Método ultrasensible para la detección in situ de ácidos nucleicos.
Una célula fijada y permeabilizada que comprende:
(a) al menos un ácido nucleico diana;
(b) al menos un conjunto de dos o más sondas de captura capaces de hibridarse con dicho ácido nucleico diana;
(c) un multímero generador de señales capaz de hibridarse con dicho conjunto de dos o más sondas de captura, en donde dicho multímero generador de señales comprende una sonda de marcación; y
(d) una sonda de amplificación de señales capaz de unirse con dicha sonda de marcación, en donde dicha sonda de amplificación de señales comprende:
(i) una molécula de biotina que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación,
una molécula de avidina/estreptavidina que es capaz de unirse a dicha molécula de biotina, y
moléculas de biotina adicionales que están conjugadas con peroxidasa de rábano picante (HRP), fosfatasa alcalina (AP) o fluoróforos y son capaces de unirse a dicha molécula de
avidina/estreptavidina;
(ii) una molécula de HRP, AP, dinitrofenilo (DNP) o fluoróforo que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación,
uno o más anticuerpos primeros que son capaces de unirse a dicha molécula de HRP, AP, DNP o fluoróforo, y
uno o más anticuerpos segundos que están conjugados con HRP, polímero-HRP, AP, polímero-AP o fluoróforo y son capaces de unirse a dichos uno o más anticuerpos primeros; o
(iii) una molécula de HRP que es capaz de conjugarse con dicha sonda de marcación,
una pluralidad de moléculas de tiramida-fluoróforo o una pluralidad de moléculas de tiramida-biotina o tiramida-hapteno que son capaces de reaccionar con dicha molécula de HRP, y
marcadores de detección que permiten detectar visualmente dichas moléculas de tiramida-biotina o tiramida-hapteno;
en donde dicho conjunto de dos o más sondas de captura se hibridan con dicho ácido nucleico diana de la célula;
dicho multímero generador de señales es capturado para dicho conjunto de dos o más sondas de captura y dicha sonda de amplificación de señales es capturada para dicha sonda de marcación de dicho multímero generador de señales.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15194058.
Solicitante: Advanced Cell Diagnostics, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 7707 Gateway Blvd. Newark, CA 94560 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: LUO,YULING, WU,XINGYONG, WANG,HUEI-YU FAY, SU,NAN, WANG,LI-CHONG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2648564_T3.pdf
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