ANALISIS Y DETECCION DE MULTIPLES SECUENCIAS DIANA USANDO SONDAS CIRCULARES.
Un método para determinar la presencia o ausencia de una secuencia diana en una muestra de ácido nucleico,
comprendiendo el método las etapas de:# (a) proporcionar a una muestra de ácido nucleico al menos una sonda circularizable para cada secuencia diana a detectar en la muestra, por lo que la sonda tiene una primera sección específica de diana en su extremo 5'' que es complementaria a una primera parte de una secuencia diana y una segunda sección específica de diana en su extremo 3'' que es complementaria a una segunda parte de la secuencia diana, por lo que la primera y segunda partes de las secuencias diana están localizadas adyacentes entre sí, y por lo que la sonda comprende adicionalmente una sección de marca que es esencialmente no complementaria a la secuencia diana, por lo que la sección de marca puede comprender una secuencia de relleno y por lo que la sección de marca comprende al menos una secuencia de unión a cebador; #(b) permitir que la primera y segunda secciones específicas de diana de la sonda circular hibriden con la primera y segunda partes de las secuencias diana por lo que la primera y segunda secciones específicas de diana de la sonda hibridan adyacentes en la secuencia diana; #(c) proporcionar un medio para el ligamiento de la primera y segunda secciones específicas de diana hibridadas de forma adyacente a la secuencia diana y permitir que en la primera y segunda secciones específicas de diana conecten, para producir una sonda circular ligada, correspondiente a una secuencia diana en la muestra;# (d) proporcionar al menos un primer cebador que es complementario a la secuencia de unión a cebador, y una enzima polimerasa;# (e) amplificar la mezcla resultante para producir una muestra amplificada que comprende amplicones que son representaciones lineales de las sondas circulares ligadas; #(f) determinar la presencia o ausencia de una secuencia diana en una muestra detectando la presencia o ausencia del amplicón correspondiente; en el que al menos una sonda circularizable contiene una sección de bloqueo que comprende un grupo de bloqueo que está localizado adyacente al extremo 3'' del sitio de unión al cebador, de modo que la sección de bloqueo detiene la elongación o amplificación del cebador hibridado con la sonda circularizada, generando de este modo una representación lineal de la sonda circular y de modo que el grupo de bloqueo se excluya de la elongación o amplificación del cebador.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: KEYGENE N.V..
Nacionalidad solicitante: Países Bajos.
Dirección: P.O. BOX 216,6700 AE WAGENINGEN.
Inventor/es: VAN EIJK,MICHAEL,JOSEPHUS,THERESIA, HOGERS,RENE,CORNELIS,JOSEPHUS.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 28 de Marzo de 2007.
Clasificación PCT:
- C12N15/09 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
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