Formulación que contiene lípidos.

Un compuesto de fórmula (XV)

en la que

cada uno de L1 y L2 es un enlace;

cada R1 y R2 es independientemente alquilo C6-C28 o alquenilo C6-C30;

X es -C(O)NH-;

m es un entero entre 0 y 11; y

n es un entero entre 1 y 500.

Formulación que contiene lípidos La presente invención se refiere a composiciones y métodos útiles en la administración de terapias a base de ácido nucleico, por ejemplo complejos de asociación tales como liposomas y lipoplexos.

La oportunidad de usar terapias basadas en ácido nucleico es bastante alentadora, ofreciendo soluciones a problemas médicos a los que no podría hacerse frente con las medicinas tradicionales actuales. Se están identificando la ubicación y las secuencias de un número cada vez mayor de genes relacionados con enfermedades, y los ensayos clínicos de compuestos terapéuticos a base de ácido nucleico para una diversidad de enfermedades están ahora en curso.

Un método para introducir ácidos nucleicos en una célula es usar mecánicamente microinyección directa. No obstante, este método en general no es eficaz para administración sistémica a un sujeto.

La administración sistémica de compuestos terapéuticos de ácido nucleico requiere distribuir ácido nucleico a las células diana y luego transferir el ácido nucleico a través de una membrana de células diana intacta y en un modo que pueda funcionar terapéuticamente.

Los vectores víricos, en algunos casos, se han utilizado clínicamente con éxito para administrar terapias basadas en ácido nucleico. Sin embargo, si bien los vectores víricos tienen la capacidad inherente de transportar ácidos nucleicos por las membranas celulares, pueden conllevar riesgos. Uno de dichos riesgos implica la integración aleatoria de secuencias genéticas víricas en los cromosomas del paciente, dañando potencialmente el genoma y posiblemente induciendo una transformación maligna. Otro riesgo es que el vector vírico puede revertirse a un genotipo patogénico o bien a través de mutación o intercambio genético con un virus de tipo salvaje.

Los vectores basados en lípidos también se han usado en terapias de ácido nucleico y se han formulado en una de dos maneras. En un método, el ácido nucleico se introduce en liposomas o lipoplexos preformados hechos de mezclas de lípidos catiónicos y lípidos neutros. Los complejos así formados tienen estructuras indefinidas y complicadas, y la eficiencia de la transfección se reduce intensamente por la presencia de suero. El segundo método implica la formación de complejos de DNA con lípidos mono o poli-catiónicos sin la presencia de un lípido neutro. Estos complejos se preparan en presencia de etanol y no son estables en agua. Además, estos complejos se ven afectados adversamente por el suero (véase, Behr, Acc. Chem. Res. 26:274-78 (1993) ) .

En este contexto, el documento US 2005/0064595 A1 describe composiciones y métodos para silenciar la expresión génica administrando partículas de ácido nucleico-lípido que comprenden una molécula de siRNA a una célula. A su vez, el documento US 2006/0211642 A1 describe compuestos, composiciones y métodos para modular la expresión del gen del Virus de Hepatitis C usando moléculas de siRNA. Finalmente, el documento WO 2005/026372 A1 describe lípidos que contienen nitrógeno preparados a partir de la adición de conjugado de aminas a acrilatos, acrilamidas u otros dobles enlaces carbono-carbono conjugados a grupos aceptores de electrones, como también métodos para prepararlos.

La invención describe nuevos compuestos, complejos de asociación y métodos según lo caracterizado en las reivindicaciones.

Definiciones El término “halo” o '"halógeno” se refiere a cualquier radical de flúor, cloro, bromo o yodo.

El término ‘‘alquilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada que puede ser de cadena lineal o ramificada, que contiene el número indicado de átomos de carbono. Por ejemplo, alquilo C1-C36 indica que el grupo puede tener

entre 1 y 136 (inclusive) átomos de carbono. El término “haloalquilo" se refiere a un alquilo en el que uno o más átomos de hidrógeno se reemplazan por halo, e incluye restos alquilo en los que todos los hidrógenos han sido reemplazados por halo (p. ej., perfluoroalquilo) . Los términos “arilalquilo” o “aralquilo” se refieren a un resto alquilo en el que un átomo de alquilo e hidrógeno se reemplaza por un grupo arilo. Aralquilo incluye grupos en los que más de un átomo de hidrógeno ha sido reemplazado con un grupo arilo. Los ejemplos de "arilalquilo” o “aralquilo”

incluyen grupos bencilo, 2-feniletilo, 3-fenilpropilo, 9-fluorenilo, benzhidrilo y tritilo.

El término “alquileno” se refiere a un alquilo divalente, p. ej., -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2CH2- y CH2CH2CH2CH2CH2CH2-.

El término “alquenilo” se refiere a una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada que contiene 2-36 átomos de carbono y que tiene uno o más dobles enlaces. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, aunque sin limitarse a ello, grupos alilo, propenilo, 2-butenilo, 3-hexenilo y 3-octenilo. Uno de los carbonos de doble enlace puede opcionalmente ser el punto de sujeción del sustituyente de alquenilo. El término “alquinilo” se refiere a una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada que contiene 2-36 átomos de carbono y se caracteriza por tener uno o más triples enlaces. Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen, aunque sin limitarse a ello, etinilo, propargilo y 3-hexinilo. Uno de los carbonos de triple enlace puede ser opcionalmente el punto de sujeción del sustituyente de alquinilo.

El término “sustituyentes” se refiere a un grupo "sustituido" en un grupo alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, heterociclilo, heterocicloalquenilo, cicloalquenilo, arilo o heteroarilo en cualquier átomo de ese grupo. Cualquier átomo puede sustituirse. Los sustituyentes adecuados incluyen, aunque sin limitarse a ello, alquilo (p. ej., alquilo de cadena lineal o ramificada C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, C12) , cicloalquilo, haloalquilo (p. ej., perfluoroalquilo tal como CF3) , arilo, heteroarilo, aralquilo, heteroaralquilo, heterociclilo, alquenilo, alquinilo cicloalquenilo, heterocicloalquenilo, alcoxi, haloalcoxi (p. ej., perfluoroalcoxi tal como OCF3) , halo, hidroxi, carboxi, carboxilato, ciano, nitro, amino, alquilo, amino, SO3H, sulfato, fosfato, metilenodioxi (-O-CH2-O- en donde los oxígenos están unidos a los mismos átomos de carbono (sustitución germinal) ) , etilenodioxi, oxo, tioxo (p. ej., C=S) , imino (alquilo, arilo, aralquilo) , S (O) nalquilo (en donde n es 0-2) , S (O) n arilo (en donde n es 0-2) , S (O) n heteroarilo (en donde n es 0-2) , S (O) n heterociclilo (en donde n es 0-2) , amina (mono-, di-, alquilo, cicloalquilo, aralquilo heteroaralquilo, arilo, heteroarilo y sus combinaciones) , éster (alquilo, aralquilo, heteroaralquilo, arilo, heteroarilo) , amida (mono-, di-, alquilo, aralquilo, heteroaralquilo, arilo, heteroarilo y sus combinaciones) , sulfonamida (mono-, di-, alquilo, aralquilo, heteroaralquilo y sus combinaciones) . En un aspecto, los sustituyentes en un grupo son independientemente cualquiera de los sustituyentes individuales o cualquier subconjunto de los sustituyentes mencionados anteriormente. En otro aspecto, un sustituyente puede por sí mismo sustituirse con uno cualquiera de los sustituyentes antes mencionados.

La expresión “isómero estructural”, tal como se emplea en esta memoria, se refiere a cualquiera de dos o más compuestos químicos, tales como alcohol propílico y alcohol isopropílico, que tienen la misma fórmula molecular pero distintas fórmulas estructurales.

La expresión “isómero geométrico" o "estereoisómero", tal como se emplea en la presente memoria, se refiere a dos o más compuestos que contienen el mismo número y tipos de átomos, y enlaces (es decir, la conectividad entre átomos es la misma) , pero que tienen disposiciones espaciales de los átomos distintas, por ejemplo isómeros cis y trans de un doble enlace, enantiómeros y diastereómeros.

Para comodidad, a continuación se indica el significado de ciertos términos y frases utilizados en la memoria, los ejemplos y las reivindicaciones anejas. Si existe una discrepancia obvia entre el uso de un término en otras partes de la presente memoria y su definición provista en esta sección, prevalecerá la definición de esta sección.

"G", "C", "A" y "U" equivalen cada uno a un nucleótido que contiene guanina, citosina, adenina y uracilo como base, respectivamente. No obstante, se ha de entender que el término "ribonucleótido" o "nucleótido" puede también referirse a un nucleótido modificado, como se detalla a continuación, o a un resto de reemplazo. El experto en la técnica sabe bien que guanina, citosina, adenina y uracilo pueden reemplazarse con otros restos... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (XV)

fórmula (XV)

en la que cada uno de L1 y L2 es un enlace;

cada R1 y R2 es independientemente alquilo C6-C28 o alquenilo C6-C30;

X es -C (O) NH-;

m es un entero entre 0 y 11; y

n es un entero entre 1 y 500.

2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que cada R1 y R2 es independientemente alquilo C6-C28.

3. El compuesto según la reivindicación 2, en el que cada R1 y R2 es independientemente alquilo C10-C18.

4. El compuesto según la reivindicación 1, en el que tanto R1 como R2 es alquilo C14 de cadena lineal o alquilo C16 que tiene la misma longitud.

5. El compuesto según la reivindicación 4, en el que tanto R1 como R2 es alquilo C14.

6. El compuesto según la reivindicación 1, en el que la fórmula XV representa una mezcla racémica.

7. El compuesto según la reivindicación 1, en el que la fórmula XV representa el isómero 'R' enantioméricamente puro, en particular un compuesto que tiene un exceso enantiomérico del isómero R, en particular por lo menos aproximadamente 95% ee, o más de 97% ee, en particular 98% o 99%.

8. El compuesto según la reivindicación 1, en el que la fórmula XV representa el isómero 'S' enantioméricamente puro, en particular un compuesto que tiene un exceso enantiomérico del isómero S, en particular por lo menos aproximadamente 95% ee, o más de 97% ee, en particular 98% o 99%.

9. El compuesto según la reivindicación 1, en el que cada R1 y R2 es el mismo resto alquenilo C6-C30.

10. El compuesto según la reivindicación 9, en el que cada R1 y R2 incluye un doble enlace sencillo, en particular un doble enlace sencillo en la configuración E o Z.

11. El compuesto según la reivindicación 9, en el que cada R1 y R2 incluye dos restos de doble enlace.

12. El compuesto según la reivindicación 1, en el que m es un entero entre 1 y 10, en particular un entero entre 2 y 4

o un entero 2.

13. El compuesto según la reivindicación 1, en el que n es un entero entre 1 y 500, en particular un entero entre 40 y 400, entre 100 y 350, entre 40 y 50 o entre 42 y 47.

14. El compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto tiene la fórmula (XVI) siguiente:

fórmula (XVI)

en la que el resto de PEG de repetición tiene un peso molecular promedio de 2000 con un valor de n entre 42 y 47.

15. El compuesto según la reivindicación 14, en el que el compuesto de fórmula XVI es un estereoisómero con una configuración absoluta 'R' preferida, que tiene un exceso enantiomérico del isómero R tal como de 90%, 95%, 97%, 98%, 99%.

16. Un complejo de asociación que comprende: 5 a. un lípido catiónico;

b. un lípido de PEG según la reivindicación 1;

c. un lípido estructural; y

d. un ácido nucleico.

17. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que dicho lípido catiónico es uno de los siguientes o 10 una de sus mezclas:

18. El complejo de asociación según la reivindicación 17, en el que dicho lípido catiónico es

19. El complejo de asociación según la reivindicación 17, en el que dicho lípido catiónico es

20. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que dicho lípido de PEG posee la estructura

en donde: n es un entero entre 1 y 500.

21. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que dicho lípido de PEG tiene un exceso

enantiomérico del isómero R, en particular de por lo menos aproximadamente 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% o 99%.

22. El complejo de asociación según la reivindicación 20, en el que dicho lípido estructural es colesterol.

23. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que la relación molar de dicho lípido catiónico, dicho lípido estructural y dicho lípido de PEG e.

3. 48:42-54:6-14, en particula.

3. 48:44-52:8-12, en particular 42:48:10.

24. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que la relación en peso de lípidos totales a ácido nucleico es inferior a aproximadamente 15:1.

25. El complejo de asociación según la reivindicación 24, en el que la relación en peso de lípidos totales a ácido nucleico es de aproximadamente 10:1, en particular aproximadamente 7.5:1, en particular aproximadamente 5:1.

26. El complejo de asociación según la reivindicación 16, en el que dicho lípido catiónico es

dicho lípido de PEG es en donde: 20 n es un entero entre 1 y 500.

27. Un método para formar un complejo de asociación según la reivindicación 16, en donde el método comprende:

(a) mezclar el lípido catiónico, el lípido de PEG y el lípido estructural en etanol y tampón de NaOAc acuoso para proporcionar partículas; y

(b) añadir el ácido nucleico a la partícula, formando así el complejo de asociación. 25 28. El método según la reivindicación 27, etapa (a) que además comprende extrusar las partículas.