Métodos de detección in situ de ácidos nucleicos.

Un método de detección de una célula individual de un tipo determinado en una muestra que comprende una mezcla de tipos celulares,

que comprende al menos una célula del tipo determinado, en donde la célula comprende una primera diana de ácido nucleico y una segunda diana de ácido nucleico, en donde las primeras y segundas dianas de ácidos nucleicos siempre coexisten en la célula, en donde el método comprende:

(a) proporcionar una primera sonda de etiqueta que comprende una primera etiqueta, y proporcionar una segunda sonda de etiqueta que comprende una segunda etiqueta, en donde una primera señal de la primera etiqueta no se puede distinguir de una segunda señal de la segunda etiqueta;

(b) captar, en la célula, la primera sonda de etiqueta en la primera diana de ácido nucleico, cuando está presente en la célula, y la segunda sonda de etiqueta en la segunda diana de ácido nucleico, cuando está presente en la célula, en donde las primeras y segundas dianas de ácidos nucleicos son moléculas individuales, en donde captar comprende:

proporcionarle a la primera diana de ácido nucleico al menos una primera sonda de captura y proporcionarle a la segunda diana de ácido nucleico al menos una segunda sonda de captura;

captar la primera sonda de captura de la primera diana de ácido nucleico, que comprende hibridar en la célula la primera sonda de captura con el primer ácido nucleico diana, e hibridar la primera sonda de etiqueta con la primera sonda de captura, captando así la primera sonda de etiqueta con la primera diana de ácido nucleico; y

captar la segunda sonda de etiqueta de la segunda diana de ácido nucleico, que comprende hibridar en la célula la segunda sonda de captura con el segundo ácido nucleico diana, e hibridar la segunda sonda de etiqueta con la segunda sonda de captura, captando así la segunda sonda de etiqueta de la segunda diana de ácido nucleico;

(c) detectar la señal de las etiquetas;

(d) establecer una correlación entre la señal detectada a partir de la célula y la presencia o cantidad de las primeras y segundas dianas de ácidos nucleicos en la célula; y

(e) identificar la célula como del tipo determinado en función de la detección de la presencia o cantidad de las primeras y segundas dianas de ácidos nucleicos dentro de la célula, en donde el tipo determinado de célula puede distinguirse de los otros tipos celulares en la mezcla según la presencia o cantidad de la primera diana de ácido nucleico y la presencia o cantidad de la segunda diana de ácido nucleico en la célula.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/023126.

Solicitante: Advanced Cell Diagnostics, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 7707 Gateway Blvd. Newark, CA 94560 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: LUO,YULING, CHEN,SHIPING, WANG,HUEI-YU FAY, FLANAGAN,JOHN JAMES.

Fecha de Publicación: 13 de Marzo de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/6841 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Hibridación in situ.
C12Q1/6881 C12Q 1/00 […] › para la determinación del tipo de tejido o célula, p. ej. sondas de antígenos de leucocitos humanos [HLA].

PDF original: ES-2719502_T3.pdf

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