ENZIMA TERMOESTABLE PURIFICADA Y PROCESO PARA AMPLIFICAR, DETECTAR Y/O CLONAR SECUENCIAS DE ACIDO NUCLEICO UTILIZANDO DICHA ENZIMA.

SE OBTIENE UNA ENZIMA TERMOESTABLE PURIFICADA QUE TIENE UNAS CARACTERISTICAS UNICAS.

PREFERENTEMENTE LA ENZIMA SE SEPARA DE LA ESPECIE THERMUS AQUATICUS Y TIENE UN PESO MOLECULAR DE 86.000 A 90.000 DALTONS APROXIMADAMENTE. LA ENZIMA TERMOESTABLE PUEDE SER NATIVA O RECOMBINANTE Y SE PUEDE UTILIZAR EN UNA REACCION EN CADENA DE CICLADO DE TEMPERATURA EN DONDE SE AMPLIFICA LA CANTIDAD DE POR LO MENOS UNA SECUENCIA DE ACIDO NUCLEICO A PARTIR DE UNA SECUENCIA YA EXISTENTE CON LA AYUDA DE CEBADORES SELECCIONADOS Y DE TRIFOSFATOS NUCLEOTIDOS. EL PROCESO DE AMPLIFICACION CONSISTE EN TRATAR CEPAS COMPLEMENTARIAS INDEPENDIENTES DEL ACIDO NUCLEICO CON UN EXCESO MOLAR DE DOS CEBADORES OLIGONUCLEOTIDOS, EXTENDER LOS CEBADORES CON UNA ENZIMA TERMOESTABLE PARA FORMAR PRODUCTOS DE EXTENSION CEBADORES COMPLEMENTARIOS QUE ACTUAN COMO MODELOS PARA SINTETIZAR LA SECUENCIA DE ACIDO NUCLEICO DESEADA Y DETECTAR LA SECUENCIA ASI AMPLIFICADA. LOS PASOS DE LA REACCION SE PUEDEN REPETIR CUANTAS VECES SE DESEE Y EN ELLOS INTERVIENE EL CICLADO DE TEMPERATURA PARA EFECTUAR LA HIBRIDACION, PROMOCION DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA Y DESNATURALIZACION DE LOS HIBRIDOS FORMADOS. LA ENCIMA SE ALMACENA PREFERENTEMENTE EN UN TAMPON DE DETERGENTES NO IONICOS QUE LE CONFIEREN ESTABILIDAD A LA ENZIMA.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: POSTFACH 3255,4002 BASEL.

Inventor/es: GELFAND, DAVID HARROW, STOFFEL, SUSANNE, ERLICH, HENRY ANTHONY, HORN, GLENN, SAIKI, RANDALL KEICHI, MULLIS, KARY BANKS, LAWYER, FRANCES COOK.

Fecha de Publicación: 16 de Octubre de 1997.

Fecha Concesión Europea: 4 de Junio de 1997.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N9/12 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › transfieren grupos que contienen fósforo, p. ej. Quinasas (2.7).
C12N9/96 C12N 9/00 […] › Estabilización de una enzima por formación de un aducto o de una composición; Formación de conjugaciones de enzimas.
C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

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