Métodos de detección de ácidos nucleicos en células individuales y de identificación de células raras en grandes poblaciones de células heterogéneas.
Un método de detección de uno o más ácidos nucleicos diana en una célula individual,
comprendiendo el método:
proporcionar una muestra que comprende una célula, y dicha célula comprende, o se sospecha que comprende, uno o más ácidos nucleicos diana;
fijar y permeabilizar la célula;
para cada ácido nucleico diana, proporcionar
(i) una o más sondas marcadoras, en las que cada sonda marcadora comprende una o más marcas,
(ii) una o más sondas marcadoras y uno o más amplificadores, en los que cada sonda marcadora comprende una o más marcas y en los que cada amplificador es capaz de hibridar con una o más sondas marcadoras, o
(iii) una o más sondas marcadoras, uno o más amplificadores y uno o más preamplificadores, en los que cada sonda marcadora comprende una o más marcas, en los que cada amplificador es capaz de hibridar con una o más sondas marcadoras y en los que cada preamplificador es capaz de hibridar con uno o más amplificadores;
para cada ácido nucleico diana, proporcionar dos o más sondas de captura diferentes, en las que cada una de las dos o más sondas de captura comprende una sección T complementaria a una sección en el ácido nucleico diana y una sección L complementaria a una sección en la sonda marcadora, o en un amplificador o en un preamplificador, y en las que las secciones T son complementarias a regiones no solapantes del ácido nucleico diana y las secciones L son complementarias a regiones no solapantes del ácido nucleico diana, el amplificador o el preamplificador;
hibridar, en la célula, las dos o más sondas de captura con una sola copia del ácido nucleico diana, cuando está presente en la célula;
capturar la sonda marcadora con las dos o más sondas de captura, capturando de este modo la sonda marcadora con el ácido nucleico diana hibridando simultáneamente al menos dos sondas de captura diferentes con una sola copia de la sonda marcadora, o hibridando simultáneamente al menos dos sondas de captura diferentes con una sola copia del amplificador e hibridando las sondas marcadoras con el amplificador; o hibridando simultáneamente al menos dos sondas de captura diferentes con una sola copia del preamplificador e hibridando el uno o más amplificadores con el preamplificador y la una o más sondas marcadoras con cada uno de los uno o más amplificadores; y
detectar una señal de la marca.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2006/023816.
Solicitante: Advanced Cell Diagnostics, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3960 Point Eden Way Hayward, CA 94545 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: LUO,YULING, CHEN,SHIPING.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2565670_T3.pdf
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