C12N 15/00 […] › Métodos generales para insertar un gen en un vector para formar un vector recombinante, utilizando la escisión y la unión; Utilización de "linkers" no funcionales o de adaptadores, p. ej. "linkers" que contienen la secuencia para una endonucleasa de restricción.
- C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
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