Método ultrasensible para la detección in situ de ácidos nucleicos.
Un método para detectar al menos un ácido nucleico diana, método que comprende:
(a) proporcionar una muestra que comprende, o de la que se sospecha que comprende, dicho ácido nucleico diana;
(b) proporcionar al menos un conjunto de dos o más sondas de captura capaces de hibridarse con dicho ácido nucleico diana;
(c) proporcionar un multímero generador de señales capaz de hibridarse con dicho conjunto de dos o más sondas de captura, en donde dicho multímero generador de señales comprende una sonda de marcación;
(d) proporcionar una sonda de amplificación de señales capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación, en donde dicha sonda de amplificación de señales comprende:
(i) una molécula de biotina que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación, una molécula de avidina/estreptavidina que es capaz de unirse a dicha molécula de biotina, y moléculas de biotina adicionales que están conjugadas con peroxidasa de rábano picante (HRP), fosfatasa alcalina (AP) o fluoróforos y son capaces de unirse a dicha molécula de avidina/estreptavidina;
(ii) una molécula de HRP, AP, dinitrofenilo (DNP) o fluoróforo que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación,
uno o más anticuerpos primeros que son capaces de unirse a la molécula de HRP, AP, DNP o fluoróforo, y
uno o más anticuerpos segundos que están conjugados con HRP, polímero-HRP, AP, polímero-AP o fluoróforo y son capaces de unirse a dichos uno o más anticuerpos primeros; o
(iii) una molécula de HRP que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación,
una pluralidad de moléculas de tiramida-fluoróforo o una pluralidad de moléculas de tiramida-biotina o tiramida-hapteno que son capaces de reaccionar con dicha molécula de HRP, y
marcadores de detección que permiten detectar visualmente dichas moléculas de tiramida-biotina o tiramida-hapteno;
(e) hibridar dicho ácido nucleico diana con dicho conjunto de dos o más sondas de captura;
(f) capturar el multímero generador de señales con dicho conjunto de dos o más sondas de captura y, de este modo, capturar el multímero generador de señales con dicho ácido nucleico diana;
(g) capturar dicha sonda de amplificación de señales con dicha sonda de marcación y, de este modo, capturar la sonda de amplificación de señales con dicho multímero generador de señales; y
(h) detectar la presencia, ausencia o cantidad de la señal generada por dicha sonda de amplificación de señales.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/057202.
Solicitante: Advanced Cell Diagnostics, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3960 Point Eden Way Hayward CA 94545 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: LUO,YULING, WU,XINGYONG, WANG,HUEI-YU FAY, SU,NAN, WANG,LI-CHONG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2562821_T3.pdf
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