Método para preparar una mezcla de proteínas homodiméricas usando efecto de repulsión de carga.

Un método para obtener una mezcla que contiene dos o más proteínas usando un único clon celular recombinante,

en donde las proteínas están en forma de un dímero que se forma por polimerización entre cadenas monoméricas, y las dos o más proteínas contienen el mismo dominio, en donde el método comprende la etapa de reemplazar parte de los restos de aminoácidos de las dos cadenas monoméricas en el mismo dominio de una o más proteínas con los restos de carga opuesta, de modo que las cadenas monoméricas de diferentes proteínas son desfavorables para formar un heterodímero debido a la interacción repulsiva entre cargas iguales, mientras que la cadena monomérica de la misma proteína es más favorable para formar un homodímero debido a la interacción atrayente entre cargas opuestas;

en donde el mismo dominio se refiere a dominio CH3 de un anticuerpo o región Fc de un anticuerpo; en donde reemplazar parte de los restos de aminoácidos de las dos cadenas monoméricas en los mismos dominios de una o más proteínas con el resto de carga opuesta se refiere a:

1) reemplazar Lys en la posición 392 con Asp, reemplazar Lys en la posición 409 con Asp y reemplazar Asp en la posición 399 con Lys de una proteína;

2) reemplazar Lys en la posición 392 con Asp, reemplazar Lys en la posición 409 con Asp y reemplazar Asp en la posición 399 con Lys de una proteína; y, simultáneamente, reemplazar Glu en la posición 357 con Lys y reemplazar Lys en la posición 370 con Glu de otra proteína; o

3) reemplazar Lys en la posición 392 con Asp, reemplazar Lys en la posición 409 con Asp y reemplazar Asp en la posición 399 con Lys de una proteína, y, simultáneamente, reemplazar Glu en la posición 356 con Lys y reemplazar Lys en la posición 439 con Glu de otra proteína; y en donde las posiciones de los restos se determinan según el índice de numeración de EU del sistema KABAT para anticuerpos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2013/080060.

Solicitante: Jiangsu Alphamab Biopharmaceuticals Co., Ltd.

Nacionalidad solicitante: China.

Dirección: Rm 310, Building G, No. 388 Ruoshui Road, SIP, Suzhou Jiangsu 215125 CHINA.

Inventor/es: XU, TAO, FAN,YING, XU,TING, WANG,XIAOXIAO, SUN,XINGLU, ZENG,YAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K35/00 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción.
  • A61K39/385 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Haptenos o antígenos, unidos a soportes.
  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C07K16/46 C07K 16/00 […] › Inmoglobulinas híbridas (híbridos de una inmunoglobulina con un péptido distinto de una inmunoglobulina C07K 19/00).
  • C12N15/09 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12P21/00 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00).

PDF original: ES-2710936_T3.pdf

 

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