Estabilización de termolisina en solución acuosa.
(20/04/2016) Una composición líquida que comprende la termolisina en una forma disociada y a una concentración en el rango de aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml, en el que a una temperatura en el rango de aproximadamente 2 °C y aproximadamente 8 °C y al menos cinco horas después de la formación de la composición, la turbidez de la composición es igual a la turbidez de una solución de referencia, siendo la composición obtenible por un método que comprende la primera etapa (P) de mezclar una preparación sólida que comprende la termolisina con un disolvente acuoso y obteniendo una primera solución, en el que la preparación sólida comprende la termolisina a una concentración de aproximadamente 20% [p/p] o superior,
y en el que la primera solución comprende
(i) una sal de tampón…
Medio de crecimiento para Clostridium histolyticum sin ingredientes de fuentes de mamífero.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(04/02/2016). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N1/20, C12N9/52.
Un medio líquido para el cultivo de Clostridium histolyticum, comprendiendo el medio agua, una gelatina de pescado y una peptona vegetal, seleccionándose la fuente de la peptona del grupo que consiste en soja, haba, guisante, patata, y una mezcla de los mismos, en el cual la concentración de agregado de la peptona o peptonas vegetales en el medio es entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 10 % en peso por volumen, y por lo cual en el medio la concentración de gelatina de pescado es entre aproximadamente el 2 % y aproximadamente el 10 %, indicando el porcentaje peso por volumen cuando al gelatina de pescado aislada es materia seca y volumen por volumen cuando la gelatina de pescado aislada es materia líquida.
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Variantes de la T7 ARN polimerasa con sustituciones de Cisteína-Serina.
(15/04/2015) Una solución acuosa en la que está ausente un agente reductor con un grupo tiol, comprendiendo la solución acuosa un polipéptido, comprendiendo el polipéptido una variante de la T7 ARN polimerasa (variante de T7), teniendo la variante de T7 las propiedades de (i) actividad de ARN polimerasa dependiente de ADN, y (ii) una composición distinta de aminoácidos en comparación con el polipéptido de 883 aminoácidos de la T7 ARN polimerasa de SEC ID Nº: 2 (referencia de tipo silvestre),
en la que en una posición seleccionada de la 510 a la 530 de la variante de T7, numerada a partir del extremo N-terminal de la referencia de tipo silvestre, está presente un resto de Cisteína,
en la que la variante de T7 comprende una o más sustituciones de aminoácidos de las cuales una (o la primera) está en la posición…
Polimerasas libres de detergente.
(26/11/2014) Mezcla de reacción libre de cualquier detergente que comprende una formulación de una ADN polimerasa termoestable que está completamente libre de detergentes, que comprende Tris/HCl 10 a 50 mM, EDTA 0,05-0,2 mM, DTT 0,5-2 mM, cloruro de potasio 50-200 mM y glicerol al 20-80 %,
- un ácido nucleico de molde, que preferentemente es un ADN,
- al menos un cebador que es un oligonucleótido que se puede unir a dicho ADN, y
- 4 dNTP,
que comprende adicionalmente al menos un par de sondas de hibridación de FRET.
Estabilización de la termolisina en solución acuosa.
(27/11/2013) Un método para preparar una solución de termolisina (EC 3.4.24.27) en la que la termolisina disuelta se presentaen forma estabilizada, y el método incluye el primer paso (P) de mezclar una preparación sólida que incluyetermolisina con un disolvente acuoso y elaborar una primera solución, en la que el preparado sólido incluyetermolisina a una concentración de aproximadamente el 20% [peso/peso] o mayor,
y en el que la primera solución incluye
(i) una sal tampón capaz de mantener un pH en el rango de entre 4,5 y 9,
(ii) una o más sales, y
(iii) termolisina,
y en la primera solución la concentración del preparado que incluye termolisina en el disolvente acuoso se encuentraen el rango de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, y la concentración total de una omás sales,…
Una composición acuosa estabilizada de alfa-galactosidasa y métodos relacionados con la misma.
(19/09/2012) Una composición acuosa que comprende una proteína bacteriana con actividad enzimática alfa-galactosidasa,que se caracteriza en que dicha composición contiene arginina a una concentración por encima de 100 mM, enparticular a una concentración de al menos 150 mM, y en la que la conductividad de dicha composición es comomucho 40 mS/cm.
Purificación mejorada de colagenasas a partir de un cultivo líquido de Clostridium histolyticum.
(06/06/2012) Un método para purificar proteínas de colagenasas de tipo I y de tipo II del Clostridium histolyticum a partir de unamezcla compleja, que consta de los pasos siguientes:
(a) preparar la mezcla compleja disuelta en una fase líquida acuosa;
(b) formar un precipitado de proteínas de colagenasas de tipo I y de tipo II disolviendo el sulfato amónico en la faselíquida del paso (a);
(c) separar el precipitado del paso (b) de la fase líquida;
(d) disolver el precipitado del paso (c) en un tampón acuoso que contiene iones 10 Ca2+ y tiene un pH entre 6,0 y 8,0, yajustar la conductividad del tampón con el precipitado disuelto a un valor comprendido entre 50 y 300 mS/cm,formándose una solución compleja tamponada que contiene las proteínas de colagenasas de tipo I y de tipo II;
(e)…
Fosfatasa alcalina codón-optimizada y su expresión en levadura.
(11/04/2012) Cepa huésped transformada que se obtiene al llevar a cabo las etapas
(a) clonación de una secuencia genética codón-optimizada que codifica para una fosfatasa alcalina eucariota en un primer vector de expresión con un gen de resistencia a un primer antibiótico, y en un segundo vector de expresión con un gen de resistencia a un segundo antibiótico; seguido de
(b) transformación de un huésped de levadura con un primer vector de expresión y la selección de transformantes que tienen integrados en el genoma, por lo menos, una copia del primer vector de expresión con una secuencia genética y el gen de resistencia al primer antibiótico, por medio de su crecimiento sobre un medio de cultivo con una baja concentración del primer antibiótico; seguido de
(c) aumento del número de copias de genes del primer vector de…
METODO PARA LA PRODUCCION DE UNA TRANSCRIPTASA INVERSA AMV HETERODIMERICA ACTIVA, EN CELULAS PROCARIOTAS.
(18/10/2010) Método para la producción de una AMV-RT heterodimérica activa en células procariotas, en el que
(i) se clonan una o varias secuencias de ADN que codifican las cadenas a y/o ß de la AMV-RT en plásmidos de expresión,
(ii) los plásmidos de expresión se transforman en células procariotas,
(iii) se induce la expresión soluble de la AMV-RT heterodimérica, y
(iv) se aísla la AMV-RT heterodimérica recombinante de las células, en el que la expresión se produce a una temperatura de crecimiento de aproximadamente 15ºC y a una concentración de inductor entre 0,1 M y 0,5 M
ELABORACION DE MUTANTES DE UNA FOSFATASA ALCALINA, INACTIVOS O DE REDUCIDA ACTIVIDAD Y SU EXPRESION EN LEVADURA.
(28/04/2010) Mutantes de la fosfatasa alcalina eucariótica, en donde,
- la frecuencia a mutar, es la SEQ ID NO:2, y
- el mutante, presenta una actividad reducida como mínimo en un factor de 100, en comparación con la del tipo salvaje,
el mutante, presente una o varias de las mutaciones que se citan a continuación, y en donde, la posición de la mutación, se encuentra definida con relación a la SEQ ID NO: 2:
Ser92:por Ala ó Gly
His320:por Asn ó Phe
Gly 322:por Phe ó Lys
CARBOXIPEPTIDASA B RECOMBINANTE Y SU PURIFICACION.
(28/04/2010) Un método para producir una proteína con actividad carboxipeptidasa B, que comprende los pasos de
(a) proporcionar un vector que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una pre-proteína que consiste en una procarboxipeptidasa B de rata que está fusionada en N-terminal con una cola de histidinas y un péptido señal, siendo el péptido señal la secuencia N-terminal de la pre-proteína, e insertándose opcionalmente entre la cola de histidinas y el péptido señal o entre la cola de histidinas y la carboxipeptidasa B de rata una secuencia espaciadora;
(b) transformar un organismo microbiano huésped con el vector;
(c) cultivar el organismo microbiano huésped en un medio de cultivo que contiene nutrientes y una fuente de carbono, expresando el organismo microbiano huésped la pre-proteína y secretándose la pro-carboxipeptidasa…
EXPRESION DE LA FOSFATASA ALCALINA EN LEVADURA.
(01/11/2007) Procedimiento para la obtención de una fosfatasa alcalina eucariota en células de levadura que consta de los pasos siguientes: a) clonación de una secuencia genética en diversos vectores, b) transformación de la levadura, c) expresión y d) purificación de la fosfatasa alcalina, caracterizado porque - un primer vector presenta un gen de resistencia contra un primer marcador de selección, - se seleccionan los transformantes, que han integrado el gen de resistencia y la secuencia genética en el genoma, mediante el cultivo en un medio nutritivo que tiene una baja concentración del primer marcador de selección, - se aumenta el número de copias del gen por transformación múltiple, seleccionándose los transformantes múltiples por cultivo en un medio nutritivo…
EXPRESION DE LA PROTEINASA K RECOMBINANTE DE TRITIRACHIUM ALBUM EN LEVADURA.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(16/09/2007). Ver ilustración. Solicitante/s: ROCHE DIAGNOSTICS GMBH F.HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N15/09, C12N15/55, C12N1/19, C12P21/00, C12N15/52, C12N9/58, C12N9/60, C12N15/67, C12N15/80, C12N15/66.
Procedimiento para la obtención de proteinasa K recombinante que consta de los pasos siguientes: a) la transformación de una célula hospedante con un vector que contiene un DNA que codifica al compuesto previo zimógeno de la proteinasa K, este DNA está fusionado en la parte ascendente (upstream) de la secuencia codificadora con una secuencia del marco de lectura, que codifica a un péptido de señal y está bajo el control de un promotor adecuado para la célula hospedante, b) la expresión del compuesto zimógeno previo de la proteinasa K, c) la secreción y la activación autocatalítica de la proteinasa K, caracterizado porque la célula hospedante es una célula de levadura elegida entre el grupo formado por la especie Pichia, la especie Hansenula, la especie Saccharomyces y la especie Schizosaccharomyces y el hospedante de expresión secreta la proteína en forma soluble.