Método para producir colágeno a alta concentración para su uso como material médico.
Método de producción de colágeno a una concentración de 60 mg/ml o más para su uso como material médico,
que comprende:
lavar tejido de un mamífero;
someter el tejido lavado a trituración e inmersión en alcohol etílico, en el que el tejido triturado del mamífero se sumerge en alcohol etílico al 70% durante al menos 72 h y luego se hace reaccionar con pepsina durante al menos 72 h en una disolución titulada hasta un pH de 1,5 ∼ 2,5 de modo que se inactiva un virus y se extrae colágeno;
someter el tejido a tratamiento enzimático con agitación en agua purificada que contiene ácido fosfórico y pepsina;
añadir cloruro de sodio al colágeno sometido a tratamiento enzimático, realizar agitación y agregar el colágeno;
disolver el colágeno agregado en agua purificada para dar una disolución de colágeno, que se filtra entonces usando un filtro y se concentra eliminado la pepsina, material de bajo peso molecular y cloruro de sodio de la disolución de colágeno usando un dispositivo de filtración de flujo tangencial;
someter el colágeno concentrado usando el dispositivo de filtración de flujo tangencial a filtración estéril, agregar el colágeno usando una disolución de pH en un tanque de neutralización y concentrar el colágeno eliminando una disolución no agregada; y
concentrar el colágeno concentrado usando una centrífuga y agitar el colágeno concentrado usando una mezcladora.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/KR2014/012176.
Solicitante: Sewoncellontech Co., Ltd.
Nacionalidad solicitante: República de Corea.
Dirección: (Yeouido-dong, SIMPAC building) 52, Gukjegeumyung-ro, Yeongdeungpogu Seoul 07330 REPUBLICA DE COREA.
Inventor/es: CHANG,Cheong-Ho, YEO,SE-KEN, SUH,DONG-SAM, YOO,JI CHUL, JEONG,HYEONG WOO.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61L27/24 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61L PROCEDIMIENTOS O APARATOS PARA ESTERILIZAR MATERIALES U OBJECTOS EN GENERAL; DESINFECCION, ESTERILIZACION O DESODORIZACION DEL AIRE; ASPECTOS QUIMICOS DE VENDAS, APOSITOS, COMPRESAS ABSORBENTES O ARTICULOS QUIRURGICOS; MATERIALES PARA VENDAS, APOSITOS, COMPRESAS ABSORBENTES O ARTICULOS QUIRURGICOS (conservación de cuerpos o desinfección caracterizada por los agentes empleados A01N; conservación, p. ej. esterilización de alimentos o productos alimenticios A23; preparaciones de uso medico, dental o para el aseo A61K). › A61L 27/00 Materiales para prótesis o para revestimiento de prótesis (prótesis dentales A61C 13/00; forma o estructura de las prótesis A61F 2/00; empleo de preparaciones para la fabricación de dientes artificiales A61K 6/80; riñones artificiales A61M 1/14). › Colágeno.
- A61L27/36 A61L 27/00 […] › que contienen ingredientes de composición indeterminada o sus productos de reacción.
- A61L27/38 A61L 27/00 […] › Células animales (para utilizar en piel artificial A61L 27/60).
- C07K1/14 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › Extracción; Separación; Purificación.
- C07K1/34 C07K 1/00 […] › por filtración, ultrafiltración u ósmosis inversa.
- C07K14/78 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Péptidos del tejido conectivo, p. ej. colágeno, elastina, laminina, fibronectina, vitronectina, globulina insoluble en frío (CIG).
PDF original: ES-2791281_T3.pdf
Reivindicaciones:
1. Método de producción de colágeno a una concentración de 60 mg/ml o más para su uso como material médico, que comprende:
lavar tejido de un mamífero;
someter el tejido lavado a trituración e inmersión en alcohol etílico, en el que el tejido triturado del mamífero se sumerge en alcohol etílico al 70% durante al menos 72 h y luego se hace reaccionar con pepsina durante al menos 72 h en una disolución titulada hasta un pH de 1, 5 ~ 2, 5 de modo que se inactiva un virus y se extrae colágeno; someter el tejido a tratamiento enzimático con agitación en agua purificada que contiene ácido fosfórico y pepsina; añadir cloruro de sodio al colágeno sometido a tratamiento enzimático, realizar agitación y agregar el colágeno; disolver el colágeno agregado en agua purificada para dar una disolución de colágeno, que se filtra entonces usando un filtro y se concentra eliminado la pepsina, material de bajo peso molecular y cloruro de sodio de la disolución de colágeno usando un dispositivo de filtración de flujo tangencial;
someter el colágeno concentrado usando el dispositivo de filtración de flujo tangencial a filtración estéril, agregar el colágeno usando una disolución de pH en un tanque de neutralización y concentrar el colágeno eliminando una disolución no agregada; y
concentrar el colágeno concentrado usando una centrífuga y agitar el colágeno concentrado usando una mezcladora.
2. Método según la reivindicación 1, en el que al colágeno sometido a tratamiento enzimático se le añade cloruro de sodio a una concentración de 0, 5 ~ 0, 9 M y se agita para agregar así el colágeno, se elimina la disolución no agregada y se disuelve el colágeno agregado en agua purificada y luego se filtra usando un filtro que tiene un tamaño de poro de 2, 0 ~ 0, 5 pm.
3. Método según la reivindicación 1, en el que el dispositivo de filtración de flujo tangencial comprende una membrana de filtración de corte de peso molecular de 50 ~ 150 kDa, se añade agua purificada en una cantidad correspondiente a la cantidad de la disolución que se elimina para mantener la fluidez, se eliminan materiales más pequeños que el tamaño de poro de la membrana de filtración y se concentra el colágeno hasta 5 mg/ml o menos para que pase a través de un filtro que tiene un tamaño de poro de 0, 22 pm.
4. Método según la reivindicación 1, en el que se permite que el colágeno concentrado usando el dispositivo de filtración de flujo tangencial repose durante 4 h ~ 24 h en una condición en la que el colágeno se ajusta a un pH neutro (6, 0 ~ 8, 0) y se mantiene a una temperatura de 25 ~ 35°C, mediante lo cual se recupera el colágeno agregado y se centrifuga usando una centrífuga, concentrándose de ese modo.
5. Método según la reivindicación 1, en el que el colágeno concentrado a través de neutralización se centrifuga a una aceleración gravitacional de 4.000 ~ 6.000 g, concentrándose de ese modo, y se agita usando una mezcladora, obteniendo así colágeno a alta concentración de 120 mg/ml.
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