Método para la cuantificación de PD-L1.

Un método in vitro para la determinación cuantitativa de la expresión del Ligando de Muerte Programada 1 (PD-L1) en una muestra de biopsia líquida de Células Tumorales Circulantes (CTC),

comprendiendo dicho método las etapas:

i. someter la muestra de biopsia líquida a transcripción inversa utilizando ARN presente en la muestra como plantilla para sintetizar una secuencia de ADNc correspondiente,

ii. formar una mezcla de reacción que comprende la muestra, reactivos de amplificación de ácidos nucleicos, un par de cebadores diana, una sonda de hidrólisis diana, siendo dicho par de cebadores diana y la sonda de hidrólisis diana capaces de hibridar con el ARNm de PD-L1 y consistiendo dicho par de cebadores diana en un cebador directo diana que comprende la secuencia 5'-GCTGAATTGGTCATCCCAGAA-3' (SEQ ID NO: 4) y un cebador inverso diana que comprende la secuencia 5'-TTTCACATCCATCATTCTCCCTT-3' (SEQ ID NO: 6)

iii. someter la mezcla de reacción a condiciones de amplificación optimizadas para generar al menos una copia de una secuencia del ácido nucleico complementaria a una secuencia diana, siendo dicha secuencia diana un transcrito de ARNm de la secuencia de ARNm de PD-L1 (SEQ ID NO: 1), y

iv. determinar la cantidad de ARNm de PD-L1 en la muestra de biopsia líquida,

v. normalizar la expresión de PD-L1 con respecto a una expresión de un gen de referencia cuyos niveles de expresión permanecen constantes entre los diferentes tipos de células,

vi. comparar la cantidad de ARNm de PD-L1 expresado en dicha muestra con un control positivo que es una muestra que comprende ARNm de PD-L1 y un control negativo que es una muestra que no comprende ARNm de PD-L1 para estimar una sobreexpresión de la secuencia de ARNm de PD-L1.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GR2015/000054.

Solicitante: Pharmassist Ltd.

Nacionalidad solicitante: Grecia.

Dirección: Anthrakorichon 15 142 35 Nea Ionia, Athens GRECIA.

Inventor/es: LIANIDOU,EVRYKLEIA, STRATI,ARETI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2779309_T3.pdf

 

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